A组链球菌咽炎的快速诊断方法
作者：董太明 黄震东 陈剑光 吴红穗 罗健 符永恒 陈志红
单位：510080 广东省人民医院 广东省心血管病研究所风湿热实验室
关键词：
中华儿科杂志980223.htm 风湿热(RF)的发生仅仅与A组链球菌(GAS)的上呼吸道感染有关，因而GAS咽炎的早期诊断很重要。我们尝试应用葡萄球菌蛋白A(SPA)-协同凝集试验快速检测GAS，并作兰菲分组，以对照研究该法的敏感性和特异性。
材料：用涤纶咽拭子对门诊222例急性咽炎患儿取咽分泌物各2份，一份作快速检测，另一份接种到5%羊血平板，35℃培养18～24小时，发现有β-溶血菌落的血平板，分离作纯培养后按WHO工作手册作兰菲分组确证。
32132A组链球菌标准菌株由美国明尼苏达大学世界卫生组织(WHO)链球菌研究和参考合作中心惠赠。
, 百拇医药
方法：(1)按WHO工作手册规定方法制备兔抗GAS血清，抗体效价1∶16，按说明与SPA菌体试剂(卫生部上海生物制品研究所)混合制成快速诊断试剂。(2)取含急性咽炎咽分泌物的涤纶咽拭子，浸于含0.3 ml无菌生理盐水的小试管中，浸泡3分钟，尽量挤出所含的液体，室温 1 500 r/min离心10分钟，弃去上清液，沉淀物加2 mol/L的亚硝酸钠20 μl，33%冰乙酸10 μl，混匀后置室温反应5分钟，加0.05%酚红5 μl，用5 mol/L的NaOH调节颜色至橙色。室温下1 500 r/min离心10分钟。(3)取15 μl上述抽提液，置于黑色反应板上，加15 μl的快速检测试剂，充分混匀后，在2分钟内观察结果，出现粗大颗粒、液体透明者判为阳性；无颗粒出现、液体呈白色混悬液者判为阴性。每次试验均采用阳性对照、阴性对照、SPA标记未免疫兔血清对照、SPA菌体悬液自身对照。
结果：222例标本对照研究中，192份为完全符合，总体符合率为86.5%，其中敏感性77.0%，特异性92.6%，阳性期待值87.0%，阴性期待值86.2%。我们发现，SPA-协同凝集试验检出阳性率与咽拭子培养的菌落数有关，菌落数越多者，阳性率越高；反之则越低。根据血平板培养β-溶血菌落计数分为4个等级：(1)<10个菌落，(2)为11～50个菌落，(3)为51～100个菌落，(4)为多于100个以上、满布平板。本组(4)者总共26例，SPA检出25例，敏感性达96.1%，而(1)者敏感性仅50.0%。假阴性20例，其中9例出现在(1)，6例出现在(2)，二者合计占假阴性75.0%，如果(1)被认为是病菌携带者，敏感性达到84.0%。
, 百拇医药
讨论：GAS急性咽炎的早期诊断一直是困扰临床医师的一个难题，GAS急性咽炎的早期诊断如果单纯依靠临床表现，则很难与其他微生物感染的咽炎(如常见的病毒性咽炎)相鉴别，因而临床需要有快速检测GAS的方法，帮助临床医师对急性咽炎患儿在初次就诊时作出快速的诊断，使患儿获得恰当的治疗，从而达到有效预防RF的目的，并能减少儿童之间GAS传播的机会；对于非GAS咽炎中的病毒性感染则可避免使用抗生素，减少抗生素耐药和副作用发生的机会。
SPA-协同凝集试验是较为常用的几种快速检测GAS方法之一，其特点是快速，仅需20～30分钟；简便易操作，不需要复杂设备，在普通临床实验室即可开展此项工作；结果容易判读，并且成本低。国外对此研究较多，其敏感性大多在70%～90%之间，特异性一般都较好，多在90%～100%之间。而本组的检测结果与之相比，敏感性略低，特异性尚可。快速检测GAS的各种方法对菌落数少的患者敏感性均较低，SPA-协同凝集方法也存在类似的问题，当菌落数小于10个时，本组的敏感性仅有50.0%。
总之，SPA-协同凝集试验用于A组链球菌咽炎的诊断，具有快速、价廉、简便易操作的特点，特异性较高，但敏感性尚不令人满意。
(收稿：1996-11-04 修回：1997-05-20), http://www.100md.com
单位：510080 广东省人民医院 广东省心血管病研究所风湿热实验室
