儿童丙型肝炎病毒感染状况及基因型308例分析
作者：龙桂芳 梁学恩 李卫 林伟雄 唐霞
单位：南宁，530021 广西医科大学第一附属医院儿科
关键词：
中华儿科杂志990822 为掌握广西儿童丙型肝炎病毒(HCV)的感染状况和常见的基因型，我们选择广西健康体检儿童和曾多次接受输血/血浆治疗的患儿两个群体进行对比性研究，应用RT-PCR对血清标本进行HCV-RNA检测，并通过酶切法对HCV进行基因分型。
材料与方法：1.血清标本的收集：收集在我院做健康体检的无肝炎及输血/血浆史的3～10岁广西儿童血清标本308份，其中男173份，女135份; 收集患地中海贫血、再生障碍性贫血等曾多次接受输血/血浆治疗的3～10岁广西患儿血清标本96份，其中男52份，女44份，-20℃保存。
2.试剂的来源：异硫氰酸胍购于美国Sigma公司，MavⅠ购于德国宝灵曼公司，其它试剂购于中国华美公司。所用的引物由中科院北京微生物研究所合成。
, 百拇医药
3.HCV-RNA的检测：HCV-RNA的提取参照Cheung等[1]的方法进行，通过RT-PCR扩增HCV基因组5′-NCR片段来检测HCV-RNA，引物的设计参照Chan[2]所设计的引物209和939为外引物，引物211和940为内引物，采用套式-聚合酶链反应(nested-PCR)扩增，扩增后取第二次PCR扩增产物在含溴化乙锭的2%琼脂糖凝胶上电泳，阳性标本在紫外光下可观察到一条251bp的扩增带。
4.HCV基因分型：引用McOmish等[3]的分型方法对HCV进行基因分型。分别应用限制性内切酶HaeⅢ-RsaⅠ和HinfⅠ-MavⅠ对第二次PCR扩增产物进行消化，消化产物经15%聚丙烯酰胺凝胶电泳，溴化乙锭染色，在紫外光下观察结果。
结果：1.不同群体儿童HCV的感染状况：健康体检儿童HCV感染率约为0.7%(2/308)，曾多次接受输血的患儿HCV感染率22.9%(22/96)。
, 百拇医药
2.HCV基因分型结果：在所有24例HCV阳性标本中17例为1型，3例为2型，3例为3型，有1例为两个型的混合感染，其中一个为3型，另一个用该分型方法无法区分。
讨论：应用RT-PCR检测HCV-RNA，是直接检测HCV本身的方法，结合nested-PCR，能大大提高检测的敏感性，是诊断HCV感染的可靠手段。本研究通过HCV-RNA检测发现健康体检儿童的感染率为0.65%，而多次接受输血治疗患儿的感染率为22.9%，明显高于健康体检儿童(P<0.01)，表明血源性途径是HCV传播的主要途径。
目前认为感染我国人群的HCV主要是1b/Ⅱ型和2a/Ⅲ型，1a/Ⅰ型和2b/Ⅳ型少见，近年来对广西存在的HCV基因型有少量研究报道，发现常见的基因型为1～3型[4，5]。本研究发现1型HCV在广西占主导地位，其次为2型和3型，未发现4～6型，但有1例未能定型，体现了目前HCV基因分型方法的局限性。
, http://www.100md.com
参考文献
1 Cheung RC，Matsui SM，Greenberg HB.Rapid and sensitive method for dectectionc of hepatitis C virus RNA by using silica particles.J Clin Microbiol，1994,32：2593-2597.
2 Chan SW，McOmish F，Holmes EC，et al.Analysis of a new hepatitis C virus type and its phylogenetic relationship to existing variants.J Gen Virol，1992，73：1131-1141.
3 McOmish F，Yap PL，Dow BC，et al.Geographical distribution of hepatitis C virusgenotypes in blood donors：an international collaborative survey.J Clin Microbiol，1994，32：884-892.
4 李平川，张振权，王海涛，等.广西肝癌高发区壮族自然人群及肝病 患者中感染的HCV基因型的对比研究.中国公共卫生学报，1998，17：56-57.
5 葛宪民，王树声，李丹亚，等.广西吸毒成瘾者丙型肝炎病毒的感染及其分子生物学研究.广西预防医学，1996，2：1-7.
