慢性再生障碍性贫血和骨髓增生异常综合征-难治性贫血的红细胞糖无氧酵解酶活性的研究
作者：雷中劲 王碧玉 吴清平 蒙冰 杨爱德
单位：448000 荆门市第一医院儿科(雷中劲)；同济医科大学附属协和医院(王碧玉、蒙冰、杨爱德)；武汉职工医学院(吴清平)
关键词：
中华儿科杂志990317 丙酮酸激酶(PK)、磷酸果糖激酶(PFK)、已糖激酶(HK)、磷酸甘油酸激酶(PGK)、醛缩酶(ALD)、磷酸丙糖异构酶(TPI)、二磷酸甘油酸变位酶(DPGM)和磷酸葡萄糖异构酶(GPI)是红细胞糖无氧酵解途径(EMP)中的8种关键酶，这些酶的遗传性缺陷将产生溶血性贫血。已知，慢性再生障碍性贫血(CAA)和骨髓增生异常综合征-难治性贫血(MDS-RA)等造血干细胞克隆性疾病存在多种红细胞生化代谢异常，其红细胞酶活性改变的性质是获得性的。本研究运用单因素分析和多元逐步判别分析的统计学方法比较了9例CAA和9例MDS-RA患者的上述8种红细胞酶的各自酶活性变化，并研究其临床意义。
, 百拇医药
对象：患者均在确诊后、治疗前采血：(1)CAA 9例：男4例，女5例；2.5～14岁 9例。(2)MDS-RA 9例：男4例、女5例；13岁～14岁7例、～15岁1例、～18岁1例。(3)正常对照组40例：均为武汉市中心血站献血员。
方法：采集研究对象的静脉血2 ml(ACD抗凝)，经2 cm高的α纤维素-微晶纤维素(Sigma产品)柱过滤去除白细胞和血小板，将滤出的红细胞用稳定液(含硫基乙醇和EDTA)溶血后制备成溶血液。然后，参照国际血液学标准委员会推荐的测定红细胞EMP酶的方法[1](根据本实验室条件略加改进)，对上述40例正常人和18例患者分别进行PK、PFK、HK、ALD、PGK、DPGM、TPI和GPI8种红细胞EMP中关键酶活性的测定。实验中所用分光光度计为国产751-GW型(上海分析仪器厂产品，因为本研究所需将其改制成37℃恒温的分光光度计)。
统计学处理：CAA和MDS-RA两组病例各酶值间差异显著性检验选用秩和检验，在秩和检验的基础上选用逐步判别分析，筛选出对这两种疾病有鉴别诊断意义的判别因子。
, 百拇医药
结果：(1)与正常对照比较，CAA的8种酶中有PFK、PGK和GPI三种酶活性增高；MDS-RA的8种酶中有ALD、TPI和GPI三种酶活性增高，有PK、PFK、HK、DPGM四种酶活性降低(P均<0.05)。提示CAA和MDS-RA中均存在红细胞EMP酶活性改变(表1)。将9例CAA和9例MDS-RA患者上述8种酶的各自活性值选用秩和检验比较，显示两组疾病间仅有PGK和GPI两种酶活性改变的差异无显著意义(P均>0.05)，而PK、PFK、HK、ALD、DPGM和TPI等6种酶活性改变的差异有显著性意义(P均<0.05)。提示CAA和MDS-RA两组疾病间上述8种酶活性的改变有各自的规律性。(2)将CAA与MDS-RA两组疾病间酶活性改变有显著性差异的6种酶再选用逐步判别分析处理，筛选出3种对CAA和MDS-RA有判别作用的因子：PK、HK和TPI，建立其判别模型：
CAA=-8.945 6+2.942 4 PK-5.629 9 HK-0.006 1 TPI
, 百拇医药
MDS-RA=-12.108 0-2.911 6 PK+4.849 7 HK+0.011 9 TPI。
将原始资料代入判别模型，其回代判别诊断符合率P=95%。
表1 9例CAA和9例MDS-RA患者的8种酶活性值与40例正常对照比较[
±s，IU/g(血红蛋白)] 组别
PK
PFK
HK
PGK
ALD
DPGM
, 百拇医药
TPI
GPI
CAA
13.3±3.2
13.4±3.6
1.5±0.4
364±65
2.8±0.8
5.7±1.4
2 156±572
77±8
MDS-RA
, 百拇医药 9.1±4.9
8.6±2.6
2.2±1.1
319±71
4.3±2.2
4.5±1.0
3 027±1 262
77±12
正常对照组
12.3±2.3
11.0±2.8
1.3±0.3
, 百拇医药
278±77
3.0±0.9
5.6±1.2
2 137±505
67±12
P值
>0.05*
<0.05**
<0.05*
<0.05**
>0.05*
, 百拇医药
<0.05**
<0.05*
>0.05**
>0.05*
<0.05**
>0.05*
<0.05**
>0.05*
<0.05**
<0.05*
, 百拇医药
<0.05**
