左旋硝基精氨酸对新生大鼠缺氧缺血性脑病的防治作用
作者：王静敏 刘立新 刘宝凤 郝翼中 陈连元
单位：030001 太原，山西医科大学第一附属医院儿科(王静敏、刘立新、郝翼中、陈连元)；山西阳泉市第一人民医院(刘宝凤)
关键词：
中华儿科杂志990618 本研究通过观察一氧化氮合成酶(NOS)抑制剂左旋硝基精氨酸(L-NNA)对新生大鼠缺氧缺血性脑病(HIE)脑组织病理学及钙、水含量的影响来探讨其对HIE的防治效果。
对象和方法：1.选7日龄Wistar大鼠18只，雌雄不限，体重(18±4)g，由山西医科大学实验动物中心提供。L-NNA为Sigma公司产品。
2.将18只大鼠分为三组，伪手术组、HIE组及L-NNA治疗组。三组大鼠先麻醉，分离左颈总动脉，后两组结扎并切断，术后2小时置含8%氧气的密闭容器中。2小时后取出自然复苏。给药方法：后两组均于术前30分钟及HIE模型制成后即刻分别腹腔注射生理盐水1 ml/kg、L-NNA 2 mg/kg、各1次。
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3.取左侧海马水平小块脑组织，常规切片、染色，每个切片光镜观察6个视野中神经细胞总数、变性及坏死神经细胞数，取其平均值，取左侧脑组织用干湿重法测水含量。烘干脑组织进行湿式灰化，用原子吸收分光光度计(SHIMADIU AA-670/GU-5型)测吸光度值，以标准曲线法求脑钙含量。
4.统计学处理：所有数据均以
±s表示，多样本均数的比较用方差分析。
结果：1.脑组织病理学改变：HIE组脑组织可见神经细胞水肿、变性、坏死，细胞间距增加。神经细胞总数低于伪手术组，变性及坏死神经细胞数高于伪手术组。L-NNA治疗组与HIE组相比，脑病理改变明显减轻(表1)。
表1 脑组织神经细胞总数、变性及坏死神经细胞数的比较(±s) 组别
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视野数(个)
神经细胞总数
(个/高倍视野)
变性及坏死神经细胞数
(个/高倍视野)
伪手术组
18
197±26
9.4±3.2
HIE组
18
165±26*
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23.2±4.5**
L-NNA组
18
212±14△▲
10.3±2.2△▲
F值
3.925 3
32.515 7
注：HIE与伪手术组比较，* P<0.05，**P<0.01；L-NNA与HIE比较，△P<0.01，L-NNA与伪手术组比较，▲P>0.05
, 百拇医药
2.脑组织钙、水含量变化：HIE组脑组织钙、水含量明显高于伪手术组，L-NNA治疗组脑钙含量明显低于HIE组，水份含量均低于HIE组，-NNA组脑水含量明显高于伪手术组，脑钙含量无统计学差异(表2)。
表2 脑组织钙含量、水含量的改变(±s) 组 别
例数
钙含量
[μg/(g.bdw)]
水含量(%)
伪手术组
6
1.94±0.97
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83.98±1.15
HIE组
6
8.71±2.42*
88.72±1.48*
L-NNA组
6
3.75±1.43**▲
86.34±2.06△
F值
22.404 8
, http://www.100md.com
18.567 3
注：HIE与为手术组比较，* P<0.01；L-NNA与HIE比较，**P<0.01，△P<0.05，L-NNA与伪手术组比较，▲P>0.05 △P<0.01
讨论：目前认为在缺氧缺血中造成神经细胞损伤的因素有：一氧化氮产生增多、钙超载等。HIE时一氧化氮过量产生，除了它本身对神经细胞的毒性作用、抑制线粒体呼吸、使ATP减少外，主要通过激活鸟苷酸环化酶使环磷酸鸟苷大量产生，介导具有强烈神经毒性的谷氨酸释放，进而激活N-甲基-D-天门冬氨酸受体使钙通道开放，细胞外大量钙离子内流，导致细胞内钙超载，使神经细胞水肿、变性、坏死。而L-NNA是NOS的抑制剂，可以抑制一氧化氮的产生，极易透过血脑屏障，从而对神经细胞起保护作用。
本实验中L-NNA治疗组脑组织病理改变减轻，进一步说明过量生成的一氧化氮参与了HIE脑组织的病理过程，L-NNA通过竞争性抑制NOS，减少了一氧化氮的产生，减轻了钙超载，从而使脑水肿、神经细胞变性、坏死等病理改变得到改善，对HIE脑组织起到保护作用。目前，L-NNA对HIE的防治尚处于动物实验阶段，尚未用于临床，本研究为临床防治新生儿HIE提供了一条新的途径。
(收稿：1998-07-28), http://www.100md.com
