热休克蛋白70相关蛋白在中耳乳突胆脂瘤中的表达与定位
作者：李正贤 李学佩 刘庚勋
单位：
李正贤(长沙 广州军区第一六三中心医院耳鼻咽喉科 410003)；刘庚勋(病理科)；李学佩(北京医科大学第三临床学院耳鼻咽喉科)
关键词：
中华耳鼻咽喉科杂志000124 热休克蛋白(heat shock proteins,HSP)是生物细胞在受到各种损伤因素刺激时产生的高度保守的蛋白质。大量实验证明HSP参与炎症和免疫反应[1-3]。中耳胆脂瘤是中耳的慢性炎症性疾病，研究和探讨中耳胆脂瘤 HSP的表达与定位，了解HSP在中耳胆脂瘤的病因及发病机理中的作用具有重要意义。本研究主要观察HSP70相关蛋白在中耳胆脂瘤中的表达与定位。
一、材料与方法
, http://www.100md.com
1. 检测标本：16例中耳乳突胆脂瘤组织从1997～1999年的中耳乳突手术中获得，4例面部皮肤从面部外伤以及面部美容手术中获得，2例外耳道皮肤及鼓膜取材于新鲜尸体标本。
2. 抗体：HSP70单克隆抗体、普通小鼠IgG购自美国Santa Cruz公司。
3. 过氧化酶标记的链霉卵白素染色试剂盒，购自北京中山公司。
4. 方法(微波SP法)： 石蜡切片，厚3～5 μm，常规脱蜡至水洗；3%过氧化氢孵育5 min，消除内源性过氧化物酶活性；蒸馏水冲洗，磷酸缓冲液(phosphate buffered solution，PBS)浸泡5 min；微波炉抗原修复；5%正常山羊血清室温孵育10 min，倾去血清，加入1∶50 HSP70单克隆抗体，37℃孵育30 min，用普通小鼠IgG代替HSP70单克隆抗体做对照，PBS冲洗，5 min 3次；滴加生物素标记的二抗37℃孵育30 min，PBS冲洗，3 min 3次；辣根酶标记的链霉卵白素37℃孵育30 min，PBS冲洗，3 min 3次；二氨基联苯胺显色，自来水冲洗，苏木素复染，中性树胶封片，显微镜观察照像。
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二、结果
HPS70相关蛋白定位于胆脂瘤上皮的全层角质细胞的细胞质及细胞核(图1)，胆脂瘤上皮下肉芽组织中巨噬细胞也有HSP70相关蛋白的表达，对照组胆脂瘤上皮未见HSP70相关蛋白染色。正常外耳道皮肤、面部皮肤和鼓膜除上皮基底层的增殖细胞有HSP70相关蛋白染色外，无明显的阳性染色(图2)。
图1 HSP70阳性细胞在细胞质及细胞核均有表达.SP法×400
图2 正常外耳道皮肤和鼓膜的基底细胞层有HSP70相关蛋白阳性
三、讨论
本研究应用单克隆抗体HSP70经免疫组织化学方法观察HSP70相关蛋白在中耳胆脂瘤上皮的表达与分布。免疫定位显示HSP70相关蛋白定位于胆脂瘤上皮全层角质细胞的细胞质与细胞核，在上皮下的肉芽组织中的巨噬细胞亦有表达，其结果与Shinoda等[4]研究结果一致,而在正常外耳道皮肤、鼓膜及面部皮肤仅在基底层有HSP70相关蛋白的表达，证明胆脂瘤上皮处在增殖阶段。研究发现细胞间粘附分子-1(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)在胆脂瘤上皮及肉芽组织中也有表达。我们考虑HSP70相关蛋白与巨噬细胞以及ICAM-1在中耳乳突胆脂瘤的免疫反应中可能有协同作用。HSP并非人类所特有，病原微生物也有HSP，而细菌HSP、组织自身抗原、真核细胞HSP有共同的抗原决定簇，通过分子模拟和序列同源引发自身免疫反应，导致程序细胞(programmed cell)的死亡，角化碎屑的堆积，最终形成胆脂瘤。但是目前热休克蛋白在胆脂瘤中产生的机制仍不清楚，有待进一步研讨。
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参考文献：
[1]Egusa K,Huang CC,Haddad J Jr.Heat shock proteins in acute otitis media. Laryngoscope,1995,105:708-713.
[2]DeNagel DC,Pierce SK.Heat shock proteins in immune responses. Crit Rev Immunol,1993,13:71-81.
[3]Polla BS, Kantengwa S.Heat shock proteins and inflammation. Curr Top Microbiol Immunol,1991,167:93-105.
[4]Shinoda H, Huang CC. Heat shock proteins in middle ear cholesteatoma. Otolaryngol Head Neck Surg,1996,114:77-83.
