苦参合剂对大鼠隐孢子虫感染的预防作用
作者：史长松 任爱巧 姚福宝 陈有贵
单位：450003 郑州，河南省人民医院小儿科(史长松，原在徐州医学院儿科研究室)；郑州黄河中心医院(任爱巧)；徐州医学院(姚福宝、陈有贵)
关键词：
中华儿科杂志/980520 隐孢子虫(cryptosporidium, CPS)感染迄今尚无特效治疗药物。作者拟用动物实验研究苦参合剂对CPS感染的预防作用。
材料与方法：隐孢子虫卵囊(cryptosporidium oocyst, CSO)收集：CSO来源于一患儿新鲜粪便，按参考文献[1]报告的方法分离纯化CSO，以磷酸缓冲溶液保存于4℃备用。感染动物前，将CSO悬液行细菌、霉菌、轮状病毒、贾第虫检测(简称四项检测)，均阴性。
CPS感染模型的建立及分组：实验第1～17天，给大鼠地塞米松(dexamethasone, DEX)每只2 mg*kg-1*d-1，每天一次，灌胃。第8天一次性灌胃接种每只5×106个CSO。SD大鼠50只，2月龄，雌性，随机分为5组(每组10只)。第1组：DEX+CSO+3 ml*kg-1*d-1苦参合剂(分两次灌胃，实验第1～17天使用；下同)；第2组：DEX+CSO+15 ml*kg-1*d-1苦参合剂；第3组：DEX+CSO；第4组：单纯DEX组；第5组：对照组。采用单只分笼饲养，房间、笼具、饮水、饲料均行消毒，并在饮水中加四环素，含量为1 mg/ml，以预防细菌感染。实验前一周，采集大鼠粪便进行CSO及四项检测，均阴性。
, 百拇医药
药物：苦参20 g、秦皮20 g、黄柏20 g、麦芽40 g按煎制方法煎成60 ml。
效果指标：(1)一般状况：包括精神、反应、毛色、活动、摄食及粪便性状；测定并记录体重变化。(2)粪排CSO情况：每日用硫酸锌浮聚法检查粪CSO并进行密度计分[2]。(3)病理检查：实验第18天，解剖所有动物，进行肠道感染记分[3]。(4)免疫功能检查：脾脏组织学检查；白细胞总数及淋巴细胞分类计数；CD3、CD4亚群检测：大鼠经摘眼球取血，用冻干抗体致敏的红细胞花环试剂盒(武汉生物制品研究所提供)按要求测定。(5)所得数据用±s表示，组间比较用方差分析。
结果：动物的一般状况：第1～4组鼠经DEX灌胃7天后，均表现出免疫抑制症状：神萎，反应迟钝，毛色光泽消失，体毛稀疏，摄食减少，体重下降；第5组表现无异常，体重增加。所有动物均未出现腹泻症状。
, 百拇医药
粪便CSO排出情况：感染后第6、7、8、9天，第1组鼠的粪排CSO密度分低于第3组，差异显著(P<0.05)或非常显著(P<0.01)。第2组与第3组的粪排CSO密度分无差异(P>0.05)。第4、5两组鼠粪检CSO始终阴性。
病理检查：第1组肠道感染分(1.7±0.5)明显低于第3组(3±0)(P<0.01)，第2组(2.8±0.4)和第3组无差别(P>0.05)。
免疫功能检查：(1)第1～4组与第5组相比，脾淋巴小结体积缩小，数量减少，以第3组最明显，第1组脾内巨噬细胞相对较多。(2)第1组的CD3、CD4细胞百分率大于第2、3、4组，差异非常显著(P<0.01)，且与对照组相似(P>0.05)；第2组与第4组比较无差异(P>0.05)。血白细胞总数和淋巴细胞绝对数结果与CD3、CD4细胞百分率结果相似。
, 百拇医药
讨论：中药苦参属清热燥湿药，有抗滴虫、抗真菌、解热等作用，治疗贾第虫有一定功效。本组以苦参为主配伍黄柏、秦皮、麦芽，以期能达到对大鼠CPS感染的预防作用。结果表明：3 ml*kg-1*d-1苦参合剂能降低大鼠粪排CSO量，降低动物肠道感染分，并能增强大鼠的免疫功能，但15 ml*kg-1*d-1苦参合剂却无上述效果，其原因尚有待进一步研究。陈有贵等报道[4]，该药能进入CSO内，可能对CSO内的子孢子具有一定杀灭作用。苦参合剂对CPS感染的预防作用可能与下列因素有关：(1)直接作用于虫体；(2)提高机体的免疫力。另外，免疫抑制大鼠接种CSO后，血CD3细胞和CD4细胞的水平进一步降低，白细胞总数和淋巴细胞绝对数也进一步减少(第3组与第4组比)，提示：CPS感染可进一步降低宿主的免疫功能。
参考文献
, 百拇医药 1 Arrowood MJ, Sterling CR. Isolation of Cryptosporidium oocysts and sporozoites using discontinuous sucrose and isopycnic Percoll gradients. J Parasitol, 1987,73：314-319.
2 Yang S, Healey MC. Patent gut infections in immunosuppressed adult C57BL/6N mice following intraperitoneal injection of Cryptosporidium parvum oocysts. J Parasitol, 1994,80：338-342.
3 Rasmussen KR, Healey MC. Cryptosporidium parvum: experimental infections in aged Syrian golden hamsters. J Infect Dis, 1992,165：769-772.