(收稿：1998-09-11 修回：1999-03-15), 百拇医药
单位：南宁，530021 广西医科大学第一附属医院儿科
关键词：
中华儿科杂志990822 为掌握广西儿童丙型肝炎病毒(HCV)的感染状况和常见的基因型，我们选择广西健康体检儿童和曾多次接受输血/血浆治疗的患儿两个群体进行对比性研究，应用RT-PCR对血清标本进行HCV-RNA检测，并通过酶切法对HCV进行基因分型。
材料与方法：1.血清标本的收集：收集在我院做健康体检的无肝炎及输血/血浆史的3～10岁广西儿童血清标本308份，其中男173份，女135份; 收集患地中海贫血、再生障碍性贫血等曾多次接受输血/血浆治疗的3～10岁广西患儿血清标本96份，其中男52份，女44份，-20℃保存。
2.试剂的来源：异硫氰酸胍购于美国Sigma公司，MavⅠ购于德国宝灵曼公司，其它试剂购于中国华美公司。所用的引物由中科院北京微生物研究所合成。
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3.HCV-RNA的检测：HCV-RNA的提取参照Cheung等[1]的方法进行，通过RT-PCR扩增HCV基因组5′-NCR片段来检测HCV-RNA，引物的设计参照Chan[2]所设计的引物209和939为外引物，引物211和940为内引物，采用套式-聚合酶链反应(nested-PCR)扩增，扩增后取第二次PCR扩增产物在含溴化乙锭的2%琼脂糖凝胶上电泳，阳性标本在紫外光下可观察到一条251bp的扩增带。
4.HCV基因分型：引用McOmish等[3]的分型方法对HCV进行基因分型。分别应用限制性内切酶HaeⅢ-RsaⅠ和HinfⅠ-MavⅠ对第二次PCR扩增产物进行消化，消化产物经15%聚丙烯酰胺凝胶电泳，溴化乙锭染色，在紫外光下观察结果。
结果：1.不同群体儿童HCV的感染状况：健康体检儿童HCV感染率约为0.7%(2/308)，曾多次接受输血的患儿HCV感染率22.9%(22/96)。
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2.HCV基因分型结果：在所有24例HCV阳性标本中17例为1型，3例为2型，3例为3型，有1例为两个型的混合感染，其中一个为3型，另一个用该分型方法无法区分。
讨论：应用RT-PCR检测HCV-RNA，是直接检测HCV本身的方法，结合nested-PCR，能大大提高检测的敏感性，是诊断HCV感染的可靠手段。本研究通过HCV-RNA检测发现健康体检儿童的感染率为0.65%，而多次接受输血治疗患儿的感染率为22.9%，明显高于健康体检儿童(P<0.01)，表明血源性途径是HCV传播的主要途径。
目前认为感染我国人群的HCV主要是1b/Ⅱ型和2a/Ⅲ型，1a/Ⅰ型和2b/Ⅳ型少见，近年来对广西存在的HCV基因型有少量研究报道，发现常见的基因型为1～3型[4，5]。本研究发现1型HCV在广西占主导地位，其次为2型和3型，未发现4～6型，但有1例未能定型，体现了目前HCV基因分型方法的局限性。
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参考文献
1 Cheung RC，Matsui SM，Greenberg HB.Rapid and sensitive method for dectectionc of hepatitis C virus RNA by using silica particles.J Clin Microbiol，1994,32：2593-2597.
2 Chan SW，McOmish F，Holmes EC，et al.Analysis of a new hepatitis C virus type and its phylogenetic relationship to existing variants.J Gen Virol，1992，73：1131-1141.
3 McOmish F，Yap PL，Dow BC，et al.Geographical distribution of hepatitis C virusgenotypes in blood donors：an international collaborative survey.J Clin Microbiol，1994，32：884-892.
4 李平川，张振权，王海涛，等.广西肝癌高发区壮族自然人群及肝病 患者中感染的HCV基因型的对比研究.中国公共卫生学报，1998，17：56-57.
5 葛宪民，王树声，李丹亚，等.广西吸毒成瘾者丙型肝炎病毒的感染及其分子生物学研究.广西预防医学，1996，2：1-7.
(收稿：1998-09-11 修回：1999-03-15), 百拇医药