用免疫荧光方法检测鼻咽分泌物中多种呼吸道病毒抗原
作者：申昆玲 买颍 刘亚谊 江载芳 照日格图 Annika Linde
单位：100045首都医科大学附属北京市儿童医院内科(申昆玲)；北京市儿科研究所(买颖、刘亚谊、江载芳);；中国医学论坛报社(照日格图);；Department of Virology, Swedish Institute for Infectious Disease Control, S-105 21 Stockholm, Sweden(Annika Linde)
关键词：荧光免疫测定；呼吸道合胞病毒；抗体；单克隆；抗原；病毒
中华儿科杂志990703 【摘要】 目的 评价一种商品化的免疫荧光检测试剂 (Chemicon International Inc, Temecula, CA, USA)用于呼吸道病毒感染诊断的敏感性及特异性。方法 间接免疫荧光方法，包括筛查及确定试验。筛查试剂中含有7种混合单克隆抗体，即甲型及乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒(RSV)、副流感病毒1、2、3型及腺病毒单克隆抗体。此外还有分别针对上述7种病毒的单克隆抗体用于确定试验。本研究用Chemicon 试剂盒对96例患儿的冻存鼻咽分泌物或支气管肺泡灌洗液细胞涂片标本进行回顾性检测，并与病毒分离结果进行比较。此外还用Chemicon 试剂检测了1994年11月～1995年2月北京儿童医院300例下呼吸道感染患儿的鼻咽分泌物标本。结果 与病毒分离结果相比，Chemicon确定试剂检测病毒抗原的敏感性为95%、特异性为86%。北京儿童医院的标本中有38%(105/280)被确定为病毒感染，其中甲型流感病毒20%、RSV 14%、腺病毒3%、副流感病毒1、2、及3型7%。结论Chemicon呼吸道病毒诊断试剂能够同时检测多种呼吸道病毒抗原，对于确定呼吸道病毒感染是一种非常好的方法。但需要注意的是在筛查试验中有4%～8% 的标本呈非特异染色。
, 百拇医药
Detection of multiple respiratory viral antigens in nasopharyngeal secretions with immunofluorescence assay SHEN Kunling*, MAI Ying, LIU Yayi, et al.* Department of Pediatric Internal Medicine, Beijing Children′s Hospital, Beijing 100045
【Abstract】 Objective Antigen detection with immunofluorescence is an efficient method for diagnosis of respiratory tract infections, but such a method previously has not been applied for simple screening of multiple respiratory viruses. Pools of monoclonal antibodies against various respiratory viruses are now available, and are proven to be potentially important tools for improvement of antigen detection in nasopharyngeal secretion specimen. To evaluate the commercially available Chemicon immunofluorescence assay (IFA, respiratory viruses panel and identification kit), an indirect IFA containing a pool of monoclonal antibodies for screening for influenza virus types A and B, respiratory syncytial virus (RSV), parainfluenza virus types 1,2 and 3 and adenovirus, and the respective individual monoclonal ntibodies.Methods Frozen nasopharyngeal secretions or bronchoalveolar lavage specimens from 96 patients with respiratory infections were retrospectively examined with the assay, and the results were compared with cell culture virus isolation. Nasopharyngeal secretions from 300 children with lower respiratory tract infections collected at Beijing Children′s Hospital during the 1994-1995 winter season were also examined with the IFA.Results The sensitivity of the Chemicon assay versus virus isolation was 95% and specificity 86%. A viral etiology was identified in 105/280 (38%) Chinese children whose samples were evaluable (influenza A 20%, RSV 14%, adenovirus 3% and parainfluenza 1,2,3,7%).Conclusion The Chemicon IFA was shown to be an excellent tool for identification of viral respiratory tract infections although there was a problem with the the screening assay where around 4%-8% of samples had non-specific staining, necessitating verification test.
