肾病综合征患儿血和尿中NO与cGMP的变化及糖皮质激素对它们的影响
作者：张敬京 杨霁云 丁洁 俞礼霞
单位：100034 北京医科大学第一医院儿科
关键词：
中华儿科杂志991017 为了解一氧化氮(nitric oxide，NO)在肾脏疾病时的变化，我们观察了10例肾病综合征(NS)患儿血、尿NO-2/NO-3和环鸟苷酸(cGMP)的变化，并做了应用激素后的动态观察。
研究对象：10例NS住院患儿，年龄8～14岁，男6例，女4例，入院前均未行激素治疗，入院后在使用激素前和使用后[即口服强的松1.5～2 mg/(kg.d)或静脉注射甲基氢化泼尼松10～15 mg/kg，隔日1次，用药前及用药1～3周后]接受了检测。并有同期住院的非肾脏疾病和无活动性炎症的患儿作为对照组。
, http://www.100md.com
实验方法：(1)血及尿标本收集：所有病例均于晨7∶00～8∶00留取新鲜尿液和EDTA抗凝血，迅速放入冰壶内。1小时之内低温离心2 000 r/min，10分钟后留取上清液。(2)血浆NO-3测定方法：由解放军总医院提供。(3)尿NO-2/NO-3测定：采用改良的Griess方法(由深圳晶美生物公司提供的进口试剂盒)。结果以测定值除以同份标本的肌酐值(nmol/mg肌酐)来表示。(4)血及尿cGMP测定：采用放射性免疫分析法(由上海中医药大学提供试剂盒)。
统计学处理：结果用均数±标准误(
)表示。采用SSPC/PC软件进行t检验和配对t检验。
, 百拇医药
结果：(1)10例患儿激素使用前尿NO-2/NO-3及尿cGMP明显低于正常对照组，使用激素后与用前比较差异无显著意义。(2)10例患儿激素使用前的血NO-3均值明显高于正常对照组，使用激素后血NO-3明显下降至正常范围，与用前比较差异有显著意义(P<0.05)。(3)10例患儿激素使用前血cGMP值与正常对照组相比差异无显著意义，使用后虽有下降，但差异仍无显著意义(表1)。
表1 10例肾病综合征患儿使用激素治疗前后尿及
血中NO以及cGMP的变化() 组别
例数
, http://www.100md.com
尿NO-2/NO-3
(nmol/mg肌酐)
尿cGMP
(pmol/mg肌酐)
血NO-3
(μmol/L)
血cGMP
(pmol/L)
激素治疗组
10
激素使用前
, 百拇医药
950±110
484±40
75±5
6.5±1.3
激素使用后
922±144
499±137
24±3
5.4±0.7
对照组
18
1315±198
655±60
, http://www.100md.com
31±4
5.6±0.7
激素治疗前与对照组比较t值
0.009*
0.06
0.019*
0.352
治疗组治疗前后比较t值
0.073
0.843
0.001*
, http://www.100md.com 0.258
*P<0.05
讨论：NO是通过促进cGMP的合成来发挥生理作用的，另一方面NO本身半衰期极短，在体内迅速氧化生成无机的NO-2/NO-3，所以NO-2/NO-3及cGMP的测定反映了NO的代谢状态及其活性。
本研究结果显示，使用激素前NS患儿血NO-3明显高于正常对照组。关于NS时血中NO变化的报告不多，血中NO增高可能是由于：(1)NS这一免疫介导的疾病，因全身免疫系统被激活，NO的产生明显增加；(2)NS时肾小球的滤过面积和滤过指数都有降低，有可能使NO的排泄障碍，导致NO在血中的蓄积；(3)这些患儿大部分都有血小板增高，而血小板在免疫系统被激活的状态下，也是产生NO的重要来源。
, http://www.100md.com
