儿童糖尿病的谷氨酸脱羧酶抗体检测
作者：龙秀荣 杜文斌 苏钟浦 魏庆琤
单位：110003 沈阳，中国医科大学第二临床学院(龙秀荣)，基础医学院化学免疫研究室(苏钟浦)，预防医学院卫生统计教研组(魏庆)；辽宁省糖尿病研治中心(杜文斌)
关键词：
中华儿科杂志981023 近年来有关糖尿病谷氨酸脱羧酶抗体(GAD-Ab)测定对Ⅰ型糖尿病诊断，Ⅰ、Ⅱ型糖尿病鉴别诊断及对Ⅰ型糖尿病的预测等方面资料在国内外相继有报道，我们采用免疫双扩散法对16例儿童期间发生的Ⅰ型糖尿病进行了GAD-Ab测定，证明GAD-Ab可作为儿童糖尿病的诊断指标。
对象：实验组16例，均为Ⅰ型糖尿病住院患儿和糖尿病出院后随访的患儿。其中男9例，女7例。发病年龄9个月～13岁6个月，其中9个月～5岁3例，～10岁9例，～13岁6个月4例。病程2周～7年，其中病程2周～6个月9例，～1年3例，>1年4例。16例均符合Ⅰ型糖尿病诊断标准。主诉或家属回顾病史均具有三多一少症状。尿糖定性均为(++)～(++++)，空腹血糖高于正常，最低者12.4 mmol/L，最高者33.5 mmol/L(正常值3.9～6.1 mmol/L)。来诊时尿酮体均为阳性，其中10例伴有酮症酸中毒或酮症酸中毒昏迷。血胰岛素定量降低(基础值)，最低者0.4 μIU/ml，最高者8.5 μIU/ml(正常值18.6+8.6 μIU/ml)。血C肽(基础值)也明显降低，最低者4.3 pmol/L，最高者69.3 pmol/L(正常256～1300 pmol/L)。对照组20例均为健康普查儿童，临床无糖尿病症状，尿糖阴性，血糖正常的健康儿童。
, 百拇医药
方法：(1)受试者清晨空腹取静脉血2毫升，置于备用的试管内，离心(3 000 r/min)，15分钟，取血清于-30℃冰箱内保存，全部标本在同一次实验内完成。(2)特异性抗原GAD制备：从新鲜猪脑提取，由中国医科大学免疫化学研究室提供。血清GAD-Ab的检测采取免疫双扩散法。(3)结果判定：标本中有沉淀线生成为阳性，未产生沉淀线者为阴性。
结果：实验组16例，其中14例GAD-Ab阳性(14/16例，87.5%)，2例阴性。病程2周～6个月的9例中GAD-Ab均阳性，病程6个月～1年的3例中阳性1例，阴性2例，病程>1年(最长者7年)的4例中GAD-Ab均阳性。2例阴性者分别在<5岁年龄组和～10岁年龄组。对照组20例GAD-Ab全部阴性。
讨论：人们已经发现Ⅰ型糖尿病胰岛炎现象，即淋巴细胞浸润胰岛，以后相继在Ⅰ型糖尿病患者中发现了抗胰岛细胞自身抗体(ICA)，抗胰岛素抗体(IAA)、羧肽酶抗体、热休克蛋白抗体，至1990年Beakkeskov证明Ⅰ型糖尿病患者血清中存在的64 K抗体就是GAD自身抗体，且认为GAD是Ⅰ型糖尿病自身免疫反应的关键抗原。从免疫学指标诊断Ⅰ型糖尿病，无论IAA、ICA、GAD-Ab都很有意义，但随着病程的推移IAA、ICA，在血液中逐渐消失转阴，而GAD-Ab阳性率和水平都保持高值。文献也曾报道Ⅰ型糖尿病患者该抗体一旦出现即保持稳定，不随病程延长而抗体滴度减弱或转阴。本实验结果也表明，GAD-Ab阳性与否与病程长短、发病年龄大小均无关。
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我们采用的实验方法为免疫双扩散法的改良法。实验的关键是特异性抗原GAD的制备和浓度测定，其次是特异性抗原抗体反应形成沉淀线的判定。此法优点：操作简便、不用更多的特殊仪器，价格低廉，真实性高。自实验开展以来对101例正常人和39例Ⅰ型糖尿病患者进行了血中GAD-Ab测定，结果正常人101例抗体均阴性，39例糖尿病中32例抗体阳性，阴性7例。灵敏度=32/(32+7)×100%=82.05%；特异度=101/(101+0)×100%=100%，无假阳性者，与国外报道相近。将实验中的儿童糖尿病16例及正常儿童对照者20例实验结果取出，其中抗体阳性14例，阳性率87.5%，表明儿童期间发生的Ⅰ型糖尿病GAD-Ab水平也很高，其灵敏度与国内外报道的成年组Ⅰ型糖尿病GAD-Ab灵敏度相一致，因此GAD-Ab可作为儿童期Ⅰ型糖尿病的免疫学诊断指标。