, 百拇医药
【Key words】 Fluoroimmunoassay Respiratory syncytial viruses Antibodies, monoclonal Antigens, viral
呼吸道合胞病毒(RSV)、流感病毒、副流感病毒1、2及3型和腺病毒是下呼吸道感染的常见病原[1-3]。快速诊断呼吸道病毒感染对于指导治疗、避免不必要的抗生素使用及采取必要的隔离措施都有重要意义[4]。免疫荧光技术检测临床标本中的病毒抗原已有20多年历史，是快速、有效而廉价的方法[5，6]。虽然病毒分离仍为“黄金”方法，但由于不同病毒需要不同的培养细胞很难在普通试验室作为常规使用[7]。聚合酶链反应可能比免疫荧光方法更为敏感，但价格贵，对RNA病毒需要进行逆转录。Chemicon呼吸道病毒诊断试剂可以同时在一孔细胞涂片上进行7种病毒抗原筛查。如筛查为阳性则再用单一病毒特异的单克隆抗体进行确定试验。可减少对阴性标本的不必要的单一病毒抗原的检测，同时又不致遗漏常见的呼吸道病毒。
, 百拇医药
材料与方法
一、临床标本
1.标本采集时间为1995年2月14日～1995年3月6日，急性下呼吸道感染患儿82例的鼻咽分泌物及14例支气管肺泡灌洗液细胞涂片，标本取自瑞典Karolinska医院病毒室。
2.北京儿童医院的300例急性下呼吸道感染患儿的鼻咽分泌物标本。其中83例为门诊患儿，217例为住院患儿，年龄为2个月～14岁，标本采集时间为1994年11月～1995年2月。
二、标本采集
将塑料导管经鼻腔插入7～8 cm，达到咽部后轻轻吸取鼻咽分泌物，然后用2 ml消毒生理盐水冲管，标本立即送实验室。
三、细胞涂片制备
, 百拇医药
用吸管吹打粘液后，1 000 r/min离心10分钟，上清液用于病毒分离，沉淀物用10 ml PBS洗涤，再用少量PBS悬浮，然后点于多孔涂片上，每片涂6～12孔，空气干燥后用冷丙酮固定10分钟，-20℃保存。
四、病毒分离
分离流感病毒、副流感病毒及呼吸道合胞病毒(RSV)，使用马丁-达比狗肾(MDCK)及Ma-104细胞进行培养，总时间为3周。对7天未见细胞病变的MDCK细胞及14天未见病变的Ma-104细胞进行血液吸附试验。对有细胞病变或血液吸附试验阳性的标本再通过直接免疫荧光方法鉴定。
五、Chemicon免疫荧光检测
用Chemicon试剂(Chemicon International Inc, Temecula, CA, USA)对所有标本进行间接免疫荧光检测。筛查试剂中含有7种混合单克隆抗体，即甲型及乙型流感病毒、RSV、副流感病毒1、2、3型及腺病毒单克隆抗体。当筛查试验为阳性时，再用单一特异性单克隆抗体对新鲜标本孔进行检测。10～20 μl混合单克隆抗体或单一单克隆抗体置于标本上，在37℃孵育30分钟后，用PBS洗片3次，加含伊文斯蓝的荧光素标记羊抗鼠IgG, 37℃孵育30分钟，风干后封片。在荧光显微镜下读片，放大倍数为400倍。由试剂盒提供阳性及阴性对照。如果一孔涂片中含有大约200个细胞，则认为此片是可以评价的。在筛查试验中如果发现有2个完整的明显的细胞内染色，则认为筛查阳性。在确定试验中RSV及副流感病毒显示细胞浆内包涵体，甲型及乙型流感病毒为核染色或细胞浆染色。
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对第一部分标本同时进行筛查及7种病毒的确定。在第二部分标本中，一张涂片用于筛查，如筛查为阳性，则用另一张涂片进行确定试验。第一部分标本由3人分别阅片，第二部分标本由2人分别阅片。
六、数据处理
将Chemicon筛查及确定试验中均为阳性且在病毒分离中亦为阳性的标本定为真阳性(TP)，Chemicon筛查阴性而病毒分离为阳性的标本定为假阴性(FN)。在Chemicon筛查及确定试验中均为阳性而病毒分离为阴性的标本为假阳性(FP)。筛查为阳性的标本如被确定试验证实为阴性，则被认为是非特异染色。经所有方法检查均为阴性的标本被认为是真阴性(TF)[8]。
七、计算公式
敏感性(%)=[TP/(TP+FN)]×100%; 特异性(%)=[TN/(TN+FP)]×100%