注：* CAA组与正常对照比较，** MDS-RA组与正常对照组比较 讨论：有资料报道，MDS、CAA等血液病患者的红细胞酶活性可表现为既有升高又有降低[2，3]。杨崇礼[4]测定了24例CAA患者的红细胞糖酵解代谢，显示其作用高于正常人。这些资料表明，在CAA和MDS两种疾病中均存在红细胞酶代谢异常(包括EMP酶)。现已知其性质是获得性的。本研究结果也证实了这些异常的存在。经过单因素统计学分析提示，这些获得性红细胞酶代谢的异常现象在CAA和MDS-RA中有各自的规律性，即CAA和MDS-RA对红细胞EMP酶活性改变的影响是不相同的。
虽然CAA和MDS-RA都属于克隆性疾病，但其治疗方法及预后都是有区别的。为鉴别这两种疾病而提出的实验依据具有重要的临床意义。本研究在单因素分析的基础上进一步选用多元逐步判别分析进行处理，筛选出了对鉴别CAA和MDS-RA有帮助的因子：PK、HK、TPI，并建立了判别模型，所建立的判别函数回代诊断符合率达95%。由此提示，将PK、HK和TPI三种酶组成酶谱，运用CAA和MDS-RA的判别模型，或许能成为鉴别这两种疾病的辅助指标。限于本研究观察的病例数还较少，对CAA和MDS-RA两种疾病进行本质上的揭示，还需进一步研究。
, 百拇医药
参考文献
1 Beutlre E,Blume KG,Kaplan JC,et al.International committee for standardization in haematology: recommended methods for red cell enzyme analysis. Br J Haematol,1977,35:331-339.
2 Boivin P,Galand C,Hakim J,et al.Acquired erythroenzymopathies in blood disord study of 200 cases.Br J Haematol,1975,31:531-535.
3 Tani K,Fujii K,Takahasi K,et al.Erythrocyte enzyme activity in MDS:elevated PK activity. AM J Haematol,1989;30:97-100.
4 杨崇礼.红细胞糖酵解.见:杨崇礼,杨天楹，主编. 再生障碍性贫血.北京:人民卫生出版社,1987.127.
(收稿：1998-07-02 修回：1998-11-20), http://www.100md.com
单位：448000 荆门市第一医院儿科(雷中劲)；同济医科大学附属协和医院(王碧玉、蒙冰、杨爱德)；武汉职工医学院(吴清平)
关键词：
中华儿科杂志990317 丙酮酸激酶(PK)、磷酸果糖激酶(PFK)、已糖激酶(HK)、磷酸甘油酸激酶(PGK)、醛缩酶(ALD)、磷酸丙糖异构酶(TPI)、二磷酸甘油酸变位酶(DPGM)和磷酸葡萄糖异构酶(GPI)是红细胞糖无氧酵解途径(EMP)中的8种关键酶，这些酶的遗传性缺陷将产生溶血性贫血。已知，慢性再生障碍性贫血(CAA)和骨髓增生异常综合征-难治性贫血(MDS-RA)等造血干细胞克隆性疾病存在多种红细胞生化代谢异常，其红细胞酶活性改变的性质是获得性的。本研究运用单因素分析和多元逐步判别分析的统计学方法比较了9例CAA和9例MDS-RA患者的上述8种红细胞酶的各自酶活性变化，并研究其临床意义。
, 百拇医药
对象：患者均在确诊后、治疗前采血：(1)CAA 9例：男4例，女5例；2.5～14岁 9例。(2)MDS-RA 9例：男4例、女5例；13岁～14岁7例、～15岁1例、～18岁1例。(3)正常对照组40例：均为武汉市中心血站献血员。
方法：采集研究对象的静脉血2 ml(ACD抗凝)，经2 cm高的α纤维素-微晶纤维素(Sigma产品)柱过滤去除白细胞和血小板，将滤出的红细胞用稳定液(含硫基乙醇和EDTA)溶血后制备成溶血液。然后，参照国际血液学标准委员会推荐的测定红细胞EMP酶的方法[1](根据本实验室条件略加改进)，对上述40例正常人和18例患者分别进行PK、PFK、HK、ALD、PGK、DPGM、TPI和GPI8种红细胞EMP中关键酶活性的测定。实验中所用分光光度计为国产751-GW型(上海分析仪器厂产品，因为本研究所需将其改制成37℃恒温的分光光度计)。
统计学处理：CAA和MDS-RA两组病例各酶值间差异显著性检验选用秩和检验，在秩和检验的基础上选用逐步判别分析，筛选出对这两种疾病有鉴别诊断意义的判别因子。
, 百拇医药