单位：030001 太原，山西医科大学第一附属医院儿科(王静敏、刘立新、郝翼中、陈连元)；山西阳泉市第一人民医院(刘宝凤)
关键词：
中华儿科杂志990618 本研究通过观察一氧化氮合成酶(NOS)抑制剂左旋硝基精氨酸(L-NNA)对新生大鼠缺氧缺血性脑病(HIE)脑组织病理学及钙、水含量的影响来探讨其对HIE的防治效果。
对象和方法：1.选7日龄Wistar大鼠18只，雌雄不限，体重(18±4)g，由山西医科大学实验动物中心提供。L-NNA为Sigma公司产品。
2.将18只大鼠分为三组，伪手术组、HIE组及L-NNA治疗组。三组大鼠先麻醉，分离左颈总动脉，后两组结扎并切断，术后2小时置含8%氧气的密闭容器中。2小时后取出自然复苏。给药方法：后两组均于术前30分钟及HIE模型制成后即刻分别腹腔注射生理盐水1 ml/kg、L-NNA 2 mg/kg、各1次。
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3.取左侧海马水平小块脑组织，常规切片、染色，每个切片光镜观察6个视野中神经细胞总数、变性及坏死神经细胞数，取其平均值，取左侧脑组织用干湿重法测水含量。烘干脑组织进行湿式灰化，用原子吸收分光光度计(SHIMADIU AA-670/GU-5型)测吸光度值，以标准曲线法求脑钙含量。
4.统计学处理：所有数据均以
±s表示，多样本均数的比较用方差分析。结果：1.脑组织病理学改变：HIE组脑组织可见神经细胞水肿、变性、坏死，细胞间距增加。神经细胞总数低于伪手术组，变性及坏死神经细胞数高于伪手术组。L-NNA治疗组与HIE组相比，脑病理改变明显减轻(表1)。
表1 脑组织神经细胞总数、变性及坏死神经细胞数的比较(
±s) 组别, http://www.100md.com
视野数(个)
神经细胞总数
(个/高倍视野)
变性及坏死神经细胞数
(个/高倍视野)
伪手术组
18
197±26
9.4±3.2
HIE组
18
165±26*
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23.2±4.5**
L-NNA组
18
212±14△▲
10.3±2.2△▲
F值
3.925 3
32.515 7
注：HIE与伪手术组比较，* P<0.05，**P<0.01；L-NNA与HIE比较，△P<0.01，L-NNA与伪手术组比较，▲P>0.05
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2.脑组织钙、水含量变化：HIE组脑组织钙、水含量明显高于伪手术组，L-NNA治疗组脑钙含量明显低于HIE组，水份含量均低于HIE组，-NNA组脑水含量明显高于伪手术组，脑钙含量无统计学差异(表2)。
表2 脑组织钙含量、水含量的改变(
±s) 组 别例数
钙含量
[μg/(g.bdw)]
水含量(%)
伪手术组
6
1.94±0.97
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83.98±1.15
HIE组
6
8.71±2.42*
88.72±1.48*
L-NNA组
6
3.75±1.43**▲
86.34±2.06△
F值
22.404 8
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18.567 3
注：HIE与为手术组比较，* P<0.01；L-NNA与HIE比较，**P<0.01，△P<0.05，L-NNA与伪手术组比较，▲P>0.05 △P<0.01
讨论：目前认为在缺氧缺血中造成神经细胞损伤的因素有：一氧化氮产生增多、钙超载等。HIE时一氧化氮过量产生，除了它本身对神经细胞的毒性作用、抑制线粒体呼吸、使ATP减少外，主要通过激活鸟苷酸环化酶使环磷酸鸟苷大量产生，介导具有强烈神经毒性的谷氨酸释放，进而激活N-甲基-D-天门冬氨酸受体使钙通道开放，细胞外大量钙离子内流，导致细胞内钙超载，使神经细胞水肿、变性、坏死。而L-NNA是NOS的抑制剂，可以抑制一氧化氮的产生，极易透过血脑屏障，从而对神经细胞起保护作用。
本实验中L-NNA治疗组脑组织病理改变减轻，进一步说明过量生成的一氧化氮参与了HIE脑组织的病理过程，L-NNA通过竞争性抑制NOS，减少了一氧化氮的产生，减轻了钙超载，从而使脑水肿、神经细胞变性、坏死等病理改变得到改善，对HIE脑组织起到保护作用。目前，L-NNA对HIE的防治尚处于动物实验阶段，尚未用于临床，本研究为临床防治新生儿HIE提供了一条新的途径。
(收稿：1998-07-28), http://www.100md.com