当前位置: 首页 > 期刊 > 《中华儿科杂志》 > 1998年第3期
编号:10269026
693株细菌的药物敏感试验及质粒分析
http://www.100md.com 《中华儿科杂志》 1998年第3期
     作者:吴仕孝 沈犁 余加林 唐军 唐毅 彭若奇 刘友学 尚世强 张万明

    单位:400014 重庆医科大学儿科研究所

    关键词:微生物敏感性试验;质粒;丁胺卡那霉素

    中华儿科杂志/980311 【摘要】 目的 研究693株细菌的药物敏感状况与其质粒的关系。方法 用改良Birnboim法提

    取质粒,对1986~1990年693株细菌进行药敏试验。 结果 金黄色葡萄球菌的1.9 U质粒带有10种耐

    药基因,此耐药质粒在我院烧伤病室广泛传播;致病性大肠杆菌(EPEC)O127∶H6的60 U质粒带有3种耐

    药基因;鼠伤寒沙门菌的98kb质粒带有5种。1986年庆大霉素、苯唑西林、红霉素、头孢噻肟对金黄色
, http://www.100md.com
    葡萄球菌均100%敏感,但1989年已分别降至48.1%、46.9%、9.9%、7.4%,对阿米卡星仍有97.5%敏感;

    阿米卡星对鼠伤寒沙门菌、EPEC O127∶H6、绿脓杆菌的敏感率分别为96.9%、95.5%、94.3%。

    结论 阿米卡星适用于国内新生儿败血症的治疗。

    Plamsid analysis and antibiotic susceptibility testing of 693 strains of bacteria

    Wu Shixiao, Shen Li, Yu Jialin, et al.

    Children′s Hospital, Chongqing Medical University, Chongqing 400014
, 百拇医药
    【Abstract】 Objective To study the antibiotic susceptibility of 693 strains of bacteria and its relation to the plasmid. Methods A modified Birnboim method was used for plasmid extraction. Results A 60 U plasmid of

    EPEC O127: H6 carried multiresistant genes to 3 antibiotics; a 98 kb plasmid of S.typhimurium possessed multi-resistant

    genes to 5 antibiotics; and a 1.9 U plasmid of S. aureus carried multi-resistant genes to 10 antibiotics. The sensitivity rates
, 百拇医药
    of S. aureus to gentamicin, oxacillin, erythromycin and cephalothin were all 100% in 1986, but they dropped to 48.1%,46.9%, 9.9% and 7.4%, respectively, in 1988-1989. During this peroid, however, 97.5% of S. auerus continued to be sensitive to amikacin. The sensitivity rates of S. typhimurium, EPEC and P. aeruginosa to amikacin were 96.9%, 95.5%,and 94.3%, respectively. Conclusion Amikacin may be the drug of choice in treatment of neonatal septicemia in China.

, 百拇医药     【Key words】 Microbial sensitivity tests Plasmids Amikacin

    很多细菌对庆大霉素等抗生素的耐药性在逐年增高,但对阿米卡星(丁胺卡那霉素)至今仍较敏感。

    现将1986年3月~1990年12月从我院、重庆市第三人民医院及妇幼保健院和南充专区医院分离出的693株

    细菌对阿米卡星等抗生素的药物敏感试验(简称药敏试验)结合质粒分析报道如下。

    资料和方法

    一、标本来源 一、标本来源

    1.甲产婴室:1986年3~5月从1 358份标本分离出的金黄色葡萄球菌(简称金葡菌)中挑选105株(产
, http://www.100md.com
    婴

    鼻孔与脐部61株,脓疮、眼及脐脓液23株、医护人员手指和鼻孔20株,母亲阴道1株)。

    2.乙产婴室(重庆市第三人民医院)1986年6月从98份标本中分离出金葡菌22株(患儿鼻孔6株、脓疱液5株、血液3株,医护人员鼻孔7株、手指1株)。

    3.我院外科病房:1986年7月~1987年2月从20例新生儿检出49株金葡菌,皮下坏疽部位(25株)及其鼻

    孔(10株)、手指(8株)及血液(1株),陪伴家属鼻孔(5株)。

    4.南充专区医院新生儿室:1987年4~5月从264份标本中分离出鼠伤寒沙门菌32株(患儿粪便19株及其血液7株,首例患儿母粪便,外科病儿及一产妇粪便、病室地面、奶瓶外表、护士手各1株)。
, http://www.100md.com
    5.重庆妇幼保健院及我院新生儿室:1987年5~6月从359份标本中分离出大肠杆菌(EPEC)O127∶H6 66株(患儿粪便42株及其血及咽部各1株,首例患儿母亲粪便及其阴道各1株,尿布10株,地板4株,医护人员手指

    6株)。

    6.我院新生儿室:1988年~1990年2月从701份标本中挑选出75株凝固酶阴性葡萄球菌(CNS)(患儿血液68株、脑脊液5株、脓疮液2株)。

    7.我院烧伤病室:1988年4月~1989年2月从1 544份标本中分离出276株金葡菌,挑选出81株(患儿创面

    41株,患儿及其家属与医护人员鼻孔和手指40株)。

    8.我院儿科重症监护室(PICU)、烧伤病室与普通病房:1989年9月~1990年11月分离出绿脓杆菌159株
, 百拇医药
    (环境及用具24株,患儿呼吸道分泌物及呼吸机18株来自PICU;患儿创面40株及环境用具19株来自烧伤病