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结 果
一、第一部分标本结果
用Chemicon试剂筛查与确定试验同时进行，以避免重复染色对标本的破坏。96例患儿的标本中有8例的细胞数太少，因此有88例患儿的标本可用于评价，见表1。22例病毒分离阳性(25%)。用Chemicon试剂筛查检出了22例病毒分离阳性者中的96%的病例(21/22)。38例筛查阳性的标本中有31例在确定试验中显示特异染色82%(31/38)。1例筛查试验阳性而确定试验阴性的标本，病毒分离显示为乙型流感病毒，还有另外6例，共7例(7/88, 8%)确定试验阴性或呈现非特异染色。
与病毒分离比较，Chemicon确定试验的敏感性为95%, 特异性为86% 。由Chemicon筛查及确定试验发现的另5例RSV，3位阅片人均认为其染色为特异性染色。
表1 Chemicon检测与病毒分离的特异性及敏感性 阳性标本
, 百拇医药
Chemicon
确定阳性
病毒分
离阳性
真阳
性
假阳
性
假阴
性
特异
性(%)
敏感
, 百拇医药 性(%)
总阳性
31
22
20
11
2
86
95
RSV
21
12
11
10
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1
88
91
副流感病毒
3
3
3
3
3
100
100
甲型流感病毒
2
1
, 百拇医药
1
1
0
98
100
乙型流感病毒
2
3
2
0
1
100
66
腺病毒
, 百拇医药
3
2
2
1
0
98
100
注：表中数字除最后两列外均为例数
二、第二部分标本结果
由北京儿童医院收集的300例患儿的细胞涂片标本中，280例有足够的细胞。Chemicon筛查及确定试验证实105例(38%)的标本含有病毒抗原。其中甲型流感病毒抗原阳性50例，RSV阳性36例，腺病毒阳性9例，副流感病毒2型阳性5例，3型阳性3例，1及3型同时感染2例。Chemicon筛查试验中，4%(12/280)为非特异染色。
, 百拇医药
讨 论
Chemicon方法已被报道过，并经过WHO的3个参考中心审评，结果良好[9]。在本研究中，Chemicon筛查及确定试验对冻存标本的回顾性检测表明本方法的特异性86 %，敏感性达95%。而Chemicon方法的最大优点是可以一次筛查多种病毒抗原。
在7种呼吸道病毒中，用Chemicon试验检测RSV的阳性率(21/88,25%)高于病毒分离(12/88, 13%)，有研究表明免疫荧光法较细胞培养确定RSV感染更为有效[10，11]。由于1994～1995年瑞典没有出现许多流感病例，因此，尚不能充分地评价Chemicon检测流感病毒的效果。在1994～1995年流感流行季节，北京儿童下呼吸道感染者中有19%被证实为甲型流感病毒感染，这也说明此方法的高度敏感性。
免疫荧光法诊断呼吸道病毒感染的快速及实用性已被许多研究证实。利用混合单克隆抗体进行筛查是一个很大的进展[12-14]。本方法的缺点是在筛查中有4%～8% 的标本为非特异染色，有时这种非特异染色非常明显，可分布于细胞核周围，杯状细胞上部或为细胞内散在的包涵体，阅片人的经验对于区别特异与非特异性染色是非常重要的。在临床工作中不能仅根据筛查结果作出诊断，对筛查阳性者必须进行确定试验。此外，也应特别注意操作方法。最好是分别使用2张细胞涂片进行筛查与确定试验，以免重新染色时丢失细胞和破坏抗原表达。孔与孔之间要有比较明显的分界，以免试剂之间的污染。
, 百拇医药
在标本被送到实验室后2小时内可以进行7种呼吸道病毒的检测是本试剂的最大优点。在当今滥用抗生素，大量抗生素耐药菌株出现的情况下，迅速、正确的病毒病因诊断是非常重要的。本研究发现在北京下呼吸道感染儿童中38%为病毒感染所致，也提示快速诊断的重要性。
参考文献
1 Palumbo PE, Douglas Jr. Respiratory tract infections. In: Spector S, Lancz GJ. eds. Clinical virology manual. New York: Elsevier, 1986. 263-268.