4 陈有贵，栗海思，姚福宝，等.苦参合剂作用于CSO后LCST初步观察.江苏寄防，1995，10：82., http://www.100md.com
单位：450003 郑州，河南省人民医院小儿科(史长松，原在徐州医学院儿科研究室)；郑州黄河中心医院(任爱巧)；徐州医学院(姚福宝、陈有贵)
关键词：
中华儿科杂志/980520 隐孢子虫(cryptosporidium, CPS)感染迄今尚无特效治疗药物。作者拟用动物实验研究苦参合剂对CPS感染的预防作用。
材料与方法：隐孢子虫卵囊(cryptosporidium oocyst, CSO)收集：CSO来源于一患儿新鲜粪便，按参考文献[1]报告的方法分离纯化CSO，以磷酸缓冲溶液保存于4℃备用。感染动物前，将CSO悬液行细菌、霉菌、轮状病毒、贾第虫检测(简称四项检测)，均阴性。
CPS感染模型的建立及分组：实验第1～17天，给大鼠地塞米松(dexamethasone, DEX)每只2 mg*kg-1*d-1，每天一次，灌胃。第8天一次性灌胃接种每只5×106个CSO。SD大鼠50只，2月龄，雌性，随机分为5组(每组10只)。第1组：DEX+CSO+3 ml*kg-1*d-1苦参合剂(分两次灌胃，实验第1～17天使用；下同)；第2组：DEX+CSO+15 ml*kg-1*d-1苦参合剂；第3组：DEX+CSO；第4组：单纯DEX组；第5组：对照组。采用单只分笼饲养，房间、笼具、饮水、饲料均行消毒，并在饮水中加四环素，含量为1 mg/ml，以预防细菌感染。实验前一周，采集大鼠粪便进行CSO及四项检测，均阴性。
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药物：苦参20 g、秦皮20 g、黄柏20 g、麦芽40 g按煎制方法煎成60 ml。
效果指标：(1)一般状况：包括精神、反应、毛色、活动、摄食及粪便性状；测定并记录体重变化。(2)粪排CSO情况：每日用硫酸锌浮聚法检查粪CSO并进行密度计分[2]。(3)病理检查：实验第18天，解剖所有动物，进行肠道感染记分[3]。(4)免疫功能检查：脾脏组织学检查；白细胞总数及淋巴细胞分类计数；CD3、CD4亚群检测：大鼠经摘眼球取血，用冻干抗体致敏的红细胞花环试剂盒(武汉生物制品研究所提供)按要求测定。(5)所得数据用
结果：动物的一般状况：第1～4组鼠经DEX灌胃7天后，均表现出免疫抑制症状：神萎，反应迟钝，毛色光泽消失，体毛稀疏，摄食减少，体重下降；第5组表现无异常，体重增加。所有动物均未出现腹泻症状。
, 百拇医药
粪便CSO排出情况：感染后第6、7、8、9天，第1组鼠的粪排CSO密度分低于第3组，差异显著(P<0.05)或非常显著(P<0.01)。第2组与第3组的粪排CSO密度分无差异(P>0.05)。第4、5两组鼠粪检CSO始终阴性。
病理检查：第1组肠道感染分(1.7±0.5)明显低于第3组(3±0)(P<0.01)，第2组(2.8±0.4)和第3组无差别(P>0.05)。
免疫功能检查：(1)第1～4组与第5组相比，脾淋巴小结体积缩小，数量减少，以第3组最明显，第1组脾内巨噬细胞相对较多。(2)第1组的CD3、CD4细胞百分率大于第2、3、4组，差异非常显著(P<0.01)，且与对照组相似(P>0.05)；第2组与第4组比较无差异(P>0.05)。血白细胞总数和淋巴细胞绝对数结果与CD3、CD4细胞百分率结果相似。
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讨论：中药苦参属清热燥湿药，有抗滴虫、抗真菌、解热等作用，治疗贾第虫有一定功效。本组以苦参为主配伍黄柏、秦皮、麦芽，以期能达到对大鼠CPS感染的预防作用。结果表明：3 ml*kg-1*d-1苦参合剂能降低大鼠粪排CSO量，降低动物肠道感染分，并能增强大鼠的免疫功能，但15 ml*kg-1*d-1苦参合剂却无上述效果，其原因尚有待进一步研究。陈有贵等报道[4]，该药能进入CSO内，可能对CSO内的子孢子具有一定杀灭作用。苦参合剂对CPS感染的预防作用可能与下列因素有关：(1)直接作用于虫体；(2)提高机体的免疫力。另外，免疫抑制大鼠接种CSO后，血CD3细胞和CD4细胞的水平进一步降低，白细胞总数和淋巴细胞绝对数也进一步减少(第3组与第4组比)，提示：CPS感染可进一步降低宿主的免疫功能。
参考文献
, 百拇医药 1 Arrowood MJ, Sterling CR. Isolation of Cryptosporidium oocysts and sporozoites using discontinuous sucrose and isopycnic Percoll gradients. J Parasitol, 1987,73：314-319.
2 Yang S, Healey MC. Patent gut infections in immunosuppressed adult C57BL/6N mice following intraperitoneal injection of Cryptosporidium parvum oocysts. J Parasitol, 1994,80：338-342.
3 Rasmussen KR, Healey MC. Cryptosporidium parvum: experimental infections in aged Syrian golden hamsters. J Infect Dis, 1992,165：769-772.
4 陈有贵，栗海思，姚福宝，等.苦参合剂作用于CSO后LCST初步观察.江苏寄防，1995，10：82., http://www.100md.com