    室;患儿痰50株、用具8株来自普通病房)。

    9.我院新生儿室:1990年10~12月分离出不动杆菌189株,从中挑选出104株(患儿血67株、工作人员手

    指10株,医疗用具12株,空气15株)。

    二、质粒分析

    按改良Birnboim法[1]提取质粒DNA。

    三、药敏试验

    EPEC、鼠伤寒沙门菌及绿脓杆菌的药敏试验采用微量稀释法[2],其他细菌的药敏试验采用改良Kirby-Bauer纸片琼脂扩散法。14种抗菌药纸片及质控标准株大肠杆菌美国标准菌种(ATCC)25 922、金葡
, http://www.100md.com
    菌ATCC 25 923、绿脓杆菌ATCC 27 853均购自上海医学化验所。

    结果

    一、药敏试验 一、药敏试验

    1.693株细菌药敏试验结果表明,阿米卡星1986~1987年对金葡菌100%敏感,1988~1989年仍有97.5%

    敏感,对CNS亦有76.0%敏感,仅次于万古霉素;对绿脓杆菌与头孢他啶(复达欣)相同,均94.3%敏感,对

    鼠伤寒沙门菌、EPEC O127∶H6的敏感率亦分别为96.9%、95.5%;对不动杆菌的敏感率较差,只有43.3%,仅次于头孢噻肟(62.5%)。

    2.1986年3~5月105株金葡菌对苯唑西林、庆大霉素、红霉素、头孢噻肟均100%敏感,但1986年6月~1989年2月152株金葡菌对上述药物敏感率分别降至46.9%~48.1%、9.9%、7.4%。
, 百拇医药
    3.万古霉素对金葡菌及CNS均100%敏感。

    4.159株绿脓杆菌对阿米卡星94.3%敏感,但对庆大霉素仅23.3%敏感,对第一代头孢唑啉仅5.7%敏感,第二代头孢呋新均耐药,对第三代头孢他啶、头孢哌酮、头孢三嗪、头孢噻肟的敏感率分别为94.3%、64.6%、49.1%、40.9%。对羧苄青霉素也44.1%耐药。对庆大霉素的耐药率烧伤病室(84.8%)与PICU(92.9%)

    均明显高于普通病房(58.6%)(χ2=19.2,P<0.01)。

    二、质粒分析

    1.甲产婴室:仅29.9%金葡菌含质粒,含1.4、1.7百万U质粒的流行株仅见于患儿病灶脓液(8株)及其

    鼻孔与脐部(8株)、护士鼻孔(2株)及其手指(3株)[3]。一医生鼻孔的金葡菌含1.9、2.8、5.0 U 3种质
, http://www.100md.com
    粒,对6种抗生素耐药,一产婴鼻孔不含质粒的金葡菌仅耐青霉素。

    2.乙产婴室:12株流行株含2.8 U质粒与另5株含1.65、2.0、3.4 U质粒金葡菌的耐药率均高于5株不

    含质粒者,后者也耐青霉素。

    3.儿外科病房:98%金葡菌含质粒,22株流行株含2.8、4.2、28.5~31千碱基对(kb)3种质粒[4],对

    4~9种抗生素耐药,含两种质粒株(2.8、3.0 kb)仅耐青霉素、氨苄西林、红霉素;含一质粒者(28.5或31 kb)仅耐青霉素、氨苄西林;而一株不含质粒的金葡菌对14种药物均敏感,提示质粒与金葡菌的耐药性关系

    密切。

    4.南充专区医院新生儿室:30株鼠伤寒沙门菌含98、6.7、3.3 kb质粒,用5%十二烷基硫酸钠(SDS)+44.5℃消除98 kb质粒后,质粒消除株对氨苄西林、氯霉素、四环素、链霉素、庆大霉素的耐药性消失
, 百拇医药
    [5],表明98 kb质粒系耐药(R)质粒,它编码了对上述5种抗生素的耐药基因。

    5.重庆妇幼保健院及我院新生儿室:66株EPEC O127∶H6 含60、1.5 U质粒,用溴化乙锭(50 μg/ml)

    消除60 U质粒后,对氨苄西林、氯霉素、四环素从耐药变为敏感[6],其最小抑制浓度(MIC)从64、32、16 mg/L分别降至4、1、4 mg/L,表明60 U质粒系R质粒,它编码了对以上3种抗生素的耐药基因。

    6.我院新生儿室:96%CNS含质粒[7]。多重耐药菌株55.9%(33/59)产粘质,非多重耐药株仅18.6%

    (3/16)产粘质(P<0.01),提示产粘质的CNS更加耐药。
, http://www.100md.com
    7.我院烧伤病室:38株金葡菌含1.6、1.9 U质粒,对11种药物耐药[8],所有含1.6 U质粒的金葡菌

