细小病毒B19与先天性唇腭裂畸形的相关关系
作者：蔡定邦 郭亮 梁恩来 陈享 文忠 林华锦 梅敏 周丹
单位：蔡定邦、梁恩来、陈享、文忠、林华锦、梅敏、周丹：526021 广东肇庆市第一人民医院；郭亮：青岛市人民医院
关键词：
中华儿科杂志990817 我们对84例先天唇腭裂畸形儿人类细小病毒B19(Human parvovirus B19，B19)感染状况进行检测，报告如下。
对象和方法 1.对象：⑴先天性唇腭裂畸形组(唇腭裂组):84例，来自1996年11月肇庆国际微笑行动接受畸形手术矫治的唇腭裂178例患儿。要求为：符合先天性唇腭裂诊断、无合并症、外周血象及肝功和两对半检查无异常者。年龄为6个月～15岁。诊断唇裂20例，腭裂27例，唇腭裂37例。(2)住院患儿组(患儿组)：共156例，是1996年11月至1997年3月我院住院患儿。年龄为1个月～15岁。诊断(含1例的第一或第二诊断)为：支气管肺炎50例、上呼吸道炎16例、小儿腹泻28例、胃炎7例、急性肾炎8例、支气管炎6例、先天性心脏病及病毒性心肌炎各5例、迁延性黄疸7例、G-6-PD低下并急性溶血10例、急性白血病4例、地中海贫血5例、灭鼠药中毒3例、过敏性紫癜、血小板减少性紫癜及痢疾各2例、系统性红斑狼疮，荨麻疹，川崎病，肾病综合征，结核性脑膜炎，化脓性脑膜炎，脐疝，美尼尔综合征各1例。⑶健康儿童组(健康儿组)：173例，为肇庆市端州区及鼎湖区1996年11月至1997年4月间体检正常的婴幼儿童。年龄1个月至15岁。
, 百拇医药
2.标本采集及处理：采指端或肘静脉血置于干净密封小容器Eppendof管中。注意严格消毒及防止污染。
3.方法：(1)材料：Taq-DNA酶、dNTP、10×PCR缓冲液、氯化镁等试剂均购自Promega公司，引物亦由上海Promega公司合成，序列如下：A1：5′AATGAAAAC- TTTCCATTTAATGA3′。B1：5′TCCTGA- ACTGGTCCCGGGGATGG3′。A2：5′GCG- TGGAAGTGTAGCTGTGCC3′。B2：5′CAGAGCTTTCACCACCACTGC3′；(2)标本处理：无菌采取标本的制备及DNA抽提采用chelex裂解煮沸法进行；(3)巢式PCR反应过程：反应体积为50 μl，内含1×PCR缓冲液，1.25 mmol MgCl2, 200 μmol dNTP；第一次PCR过程的引物为A1、B1，量为100 ng，2.5 UTaq-DNA 聚合酶及5 μl处理后的标本DNA。PCR反应条件为热起动5分钟后转入循环，循环参数为：93℃1分钟；56℃45秒；72℃20秒；共35个循环。第二次PCR过程的反应条件同第一次，但引物为A2、B2，模板为5 μl第一次PCR的产物。第一次PCR反应的产物长度为590 bp,第二次PCR反应的产物长度为355 bp。第二次PCR反应结束后取反应产物20 μl，进行琼脂糖电泳，同时做PCRMarker电泳，标本有355bp&127;左右产物者视为阳性结果。
, 百拇医药
结果：各组细小病毒B19检测阳性结果:唇腭裂组为28例(33.3%)与健康儿组为10例(5.8%)比较，P<0.01，与病儿组13例(8.3%)比较，P<0.01，健康儿组5.8%与患儿组8.3%比较，P>0.05。
讨论：人类细小病毒B19是动物病毒中体积最小、结构最简单的一种单链、线状、无包膜的小DNA病毒，1974年由英国学者Cossart 等偶然发现，其后自1981年始的研究陆续证明了儿童感染B19可引起以下一些疾病：⑴传染性红斑；&127;⑵一过性再障危象；⑶纯红细胞再生障碍性贫血；⑷特发性血小板减少性紫癜；⑸关节炎：小关节为主，对称性多关节炎急性发作；⑹其它：与B19感染有关的疾病谱还在扩大中，如过敏性紫癜、粒细胞减少症、噬血细胞综合征、脑炎、支气管炎、川崎病等一些疾病。