收稿日期：1999-05-07, http://www.100md.com
单位：
李正贤(长沙 广州军区第一六三中心医院耳鼻咽喉科 410003)；刘庚勋(病理科)；李学佩(北京医科大学第三临床学院耳鼻咽喉科)
关键词：
中华耳鼻咽喉科杂志000124 热休克蛋白(heat shock proteins,HSP)是生物细胞在受到各种损伤因素刺激时产生的高度保守的蛋白质。大量实验证明HSP参与炎症和免疫反应[1-3]。中耳胆脂瘤是中耳的慢性炎症性疾病，研究和探讨中耳胆脂瘤 HSP的表达与定位，了解HSP在中耳胆脂瘤的病因及发病机理中的作用具有重要意义。本研究主要观察HSP70相关蛋白在中耳胆脂瘤中的表达与定位。
一、材料与方法
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1. 检测标本：16例中耳乳突胆脂瘤组织从1997～1999年的中耳乳突手术中获得，4例面部皮肤从面部外伤以及面部美容手术中获得，2例外耳道皮肤及鼓膜取材于新鲜尸体标本。
2. 抗体：HSP70单克隆抗体、普通小鼠IgG购自美国Santa Cruz公司。
3. 过氧化酶标记的链霉卵白素染色试剂盒，购自北京中山公司。
4. 方法(微波SP法)： 石蜡切片，厚3～5 μm，常规脱蜡至水洗；3%过氧化氢孵育5 min，消除内源性过氧化物酶活性；蒸馏水冲洗，磷酸缓冲液(phosphate buffered solution，PBS)浸泡5 min；微波炉抗原修复；5%正常山羊血清室温孵育10 min，倾去血清，加入1∶50 HSP70单克隆抗体，37℃孵育30 min，用普通小鼠IgG代替HSP70单克隆抗体做对照，PBS冲洗，5 min 3次；滴加生物素标记的二抗37℃孵育30 min，PBS冲洗，3 min 3次；辣根酶标记的链霉卵白素37℃孵育30 min，PBS冲洗，3 min 3次；二氨基联苯胺显色，自来水冲洗，苏木素复染，中性树胶封片，显微镜观察照像。
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二、结果
HPS70相关蛋白定位于胆脂瘤上皮的全层角质细胞的细胞质及细胞核(图1)，胆脂瘤上皮下肉芽组织中巨噬细胞也有HSP70相关蛋白的表达，对照组胆脂瘤上皮未见HSP70相关蛋白染色。正常外耳道皮肤、面部皮肤和鼓膜除上皮基底层的增殖细胞有HSP70相关蛋白染色外，无明显的阳性染色(图2)。
图1 HSP70阳性细胞在细胞质及细胞核均有表达.SP法×400
图2 正常外耳道皮肤和鼓膜的基底细胞层有HSP70相关蛋白阳性
三、讨论
本研究应用单克隆抗体HSP70经免疫组织化学方法观察HSP70相关蛋白在中耳胆脂瘤上皮的表达与分布。免疫定位显示HSP70相关蛋白定位于胆脂瘤上皮全层角质细胞的细胞质与细胞核，在上皮下的肉芽组织中的巨噬细胞亦有表达，其结果与Shinoda等[4]研究结果一致,而在正常外耳道皮肤、鼓膜及面部皮肤仅在基底层有HSP70相关蛋白的表达，证明胆脂瘤上皮处在增殖阶段。研究发现细胞间粘附分子-1(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)在胆脂瘤上皮及肉芽组织中也有表达。我们考虑HSP70相关蛋白与巨噬细胞以及ICAM-1在中耳乳突胆脂瘤的免疫反应中可能有协同作用。HSP并非人类所特有，病原微生物也有HSP，而细菌HSP、组织自身抗原、真核细胞HSP有共同的抗原决定簇，通过分子模拟和序列同源引发自身免疫反应，导致程序细胞(programmed cell)的死亡，角化碎屑的堆积，最终形成胆脂瘤。但是目前热休克蛋白在胆脂瘤中产生的机制仍不清楚，有待进一步研讨。
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参考文献：
[1]Egusa K,Huang CC,Haddad J Jr.Heat shock proteins in acute otitis media. Laryngoscope,1995,105:708-713.
[2]DeNagel DC,Pierce SK.Heat shock proteins in immune responses. Crit Rev Immunol,1993,13:71-81.
[3]Polla BS, Kantengwa S.Heat shock proteins and inflammation. Curr Top Microbiol Immunol,1991,167:93-105.
[4]Shinoda H, Huang CC. Heat shock proteins in middle ear cholesteatoma. Otolaryngol Head Neck Surg,1996,114:77-83.
收稿日期：1999-05-07, http://www.100md.com