尿中NO可能来源于肾脏的固有细胞和浸润细胞，是肾脏局部产生NO的反映。本组NS患儿虽有血中NO增高，但尿中NO减低，其降低的原因可能为：(1)NS不是以巨噬细胞浸润增多为主的病变；(2)NS时肾脏固有细胞功能异常，NO产生减少；(3)NS时肾小球滤过指数降低，从而使NO的排泄障碍。
本实验结果还提示，尿中cGMP与NO-2/NO-3平行，说明cGMP作为NO活性的反映物质，确与尿中NO变化一致。但血中的cGMP无明显变化，我们考虑可能因为：(1)NO是弥散入细胞内后激活细胞内的cGMP发挥其生物效应的，这个过程是一个多步骤的过程，所以NO与cGMP可能不一致。(2)血液中有大量红细胞，其中的血红蛋白中的铁能与NO竞争性结合，从而造成cGMP与NO不一致。(3)也有报道认为cGMP还可来自NO以外的生物途径，如心钠素、一氧化碳等，所以cGMP和NO的测定结果可能不一致。
, http://www.100md.com 糖皮质激素应用后血中NO-3明显减低，与体外细胞水平的实验结果一致。糖皮质激素不仅能抑制诱导一氧化氮合酶(NOS)产生的一些细胞因子，还能抑制NOS作用的辅助因子BH4的产生和底物L-精氨酸的转运，最主要的是能在基因转录、蛋白表达等多个水平直接抑制诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的产生。
动态观察患儿尿中NO及cGMP，在激素使用前后均未发现明显变化。说明激素对血中NO影响明显，但对尿中NO影响尚不明显，又一次说明了血与尿中NO的变化是不一致的。其次，激素治疗虽已使血中NO下降，但尿仍未缓解，此时10例患儿尿蛋白仍(++)～(++++)；Trachtman曾报告单纯NS患儿接受激素治疗后，肾病虽已缓解，尿中NO仍未恢复；这些都说明激素对NS的疗效不是通过NO起作用；目前有许多研究用干预NO的方法治疗疾病，但寄希望通过改变NO治疗NS，可能不是一个主要途径。
(收稿：1998-12-15 修回：1999-07-05), 百拇医药
单位：100034 北京医科大学第一医院儿科
关键词：
中华儿科杂志991017 为了解一氧化氮(nitric oxide，NO)在肾脏疾病时的变化，我们观察了10例肾病综合征(NS)患儿血、尿NO-2/NO-3和环鸟苷酸(cGMP)的变化，并做了应用激素后的动态观察。
研究对象：10例NS住院患儿，年龄8～14岁，男6例，女4例，入院前均未行激素治疗，入院后在使用激素前和使用后[即口服强的松1.5～2 mg/(kg.d)或静脉注射甲基氢化泼尼松10～15 mg/kg，隔日1次，用药前及用药1～3周后]接受了检测。并有同期住院的非肾脏疾病和无活动性炎症的患儿作为对照组。
, http://www.100md.com
实验方法：(1)血及尿标本收集：所有病例均于晨7∶00～8∶00留取新鲜尿液和EDTA抗凝血，迅速放入冰壶内。1小时之内低温离心2 000 r/min，10分钟后留取上清液。(2)血浆NO-3测定方法：由解放军总医院提供。(3)尿NO-2/NO-3测定：采用改良的Griess方法(由深圳晶美生物公司提供的进口试剂盒)。结果以测定值除以同份标本的肌酐值(nmol/mg肌酐)来表示。(4)血及尿cGMP测定：采用放射性免疫分析法(由上海中医药大学提供试剂盒)。
统计学处理：结果用均数±标准误(
)表示。采用SSPC/PC软件进行t检验和配对t检验。, 百拇医药
结果：(1)10例患儿激素使用前尿NO-2/NO-3及尿cGMP明显低于正常对照组，使用激素后与用前比较差异无显著意义。(2)10例患儿激素使用前的血NO-3均值明显高于正常对照组，使用激素后血NO-3明显下降至正常范围，与用前比较差异有显著意义(P<0.05)。(3)10例患儿激素使用前血cGMP值与正常对照组相比差异无显著意义，使用后虽有下降，但差异仍无显著意义(表1)。