本研究从对156例住院患儿的疾病诊断与B19阳性检出与173例健康儿对比，差异无显著性，但作为先天性唇腭裂畸形儿84例，其B19阳性检出率高达33.3%。与健康儿及住院患儿组相比，差异均有非常显著性(P<0.01)。提示先天性唇腭裂畸形与B19病毒感染可能相关。从文献报道，如学者Warkany认为，某些病毒确实能导致人类先天性缺陷者只有少数几种，如风疹病毒、巨细胞病毒以及罔底弓形体等。胎儿生前可感染且这种感染与某先天性缺陷有关者，只有Ⅱ型单纯疱疹病毒，其他如B组柯萨奇病毒、委内瑞拉马脑炎病毒、水痘病毒、梅毒螺旋体以及某些泌尿系感染的病原体，亦有人注意到妊娠期感染流感病毒或肝炎，可能发生胎儿畸形[1]。先天性唇腭裂畸形，为胚胎第二月时第一鳃弓发育异常所致，孕妇在早期妊娠时，处于特殊的生理状态感染B19病毒，能否促使免疫功能不完善的胎儿发生唇腭裂发育发生畸形？从结果分析，本组采用巢式PCR法检测B19病毒，方法先进、准确[2]。唇腭裂畸形B19阳性率显著高于健康儿与其他疾病儿，是存在一定的相关性与可能性。B19是否致唇腭裂畸形，还待进一步探讨。另外，患有唇腭裂畸形还可以导致人体免疫屏障功能降低，相应可能易为B19病毒的入侵和存留，亦可能是其阳性检出率高于其他组的原因之一。应继续研究探索。
, http://www.100md.com
参考文献
1 连志浩. 先天缺陷的危险因子和病因.见: 安笑兰、符绍莲，主编.环境优生学.北京：北京医科大学、中国协和医科大学联合出版，1995.252.
2 Carriere C, Boulanger P，Delsert C.A rapid method of sample preparation for detection of DNA viruses in human serum by polymerase.Chain Reaction J Virol Methods, 1993, 44 (2-3):221-234.
(收稿：1998-09-07 修回：1998-12-28), 百拇医药
单位：蔡定邦、梁恩来、陈享、文忠、林华锦、梅敏、周丹：526021 广东肇庆市第一人民医院；郭亮：青岛市人民医院
关键词：
中华儿科杂志990817 我们对84例先天唇腭裂畸形儿人类细小病毒B19(Human parvovirus B19，B19)感染状况进行检测，报告如下。
对象和方法 1.对象：⑴先天性唇腭裂畸形组(唇腭裂组):84例，来自1996年11月肇庆国际微笑行动接受畸形手术矫治的唇腭裂178例患儿。要求为：符合先天性唇腭裂诊断、无合并症、外周血象及肝功和两对半检查无异常者。年龄为6个月～15岁。诊断唇裂20例，腭裂27例，唇腭裂37例。(2)住院患儿组(患儿组)：共156例，是1996年11月至1997年3月我院住院患儿。年龄为1个月～15岁。诊断(含1例的第一或第二诊断)为：支气管肺炎50例、上呼吸道炎16例、小儿腹泻28例、胃炎7例、急性肾炎8例、支气管炎6例、先天性心脏病及病毒性心肌炎各5例、迁延性黄疸7例、G-6-PD低下并急性溶血10例、急性白血病4例、地中海贫血5例、灭鼠药中毒3例、过敏性紫癜、血小板减少性紫癜及痢疾各2例、系统性红斑狼疮，荨麻疹，川崎病，肾病综合征，结核性脑膜炎，化脓性脑膜炎，脐疝，美尼尔综合征各1例。⑶健康儿童组(健康儿组)：173例，为肇庆市端州区及鼎湖区1996年11月至1997年4月间体检正常的婴幼儿童。年龄1个月至15岁。
, 百拇医药
2.标本采集及处理：采指端或肘静脉血置于干净密封小容器Eppendof管中。注意严格消毒及防止污染。