2 Sullivan CJ ， Jordan MC. Diagnosis of viral pneumonia. Semin Respir Infect, 1983, 3:148-161.
, 百拇医药
3 Welliver RC. Detection, pathogenesis, and therapy of respiratory syncytial virus infections. Clin Microbiol Rev, 1988, 1:27-39.
4 Hall BC, McBride JT, Walsh EE. Aerosolized ribavirin treatment of infants with respiratory syncytial viral infection. N Engl J Med, 1983, 308:1443-1447.
5 WHO. Rapid laboratory techniques for the diagnosis of viral infections: report of a WHO scientific group, WHO Tech Rep Ser. Geneva: World Health Organ, 1981.661.
, http://www.100md.com
6 Ray CG， Minnich LL. Efficiency of immunofluorescence for rapid detection of common respiratory viruses. J Clin Microbiol, 1987, 25:355-357.
7 Bale JR. Creation of a research program to determine the etiology and epidemiology of acute respiratory tract infection among children in developing countries. Rev Infect Dis, 1990, 12 Suppl 8: S5861-5866.
8 Engleberg NC. Diagnostic principles. In: Schaechter M, Medoff G， Eisenstein BI, eds. Mechanisms of microbial disease. Baltimore: Williams and Wilkins, 1993. 657-660.
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9 McDonald JC, Quennec P. Utility of a respiratory virus panel containing a monoclonal antibody pool for screening or respiratory specimens in non-peak respiratory syncytial virus season. J Clin Microbiol, 1993, 31:2809-2811.
10 Lauer BA. Comparison of virus culturing and immunofluorescence for rapid detection of respiratory syncytial virus in nasopharyngeal secretions: sensitivity and specificity. J Clin Microbiol, 1982, 16:411-412.
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11 Gardner PS, McQuillin J, McGuckin R. The late detection of respiratory syncytial virus in cells of respiratory tract by immunofluorescence. J Hyg, 1970, 68:575-580.
12 Schirm J, Luijt DS, Pastoor GW, et al. Rapid detection of respiratory viruses using mixtures of monoclonal antibodies on shell vial cultures. J Med Virol, 1992, 38:147-151.
13 Stout C, Murphy MD, Lawrence S, et al. Evaluation of a monoclonal antibody pool for rapid diagnosis of respiratory viral infections. J Clin Microbiol, 1989, 27:450-452.
14 Matthey S, Nicholson D, Ruhs S, et al. Rapid detection of respiratory viruses by shell viral culture and direct staining by using pooled and individual monoclonal antibodies. J Clin Microbiol, 1992, 30:540-544.