关键词：
中华儿科杂志980223.htm 风湿热(RF)的发生仅仅与A组链球菌(GAS)的上呼吸道感染有关，因而GAS咽炎的早期诊断很重要。我们尝试应用葡萄球菌蛋白A(SPA)-协同凝集试验快速检测GAS，并作兰菲分组，以对照研究该法的敏感性和特异性。
材料：用涤纶咽拭子对门诊222例急性咽炎患儿取咽分泌物各2份，一份作快速检测，另一份接种到5%羊血平板，35℃培养18～24小时，发现有β-溶血菌落的血平板，分离作纯培养后按WHO工作手册作兰菲分组确证。
32132A组链球菌标准菌株由美国明尼苏达大学世界卫生组织(WHO)链球菌研究和参考合作中心惠赠。
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方法：(1)按WHO工作手册规定方法制备兔抗GAS血清，抗体效价1∶16，按说明与SPA菌体试剂(卫生部上海生物制品研究所)混合制成快速诊断试剂。(2)取含急性咽炎咽分泌物的涤纶咽拭子，浸于含0.3 ml无菌生理盐水的小试管中，浸泡3分钟，尽量挤出所含的液体，室温 1 500 r/min离心10分钟，弃去上清液，沉淀物加2 mol/L的亚硝酸钠20 μl，33%冰乙酸10 μl，混匀后置室温反应5分钟，加0.05%酚红5 μl，用5 mol/L的NaOH调节颜色至橙色。室温下1 500 r/min离心10分钟。(3)取15 μl上述抽提液，置于黑色反应板上，加15 μl的快速检测试剂，充分混匀后，在2分钟内观察结果，出现粗大颗粒、液体透明者判为阳性；无颗粒出现、液体呈白色混悬液者判为阴性。每次试验均采用阳性对照、阴性对照、SPA标记未免疫兔血清对照、SPA菌体悬液自身对照。
结果：222例标本对照研究中，192份为完全符合，总体符合率为86.5%，其中敏感性77.0%，特异性92.6%，阳性期待值87.0%，阴性期待值86.2%。我们发现，SPA-协同凝集试验检出阳性率与咽拭子培养的菌落数有关，菌落数越多者，阳性率越高；反之则越低。根据血平板培养β-溶血菌落计数分为4个等级：(1)<10个菌落，(2)为11～50个菌落，(3)为51～100个菌落，(4)为多于100个以上、满布平板。本组(4)者总共26例，SPA检出25例，敏感性达96.1%，而(1)者敏感性仅50.0%。假阴性20例，其中9例出现在(1)，6例出现在(2)，二者合计占假阴性75.0%，如果(1)被认为是病菌携带者，敏感性达到84.0%。
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讨论：GAS急性咽炎的早期诊断一直是困扰临床医师的一个难题，GAS急性咽炎的早期诊断如果单纯依靠临床表现，则很难与其他微生物感染的咽炎(如常见的病毒性咽炎)相鉴别，因而临床需要有快速检测GAS的方法，帮助临床医师对急性咽炎患儿在初次就诊时作出快速的诊断，使患儿获得恰当的治疗，从而达到有效预防RF的目的，并能减少儿童之间GAS传播的机会；对于非GAS咽炎中的病毒性感染则可避免使用抗生素，减少抗生素耐药和副作用发生的机会。
SPA-协同凝集试验是较为常用的几种快速检测GAS方法之一，其特点是快速，仅需20～30分钟；简便易操作，不需要复杂设备，在普通临床实验室即可开展此项工作；结果容易判读，并且成本低。国外对此研究较多，其敏感性大多在70%～90%之间，特异性一般都较好，多在90%～100%之间。而本组的检测结果与之相比，敏感性略低，特异性尚可。快速检测GAS的各种方法对菌落数少的患者敏感性均较低，SPA-协同凝集方法也存在类似的问题，当菌落数小于10个时，本组的敏感性仅有50.0%。
总之，SPA-协同凝集试验用于A组链球菌咽炎的诊断，具有快速、价廉、简便易操作的特点，特异性较高，但敏感性尚不令人满意。
(收稿：1996-11-04 修回：1997-05-20), http://www.100md.com