3.方法：(1)材料：Taq-DNA酶、dNTP、10×PCR缓冲液、氯化镁等试剂均购自Promega公司，引物亦由上海Promega公司合成，序列如下：A1：5′AATGAAAAC- TTTCCATTTAATGA3′。B1：5′TCCTGA- ACTGGTCCCGGGGATGG3′。A2：5′GCG- TGGAAGTGTAGCTGTGCC3′。B2：5′CAGAGCTTTCACCACCACTGC3′；(2)标本处理：无菌采取标本的制备及DNA抽提采用chelex裂解煮沸法进行；(3)巢式PCR反应过程：反应体积为50 μl，内含1×PCR缓冲液，1.25 mmol MgCl2, 200 μmol dNTP；第一次PCR过程的引物为A1、B1，量为100 ng，2.5 UTaq-DNA 聚合酶及5 μl处理后的标本DNA。PCR反应条件为热起动5分钟后转入循环，循环参数为：93℃1分钟；56℃45秒；72℃20秒；共35个循环。第二次PCR过程的反应条件同第一次，但引物为A2、B2，模板为5 μl第一次PCR的产物。第一次PCR反应的产物长度为590 bp,第二次PCR反应的产物长度为355 bp。第二次PCR反应结束后取反应产物20 μl，进行琼脂糖电泳，同时做PCRMarker电泳，标本有355bp&127;左右产物者视为阳性结果。
, 百拇医药
结果：各组细小病毒B19检测阳性结果:唇腭裂组为28例(33.3%)与健康儿组为10例(5.8%)比较，P<0.01，与病儿组13例(8.3%)比较，P<0.01，健康儿组5.8%与患儿组8.3%比较，P>0.05。
讨论：人类细小病毒B19是动物病毒中体积最小、结构最简单的一种单链、线状、无包膜的小DNA病毒，1974年由英国学者Cossart 等偶然发现，其后自1981年始的研究陆续证明了儿童感染B19可引起以下一些疾病：⑴传染性红斑；&127;⑵一过性再障危象；⑶纯红细胞再生障碍性贫血；⑷特发性血小板减少性紫癜；⑸关节炎：小关节为主，对称性多关节炎急性发作；⑹其它：与B19感染有关的疾病谱还在扩大中，如过敏性紫癜、粒细胞减少症、噬血细胞综合征、脑炎、支气管炎、川崎病等一些疾病。本研究从对156例住院患儿的疾病诊断与B19阳性检出与173例健康儿对比，差异无显著性，但作为先天性唇腭裂畸形儿84例，其B19阳性检出率高达33.3%。与健康儿及住院患儿组相比，差异均有非常显著性(P<0.01)。提示先天性唇腭裂畸形与B19病毒感染可能相关。从文献报道，如学者Warkany认为，某些病毒确实能导致人类先天性缺陷者只有少数几种，如风疹病毒、巨细胞病毒以及罔底弓形体等。胎儿生前可感染且这种感染与某先天性缺陷有关者，只有Ⅱ型单纯疱疹病毒，其他如B组柯萨奇病毒、委内瑞拉马脑炎病毒、水痘病毒、梅毒螺旋体以及某些泌尿系感染的病原体，亦有人注意到妊娠期感染流感病毒或肝炎，可能发生胎儿畸形[1]。先天性唇腭裂畸形，为胚胎第二月时第一鳃弓发育异常所致，孕妇在早期妊娠时，处于特殊的生理状态感染B19病毒，能否促使免疫功能不完善的胎儿发生唇腭裂发育发生畸形？从结果分析，本组采用巢式PCR法检测B19病毒，方法先进、准确[2]。唇腭裂畸形B19阳性率显著高于健康儿与其他疾病儿，是存在一定的相关性与可能性。B19是否致唇腭裂畸形，还待进一步探讨。另外，患有唇腭裂畸形还可以导致人体免疫屏障功能降低，相应可能易为B19病毒的入侵和存留，亦可能是其阳性检出率高于其他组的原因之一。应继续研究探索。
, http://www.100md.com
参考文献
1 连志浩. 先天缺陷的危险因子和病因.见: 安笑兰、符绍莲，主编.环境优生学.北京：北京医科大学、中国协和医科大学联合出版，1995.252.
2 Carriere C, Boulanger P，Delsert C.A rapid method of sample preparation for detection of DNA viruses in human serum by polymerase.Chain Reaction J Virol Methods, 1993, 44 (2-3):221-234.
(收稿：1998-09-07 修回：1998-12-28), 百拇医药