    均耐红霉素,而不含1.6 U的6株对红霉素均敏感,提示1.6 U质粒编码了对红霉素的耐药基因,1.9 U质

    粒带有对10种药物的耐药基因。

    8.我院PICU等:绿脓杆菌62.1%(87/140)含有质粒,55株含2~6种质粒,32株含一种质粒。含质粒株对

    庆大霉素的耐药率(89.7%)明显高于不含质粒株者(58.5%)(χ2=18.5,P<0.01)[9]

    9.我院新生儿室:不动杆菌87.3%含有质粒,56株流行株均含30.1、3.1、2.5、2.0 kb 4种质粒
, http://www.100md.com
    [10]

    讨论

    细菌的多重耐药性主要由耐药(R)质粒介导,带有多重耐药基因的R质粒和带耐药基因的转座子[可

    分离开的特征性遗传单位(DNA顺序)可插入到细菌的质粒(染色体外的DNA)或染色体DNA中某一部位]在细

    菌之间广泛传播是导致世界各地细菌耐药性不断增加的主要原因。R质粒带有多种耐药基因,如本组EPEC O127∶H6的60质粒带有对3种抗生素的耐药基因;鼠伤寒沙门菌的98 kb质粒带有对5种抗生素的耐药基因;

    金葡菌的1.9 U质粒带有10种,此R质粒在我院烧伤病室广泛传播,使38株流行株高度耐药。

, 百拇医药     含质粒细菌的耐药性一般高于不含质粒者,如本研究甲产婴室含3种质粒的金葡菌对6种抗生素耐药,不含质粒的金葡菌仅耐青霉素;乙产婴室含质粒的金葡菌也都高于5株不含质粒者,但后者也耐青霉素;

    我院PICU的绿脓杆菌含质粒株对庆大霉素的耐药率(89.7%)明显高于不含质粒株(58.5%)。不含质粒细菌

    的耐药性一般由染色体介导如甲、乙产婴室不含质粒的金葡菌也耐青霉素。

    国内新生儿败血症主要由葡萄球菌,其次为大肠杆菌等G-杆菌所致,故用阿米卡星治疗非常合理,因1986~1989年金葡菌对它的敏感率一直>97%,而对庆大霉素、红霉素、苯唑西林、头孢噻肟的敏感率

    均明显降低;它对EPEC、鼠伤寒沙门菌及绿脓杆菌的敏感率分别为95.5%、96.9%及94.3%,远远超过对庆
, 百拇医药
    大霉素的敏感率为(84.6%、0%、23.3%)。张凤凯等[11]报告北京1995年10 305株细菌的药敏试验,阿米

    卡星对1 461株大肠杆菌仅8%耐药,克雷白杆菌(877株)的耐药率亦仅9%,肠杆菌属(872株)亦仅9%耐药;1 014株CNS亦仅11%耐药。可惜阿米卡星对肺炎球菌、链球菌不够敏感,但这两种细菌在国内新生儿败血症

    中很少见。

    参考文献

    1 吴仕孝,沈犁,唐军,等.质粒分析在新生儿葡萄球菌感染中的应用.中华儿科杂志,1987,25:

    199-202.

    2 Rosenblatt JE. Antimicrobial susceptibility testing of anaerobes. In: Lorian V, ed. Antibiotic in laboratory medicine. Baltimore: William, 1980.98-99.
, 百拇医药
    3 Wu SX, Shen Li. Plasmid analysis and phage typing in the study of staphylococcal colonization and disease in

    newborn infants. Chin Med Sci J, 1993,8:157-161.

    4 Wu SX Jun Tang. Epidemiologic study of neonatal subcutaneous gangrene caused by multi-resistant Staphylococcus aureus. Acta Paediatr Scand, 1989,78:222-227.

    5 Wu SX, Tang Y. Molecullar epidemiologic study of an outbreak of Salmonella typhimurium at a newborn nursery.
, 百拇医药
    Chin Med J, 1993,106:423-427.

    6 Wu SX, Peng RQ. Studies on an outbreak of neonatal diarrhea caused by EPEC O127: H6 with plasmid analysis. restriction analysis and outer membrane protein determination. Acta Paediatr, 1992,81:217-221.

    7 尚世强,吴仕孝.质粒及限制酶分析对新生儿凝固酶阴性葡萄球菌败血症的研究.中华传染病杂志,1993,11:130-133.

    8 刘友学,吴仕孝.烧伤患儿创面金黄色葡萄球菌感染来源的探讨.中华流行病学杂志,1991,12:273-276.

    9 余加林,吴仕孝,刘官信.儿童医院159株绿脓杆菌药敏试验及质粒分析.实用儿科临床杂志,1993,8:57-59.

    10 张万明,吴仕孝,刘官信.质粒、限制酶分析和外膜蛋白测定对医院内暴发流行新生儿不动杆菌败血

    症的研究.中华儿科杂志,1992,30:102.

    11 张凤凯,金少鸿,吴铨,等.北京地区部分医院细菌对常用抗生素耐药性现状及变迁.中华医学杂志,1997,77:327-331., 百拇医药