表1 10例肾病综合征患儿使用激素治疗前后尿及
血中NO以及cGMP的变化(
) 组别例数
, http://www.100md.com
尿NO-2/NO-3
(nmol/mg肌酐)
尿cGMP
(pmol/mg肌酐)
血NO-3
(μmol/L)
血cGMP
(pmol/L)
激素治疗组
10
激素使用前
, 百拇医药
950±110
484±40
75±5
6.5±1.3
激素使用后
922±144
499±137
24±3
5.4±0.7
对照组
18
1315±198
655±60
, http://www.100md.com
31±4
5.6±0.7
激素治疗前与对照组比较t值
0.009*
0.06
0.019*
0.352
治疗组治疗前后比较t值
0.073
0.843
0.001*
, http://www.100md.com 0.258
*P<0.05
讨论：NO是通过促进cGMP的合成来发挥生理作用的，另一方面NO本身半衰期极短，在体内迅速氧化生成无机的NO-2/NO-3，所以NO-2/NO-3及cGMP的测定反映了NO的代谢状态及其活性。
本研究结果显示，使用激素前NS患儿血NO-3明显高于正常对照组。关于NS时血中NO变化的报告不多，血中NO增高可能是由于：(1)NS这一免疫介导的疾病，因全身免疫系统被激活，NO的产生明显增加；(2)NS时肾小球的滤过面积和滤过指数都有降低，有可能使NO的排泄障碍，导致NO在血中的蓄积；(3)这些患儿大部分都有血小板增高，而血小板在免疫系统被激活的状态下，也是产生NO的重要来源。
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尿中NO可能来源于肾脏的固有细胞和浸润细胞，是肾脏局部产生NO的反映。本组NS患儿虽有血中NO增高，但尿中NO减低，其降低的原因可能为：(1)NS不是以巨噬细胞浸润增多为主的病变；(2)NS时肾脏固有细胞功能异常，NO产生减少；(3)NS时肾小球滤过指数降低，从而使NO的排泄障碍。
本实验结果还提示，尿中cGMP与NO-2/NO-3平行，说明cGMP作为NO活性的反映物质，确与尿中NO变化一致。但血中的cGMP无明显变化，我们考虑可能因为：(1)NO是弥散入细胞内后激活细胞内的cGMP发挥其生物效应的，这个过程是一个多步骤的过程，所以NO与cGMP可能不一致。(2)血液中有大量红细胞，其中的血红蛋白中的铁能与NO竞争性结合，从而造成cGMP与NO不一致。(3)也有报道认为cGMP还可来自NO以外的生物途径，如心钠素、一氧化碳等，所以cGMP和NO的测定结果可能不一致。
, http://www.100md.com 糖皮质激素应用后血中NO-3明显减低，与体外细胞水平的实验结果一致。糖皮质激素不仅能抑制诱导一氧化氮合酶(NOS)产生的一些细胞因子，还能抑制NOS作用的辅助因子BH4的产生和底物L-精氨酸的转运，最主要的是能在基因转录、蛋白表达等多个水平直接抑制诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的产生。
动态观察患儿尿中NO及cGMP，在激素使用前后均未发现明显变化。说明激素对血中NO影响明显，但对尿中NO影响尚不明显，又一次说明了血与尿中NO的变化是不一致的。其次，激素治疗虽已使血中NO下降，但尿仍未缓解，此时10例患儿尿蛋白仍(++)～(++++)；Trachtman曾报告单纯NS患儿接受激素治疗后，肾病虽已缓解，尿中NO仍未恢复；这些都说明激素对NS的疗效不是通过NO起作用；目前有许多研究用干预NO的方法治疗疾病，但寄希望通过改变NO治疗NS，可能不是一个主要途径。
(收稿：1998-12-15 修回：1999-07-05), 百拇医药