16例儿童糖尿病中2例抗体阴性，其原因可从以下三方面考虑：(1)该2例病情明显好转，尿糖转阴，胰岛素用量很少或不用，GAD-Ab阴性。此种现象是否与胰岛β细胞在接受免疫攻击后能主动地迅速进行修复，大多数浸润的炎性细胞被清除有关，其中1例发病年龄9个月，门诊以糖尿病酮症酸中毒昏迷收住ICU病房，血糖33.5 mmol/L，尿糖(++++)，追问病史入院前半个月开始多尿，消瘦。抢救48小时脱险后转入内分泌病房，经饮食及胰岛素治疗20天后病情明显好转。出院后一直随访7个月，患儿生长发育良好，每日中效胰岛素3 IU，尿糖持续在(-)～(±)～(+)，糖化血红蛋白8%。另1例7岁。病程9个月出院时病情进入“蜜月期”，遵循糖尿病饮食，增加体育运动，停用胰岛素，尿糖仍为(-)～(+)。(2)本实验可出现假阴性，可否因抗体滴度较弱造成实验假阴性结果，该2例患儿应该取血重新复查。(3)该2例患儿GAD可否为其它特殊亚型，导致特异性抗原抗体反应呈阴性。由于我们观察的病例少，论据不充分，有待于进一步深入研究。
总之，实验证明儿童期发生的Ⅰ型糖尿病确实存在GAD-Ab且水平较高，灵敏度与成年组Ⅰ型糖尿病的灵敏度相一致，并且抗体的存在不受病程长短的影响，因此GAD-Ab可作为儿童期Ⅰ型糖尿病较可靠的免疫学指标。由于实验的方法简便，价格低廉，可重复，可大量使用，特异度100%，灵敏度与国外报道相近，无假阳性，因此为较短时间内测定大批血样提供了可能，可在无糖尿病家族史的人群中进行普查，确定可能发展为Ⅰ型糖尿病的高危人群，继而采取措施干预胰岛免疫损伤的进展，达到预报和预防糖尿病的目的。
(收稿：1997-12-25 修回：1998-06-17), http://www.100md.com
单位：110003 沈阳，中国医科大学第二临床学院(龙秀荣)，基础医学院化学免疫研究室(苏钟浦)，预防医学院卫生统计教研组(魏庆)；辽宁省糖尿病研治中心(杜文斌)
关键词：
中华儿科杂志981023 近年来有关糖尿病谷氨酸脱羧酶抗体(GAD-Ab)测定对Ⅰ型糖尿病诊断，Ⅰ、Ⅱ型糖尿病鉴别诊断及对Ⅰ型糖尿病的预测等方面资料在国内外相继有报道，我们采用免疫双扩散法对16例儿童期间发生的Ⅰ型糖尿病进行了GAD-Ab测定，证明GAD-Ab可作为儿童糖尿病的诊断指标。
对象：实验组16例，均为Ⅰ型糖尿病住院患儿和糖尿病出院后随访的患儿。其中男9例，女7例。发病年龄9个月～13岁6个月，其中9个月～5岁3例，～10岁9例，～13岁6个月4例。病程2周～7年，其中病程2周～6个月9例，～1年3例，>1年4例。16例均符合Ⅰ型糖尿病诊断标准。主诉或家属回顾病史均具有三多一少症状。尿糖定性均为(++)～(++++)，空腹血糖高于正常，最低者12.4 mmol/L，最高者33.5 mmol/L(正常值3.9～6.1 mmol/L)。来诊时尿酮体均为阳性，其中10例伴有酮症酸中毒或酮症酸中毒昏迷。血胰岛素定量降低(基础值)，最低者0.4 μIU/ml，最高者8.5 μIU/ml(正常值18.6+8.6 μIU/ml)。血C肽(基础值)也明显降低，最低者4.3 pmol/L，最高者69.3 pmol/L(正常256～1300 pmol/L)。对照组20例均为健康普查儿童，临床无糖尿病症状，尿糖阴性，血糖正常的健康儿童。
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方法：(1)受试者清晨空腹取静脉血2毫升，置于备用的试管内，离心(3 000 r/min)，15分钟，取血清于-30℃冰箱内保存，全部标本在同一次实验内完成。(2)特异性抗原GAD制备：从新鲜猪脑提取，由中国医科大学免疫化学研究室提供。血清GAD-Ab的检测采取免疫双扩散法。(3)结果判定：标本中有沉淀线生成为阳性，未产生沉淀线者为阴性。