(收稿：1998-07-10 修回：1999-02-05), 百拇医药
单位：100045首都医科大学附属北京市儿童医院内科(申昆玲)；北京市儿科研究所(买颖、刘亚谊、江载芳);；中国医学论坛报社(照日格图);；Department of Virology, Swedish Institute for Infectious Disease Control, S-105 21 Stockholm, Sweden(Annika Linde)
关键词：荧光免疫测定；呼吸道合胞病毒；抗体；单克隆；抗原；病毒
中华儿科杂志990703 【摘要】 目的 评价一种商品化的免疫荧光检测试剂 (Chemicon International Inc, Temecula, CA, USA)用于呼吸道病毒感染诊断的敏感性及特异性。方法 间接免疫荧光方法，包括筛查及确定试验。筛查试剂中含有7种混合单克隆抗体，即甲型及乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒(RSV)、副流感病毒1、2、3型及腺病毒单克隆抗体。此外还有分别针对上述7种病毒的单克隆抗体用于确定试验。本研究用Chemicon 试剂盒对96例患儿的冻存鼻咽分泌物或支气管肺泡灌洗液细胞涂片标本进行回顾性检测，并与病毒分离结果进行比较。此外还用Chemicon 试剂检测了1994年11月～1995年2月北京儿童医院300例下呼吸道感染患儿的鼻咽分泌物标本。结果 与病毒分离结果相比，Chemicon确定试剂检测病毒抗原的敏感性为95%、特异性为86%。北京儿童医院的标本中有38%(105/280)被确定为病毒感染，其中甲型流感病毒20%、RSV 14%、腺病毒3%、副流感病毒1、2、及3型7%。结论Chemicon呼吸道病毒诊断试剂能够同时检测多种呼吸道病毒抗原，对于确定呼吸道病毒感染是一种非常好的方法。但需要注意的是在筛查试验中有4%～8% 的标本呈非特异染色。
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Detection of multiple respiratory viral antigens in nasopharyngeal secretions with immunofluorescence assay SHEN Kunling*, MAI Ying, LIU Yayi, et al.* Department of Pediatric Internal Medicine, Beijing Children′s Hospital, Beijing 100045
【Abstract】 Objective Antigen detection with immunofluorescence is an efficient method for diagnosis of respiratory tract infections, but such a method previously has not been applied for simple screening of multiple respiratory viruses. Pools of monoclonal antibodies against various respiratory viruses are now available, and are proven to be potentially important tools for improvement of antigen detection in nasopharyngeal secretion specimen. To evaluate the commercially available Chemicon immunofluorescence assay (IFA, respiratory viruses panel and identification kit), an indirect IFA containing a pool of monoclonal antibodies for screening for influenza virus types A and B, respiratory syncytial virus (RSV), parainfluenza virus types 1,2 and 3 and adenovirus, and the respective individual monoclonal ntibodies.Methods Frozen nasopharyngeal secretions or bronchoalveolar lavage specimens from 96 patients with respiratory infections were retrospectively examined with the assay, and the results were compared with cell culture virus isolation. Nasopharyngeal secretions from 300 children with lower respiratory tract infections collected at Beijing Children′s Hospital during the 1994-1995 winter season were also examined with the IFA.Results The sensitivity of the Chemicon assay versus virus isolation was 95% and specificity 86%. A viral etiology was identified in 105/280 (38%) Chinese children whose samples were evaluable (influenza A 20%, RSV 14%, adenovirus 3% and parainfluenza 1,2,3,7%).Conclusion The Chemicon IFA was shown to be an excellent tool for identification of viral respiratory tract infections although there was a problem with the the screening assay where around 4%-8% of samples had non-specific staining, necessitating verification test.