结果：(1)与正常对照比较，CAA的8种酶中有PFK、PGK和GPI三种酶活性增高；MDS-RA的8种酶中有ALD、TPI和GPI三种酶活性增高，有PK、PFK、HK、DPGM四种酶活性降低(P均<0.05)。提示CAA和MDS-RA中均存在红细胞EMP酶活性改变(表1)。将9例CAA和9例MDS-RA患者上述8种酶的各自活性值选用秩和检验比较，显示两组疾病间仅有PGK和GPI两种酶活性改变的差异无显著意义(P均>0.05)，而PK、PFK、HK、ALD、DPGM和TPI等6种酶活性改变的差异有显著性意义(P均<0.05)。提示CAA和MDS-RA两组疾病间上述8种酶活性的改变有各自的规律性。(2)将CAA与MDS-RA两组疾病间酶活性改变有显著性差异的6种酶再选用逐步判别分析处理，筛选出3种对CAA和MDS-RA有判别作用的因子：PK、HK和TPI，建立其判别模型：
CAA=-8.945 6+2.942 4 PK-5.629 9 HK-0.006 1 TPI
, 百拇医药
MDS-RA=-12.108 0-2.911 6 PK+4.849 7 HK+0.011 9 TPI。
将原始资料代入判别模型，其回代判别诊断符合率P=95%。
表1 9例CAA和9例MDS-RA患者的8种酶活性值与40例正常对照比较[
±s，IU/g(血红蛋白)] 组别PK
PFK
HK
PGK
ALD
DPGM
, 百拇医药
TPI
GPI
CAA
13.3±3.2
13.4±3.6
1.5±0.4
364±65
2.8±0.8
5.7±1.4
2 156±572
77±8
MDS-RA
, 百拇医药 9.1±4.9
8.6±2.6
2.2±1.1
319±71
4.3±2.2
4.5±1.0
3 027±1 262
77±12
正常对照组
12.3±2.3
11.0±2.8
1.3±0.3
, 百拇医药
278±77
3.0±0.9
5.6±1.2
2 137±505
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P值
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注：* CAA组与正常对照比较，** MDS-RA组与正常对照组比较 讨论：有资料报道，MDS、CAA等血液病患者的红细胞酶活性可表现为既有升高又有降低[2，3]。杨崇礼[4]测定了24例CAA患者的红细胞糖酵解代谢，显示其作用高于正常人。这些资料表明，在CAA和MDS两种疾病中均存在红细胞酶代谢异常(包括EMP酶)。现已知其性质是获得性的。本研究结果也证实了这些异常的存在。经过单因素统计学分析提示，这些获得性红细胞酶代谢的异常现象在CAA和MDS-RA中有各自的规律性，即CAA和MDS-RA对红细胞EMP酶活性改变的影响是不相同的。
虽然CAA和MDS-RA都属于克隆性疾病，但其治疗方法及预后都是有区别的。为鉴别这两种疾病而提出的实验依据具有重要的临床意义。本研究在单因素分析的基础上进一步选用多元逐步判别分析进行处理，筛选出了对鉴别CAA和MDS-RA有帮助的因子：PK、HK、TPI，并建立了判别模型，所建立的判别函数回代诊断符合率达95%。由此提示，将PK、HK和TPI三种酶组成酶谱，运用CAA和MDS-RA的判别模型，或许能成为鉴别这两种疾病的辅助指标。限于本研究观察的病例数还较少，对CAA和MDS-RA两种疾病进行本质上的揭示，还需进一步研究。
, 百拇医药
参考文献
1 Beutlre E,Blume KG,Kaplan JC,et al.International committee for standardization in haematology: recommended methods for red cell enzyme analysis. Br J Haematol,1977,35:331-339.
2 Boivin P,Galand C,Hakim J,et al.Acquired erythroenzymopathies in blood disord study of 200 cases.Br J Haematol,1975,31:531-535.
3 Tani K,Fujii K,Takahasi K,et al.Erythrocyte enzyme activity in MDS:elevated PK activity. AM J Haematol,1989;30:97-100.
4 杨崇礼.红细胞糖酵解.见:杨崇礼,杨天楹，主编. 再生障碍性贫血.北京:人民卫生出版社,1987.127.
(收稿：1998-07-02 修回：1998-11-20), http://www.100md.com