结果：实验组16例，其中14例GAD-Ab阳性(14/16例，87.5%)，2例阴性。病程2周～6个月的9例中GAD-Ab均阳性，病程6个月～1年的3例中阳性1例，阴性2例，病程>1年(最长者7年)的4例中GAD-Ab均阳性。2例阴性者分别在<5岁年龄组和～10岁年龄组。对照组20例GAD-Ab全部阴性。
讨论：人们已经发现Ⅰ型糖尿病胰岛炎现象，即淋巴细胞浸润胰岛，以后相继在Ⅰ型糖尿病患者中发现了抗胰岛细胞自身抗体(ICA)，抗胰岛素抗体(IAA)、羧肽酶抗体、热休克蛋白抗体，至1990年Beakkeskov证明Ⅰ型糖尿病患者血清中存在的64 K抗体就是GAD自身抗体，且认为GAD是Ⅰ型糖尿病自身免疫反应的关键抗原。从免疫学指标诊断Ⅰ型糖尿病，无论IAA、ICA、GAD-Ab都很有意义，但随着病程的推移IAA、ICA，在血液中逐渐消失转阴，而GAD-Ab阳性率和水平都保持高值。文献也曾报道Ⅰ型糖尿病患者该抗体一旦出现即保持稳定，不随病程延长而抗体滴度减弱或转阴。本实验结果也表明，GAD-Ab阳性与否与病程长短、发病年龄大小均无关。
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我们采用的实验方法为免疫双扩散法的改良法。实验的关键是特异性抗原GAD的制备和浓度测定，其次是特异性抗原抗体反应形成沉淀线的判定。此法优点：操作简便、不用更多的特殊仪器，价格低廉，真实性高。自实验开展以来对101例正常人和39例Ⅰ型糖尿病患者进行了血中GAD-Ab测定，结果正常人101例抗体均阴性，39例糖尿病中32例抗体阳性，阴性7例。灵敏度=32/(32+7)×100%=82.05%；特异度=101/(101+0)×100%=100%，无假阳性者，与国外报道相近。将实验中的儿童糖尿病16例及正常儿童对照者20例实验结果取出，其中抗体阳性14例，阳性率87.5%，表明儿童期间发生的Ⅰ型糖尿病GAD-Ab水平也很高，其灵敏度与国内外报道的成年组Ⅰ型糖尿病GAD-Ab灵敏度相一致，因此GAD-Ab可作为儿童期Ⅰ型糖尿病的免疫学诊断指标。
16例儿童糖尿病中2例抗体阴性，其原因可从以下三方面考虑：(1)该2例病情明显好转，尿糖转阴，胰岛素用量很少或不用，GAD-Ab阴性。此种现象是否与胰岛β细胞在接受免疫攻击后能主动地迅速进行修复，大多数浸润的炎性细胞被清除有关，其中1例发病年龄9个月，门诊以糖尿病酮症酸中毒昏迷收住ICU病房，血糖33.5 mmol/L，尿糖(++++)，追问病史入院前半个月开始多尿，消瘦。抢救48小时脱险后转入内分泌病房，经饮食及胰岛素治疗20天后病情明显好转。出院后一直随访7个月，患儿生长发育良好，每日中效胰岛素3 IU，尿糖持续在(-)～(±)～(+)，糖化血红蛋白8%。另1例7岁。病程9个月出院时病情进入“蜜月期”，遵循糖尿病饮食，增加体育运动，停用胰岛素，尿糖仍为(-)～(+)。(2)本实验可出现假阴性，可否因抗体滴度较弱造成实验假阴性结果，该2例患儿应该取血重新复查。(3)该2例患儿GAD可否为其它特殊亚型，导致特异性抗原抗体反应呈阴性。由于我们观察的病例少，论据不充分，有待于进一步深入研究。
总之，实验证明儿童期发生的Ⅰ型糖尿病确实存在GAD-Ab且水平较高，灵敏度与成年组Ⅰ型糖尿病的灵敏度相一致，并且抗体的存在不受病程长短的影响，因此GAD-Ab可作为儿童期Ⅰ型糖尿病较可靠的免疫学指标。由于实验的方法简便，价格低廉，可重复，可大量使用，特异度100%，灵敏度与国外报道相近，无假阳性，因此为较短时间内测定大批血样提供了可能，可在无糖尿病家族史的人群中进行普查，确定可能发展为Ⅰ型糖尿病的高危人群，继而采取措施干预胰岛免疫损伤的进展，达到预报和预防糖尿病的目的。
(收稿：1997-12-25 修回：1998-06-17), http://www.100md.com