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【Key words】 Fluoroimmunoassay Respiratory syncytial viruses Antibodies, monoclonal Antigens, viral
呼吸道合胞病毒(RSV)、流感病毒、副流感病毒1、2及3型和腺病毒是下呼吸道感染的常见病原[1-3]。快速诊断呼吸道病毒感染对于指导治疗、避免不必要的抗生素使用及采取必要的隔离措施都有重要意义[4]。免疫荧光技术检测临床标本中的病毒抗原已有20多年历史，是快速、有效而廉价的方法[5，6]。虽然病毒分离仍为“黄金”方法，但由于不同病毒需要不同的培养细胞很难在普通试验室作为常规使用[7]。聚合酶链反应可能比免疫荧光方法更为敏感，但价格贵，对RNA病毒需要进行逆转录。Chemicon呼吸道病毒诊断试剂可以同时在一孔细胞涂片上进行7种病毒抗原筛查。如筛查为阳性则再用单一病毒特异的单克隆抗体进行确定试验。可减少对阴性标本的不必要的单一病毒抗原的检测，同时又不致遗漏常见的呼吸道病毒。
, 百拇医药
材料与方法
一、临床标本
1.标本采集时间为1995年2月14日～1995年3月6日，急性下呼吸道感染患儿82例的鼻咽分泌物及14例支气管肺泡灌洗液细胞涂片，标本取自瑞典Karolinska医院病毒室。
2.北京儿童医院的300例急性下呼吸道感染患儿的鼻咽分泌物标本。其中83例为门诊患儿，217例为住院患儿，年龄为2个月～14岁，标本采集时间为1994年11月～1995年2月。
二、标本采集
将塑料导管经鼻腔插入7～8 cm，达到咽部后轻轻吸取鼻咽分泌物，然后用2 ml消毒生理盐水冲管，标本立即送实验室。
三、细胞涂片制备
, 百拇医药
用吸管吹打粘液后，1 000 r/min离心10分钟，上清液用于病毒分离，沉淀物用10 ml PBS洗涤，再用少量PBS悬浮，然后点于多孔涂片上，每片涂6～12孔，空气干燥后用冷丙酮固定10分钟，-20℃保存。
四、病毒分离
分离流感病毒、副流感病毒及呼吸道合胞病毒(RSV)，使用马丁-达比狗肾(MDCK)及Ma-104细胞进行培养，总时间为3周。对7天未见细胞病变的MDCK细胞及14天未见病变的Ma-104细胞进行血液吸附试验。对有细胞病变或血液吸附试验阳性的标本再通过直接免疫荧光方法鉴定。
五、Chemicon免疫荧光检测
用Chemicon试剂(Chemicon International Inc, Temecula, CA, USA)对所有标本进行间接免疫荧光检测。筛查试剂中含有7种混合单克隆抗体，即甲型及乙型流感病毒、RSV、副流感病毒1、2、3型及腺病毒单克隆抗体。当筛查试验为阳性时，再用单一特异性单克隆抗体对新鲜标本孔进行检测。10～20 μl混合单克隆抗体或单一单克隆抗体置于标本上，在37℃孵育30分钟后，用PBS洗片3次，加含伊文斯蓝的荧光素标记羊抗鼠IgG, 37℃孵育30分钟，风干后封片。在荧光显微镜下读片，放大倍数为400倍。由试剂盒提供阳性及阴性对照。如果一孔涂片中含有大约200个细胞，则认为此片是可以评价的。在筛查试验中如果发现有2个完整的明显的细胞内染色，则认为筛查阳性。在确定试验中RSV及副流感病毒显示细胞浆内包涵体，甲型及乙型流感病毒为核染色或细胞浆染色。
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对第一部分标本同时进行筛查及7种病毒的确定。在第二部分标本中，一张涂片用于筛查，如筛查为阳性，则用另一张涂片进行确定试验。第一部分标本由3人分别阅片，第二部分标本由2人分别阅片。
六、数据处理
将Chemicon筛查及确定试验中均为阳性且在病毒分离中亦为阳性的标本定为真阳性(TP)，Chemicon筛查阴性而病毒分离为阳性的标本定为假阴性(FN)。在Chemicon筛查及确定试验中均为阳性而病毒分离为阴性的标本为假阳性(FP)。筛查为阳性的标本如被确定试验证实为阴性，则被认为是非特异染色。经所有方法检查均为阴性的标本被认为是真阴性(TF)[8]。
七、计算公式
敏感性(%)=[TP/(TP+FN)]×100%; 特异性(%)=[TN/(TN+FP)]×100%
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结 果
一、第一部分标本结果
用Chemicon试剂筛查与确定试验同时进行，以避免重复染色对标本的破坏。96例患儿的标本中有8例的细胞数太少，因此有88例患儿的标本可用于评价，见表1。22例病毒分离阳性(25%)。用Chemicon试剂筛查检出了22例病毒分离阳性者中的96%的病例(21/22)。38例筛查阳性的标本中有31例在确定试验中显示特异染色82%(31/38)。1例筛查试验阳性而确定试验阴性的标本，病毒分离显示为乙型流感病毒，还有另外6例，共7例(7/88, 8%)确定试验阴性或呈现非特异染色。
与病毒分离比较，Chemicon确定试验的敏感性为95%, 特异性为86% 。由Chemicon筛查及确定试验发现的另5例RSV，3位阅片人均认为其染色为特异性染色。
表1 Chemicon检测与病毒分离的特异性及敏感性 阳性标本
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Chemicon
确定阳性
病毒分
离阳性
真阳
性
假阳
性
假阴
性
特异
性(%)
敏感
, 百拇医药 性(%)
总阳性
31
22
20
11
2
86
95
RSV
21
12
11
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1
88
91
副流感病毒
3
3
3
3
3
100
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甲型流感病毒
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乙型流感病毒
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腺病毒
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注：表中数字除最后两列外均为例数
二、第二部分标本结果
由北京儿童医院收集的300例患儿的细胞涂片标本中，280例有足够的细胞。Chemicon筛查及确定试验证实105例(38%)的标本含有病毒抗原。其中甲型流感病毒抗原阳性50例，RSV阳性36例，腺病毒阳性9例，副流感病毒2型阳性5例，3型阳性3例，1及3型同时感染2例。Chemicon筛查试验中，4%(12/280)为非特异染色。
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讨 论
Chemicon方法已被报道过，并经过WHO的3个参考中心审评，结果良好[9]。在本研究中，Chemicon筛查及确定试验对冻存标本的回顾性检测表明本方法的特异性86 %，敏感性达95%。而Chemicon方法的最大优点是可以一次筛查多种病毒抗原。
在7种呼吸道病毒中，用Chemicon试验检测RSV的阳性率(21/88,25%)高于病毒分离(12/88, 13%)，有研究表明免疫荧光法较细胞培养确定RSV感染更为有效[10，11]。由于1994～1995年瑞典没有出现许多流感病例，因此，尚不能充分地评价Chemicon检测流感病毒的效果。在1994～1995年流感流行季节，北京儿童下呼吸道感染者中有19%被证实为甲型流感病毒感染，这也说明此方法的高度敏感性。
免疫荧光法诊断呼吸道病毒感染的快速及实用性已被许多研究证实。利用混合单克隆抗体进行筛查是一个很大的进展[12-14]。本方法的缺点是在筛查中有4%～8% 的标本为非特异染色，有时这种非特异染色非常明显，可分布于细胞核周围，杯状细胞上部或为细胞内散在的包涵体，阅片人的经验对于区别特异与非特异性染色是非常重要的。在临床工作中不能仅根据筛查结果作出诊断，对筛查阳性者必须进行确定试验。此外，也应特别注意操作方法。最好是分别使用2张细胞涂片进行筛查与确定试验，以免重新染色时丢失细胞和破坏抗原表达。孔与孔之间要有比较明显的分界，以免试剂之间的污染。
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在标本被送到实验室后2小时内可以进行7种呼吸道病毒的检测是本试剂的最大优点。在当今滥用抗生素，大量抗生素耐药菌株出现的情况下，迅速、正确的病毒病因诊断是非常重要的。本研究发现在北京下呼吸道感染儿童中38%为病毒感染所致，也提示快速诊断的重要性。
参考文献
1 Palumbo PE, Douglas Jr. Respiratory tract infections. In: Spector S, Lancz GJ. eds. Clinical virology manual. New York: Elsevier, 1986. 263-268.
2 Sullivan CJ ， Jordan MC. Diagnosis of viral pneumonia. Semin Respir Infect, 1983, 3:148-161.
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4 Hall BC, McBride JT, Walsh EE. Aerosolized ribavirin treatment of infants with respiratory syncytial viral infection. N Engl J Med, 1983, 308:1443-1447.
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(收稿：1998-07-10 修回：1999-02-05), 百拇医药