新生鼠缺氧缺血性脑损伤时脑内一氧化氮和一氧化氮合酶的变化及药物干预的影响
作者：贾莉婷 吴金良 王小阳 程秀永 朱长连 张国珍 张欣欣 郭丽英 周元聪
单位：贾莉婷 吴金良 王小阳 程秀永 朱长连 张国珍 张欣欣(郑州，河南医科大学第三附属医院儿科 450052)；郭丽英 周元聪(中国科学院上海生物化学研究所)
关键词：
中华儿科杂志000116 随着对一氧化氮(NO)生物作用研究的深入,NO与缺氧缺血性脑损伤的关系引起人们的广泛关注,但新生儿缺氧缺血性脑病(HIE)与NO的关系报道较少。为了探讨NO在HIE发生中的作用，采用新生大鼠HIE模型观察了HIE及药物干预对脑组织中NO及一氧化氮合酶(NOS)的影响。
对象
7日龄Wistar大鼠[1]，雌雄不限，体重12～18 g，购自河南医科大学实验动物中心，随机分为:(1)正常对照组：未做任何处理;(2)HIE组：分为缺氧1 h和2 h组;(3)药物干预组：分为丹参、脑活素和神经生长因子(NGF)干预组。术前30 min腹腔注射药物，乙醚吸入麻醉后，分离并结扎左侧颈总动脉及吸入8%氧2 h制成HIE模型，1 h后再次腹腔注射药物一剂。药物剂量：丹参0.2 ml/20 g,脑活素0.05 ml/20 g，NGF 0.02 mg/20 g。NGF系从江浙腹蛇毒中提取，由中国科学院上海生化所提供。
, http://www.100md.com
方法
HIE后48 h处死鼠，分离左、右大脑并精确称重，冰浴中按1∶6加4℃生理盐水，匀浆、离心后取上清用分光光度法测NO含量及NOS活性。试剂盒购自南京建成生物工程研究所。NOS活性定义为每毫克脑组织蛋白每分钟生成1 nmol NO为一个活性单位。脑蛋白含量测定用双缩脲法。
结果
1.缺氧时间对左、右半球脑组织NO、NOS的影响(表1)：表1显示缺氧缺血后大脑半球NO、NOS均明显高于对照组的测定值(P<0.01)，而且缺氧1 h与缺氧2 h的测定值无明显差别(P>0.05),在缺氧2 h后缺血组NO测定值左、右半球存在差异(t=3.767，P<0.001)。
表1 缺氧缺血性脑损伤时大鼠左、右半球脑组织NO、NOS变化(
±s) 组别
, 百拇医药
鼠数
NO(μmol/L)
NOS[U/(mg.min)]
左脑
右脑
左脑
右脑
对照组
16
20± 8
17±6
2.2±0.6
, 百拇医药
2.0±0.6
缺氧1 h组
10
32±11*
26±5*
3.0±0.6*
3.4±0.6*
缺氧2 h组
17
36±12*
24±6*
, 百拇医药
3.3±0.8*
3.1±0.7*
注：与对照组比较，t检验*P<0.01
2.药物干预对新生大鼠左、右半球脑组织NO、NOS的影响(表2)：表2显示左、右大脑半球NO、NOS的测定值在药物干预后均明显低于HIE组(P<0.01)，其中尤以左侧大脑半球的NO含量降低最明显，且显著低于对照组(P<0.05，<0.01),NO含量及NOS活性在左、右大脑无明显差别。
表2 药物干预对HIE大鼠左、右半球脑组织NO、NOS的影响(±s) 组别
鼠
, 百拇医药
数
NO(μmol/L)
NOS[U/(mg.min)]
左脑
右脑
左脑
右脑
对照组
16
19.6± 7.6
16.5±6.0
2.2±0.6
, 百拇医药
2.0±0.6
HIE组
17
36.0±12.1*
23.8±5.6*
3.3±0.8*
3.1±0.7*
丹参组
12
9.5± 3.3*△
18.0±6.2△
, http://www.100md.com
2.2±0.4△
1.9±0.9△
脑活素组
12
13.3± 4.7**△
15.4±2.6△
2.5±0.6△
2.3±0.5△
NGF组
12
12.2± 2.4*△
, http://www.100md.com
14.2±3.5△
2.0±0.4△
1.9±0.8△
注：与对照组比较，t检验*P<0.01，**P<0.05；与HIE组比较，t检验△P<0.01 讨论
NO是一种自由基性质的生物活性分子，在细胞之间广泛起作用[2]。过高浓度的NO则对神经元产生损伤作用。脑组织中NO水平的高低主要由NOS控制。本实验缺氧1 h与2 h组左、右半球NO、NOS无明显差别，但在缺氧2 h组左半球脑组织NO含量明显高于右半球脑组织，表明在缺血基础上随缺氧时间延长脑组织损伤更严重。新生儿HIE多采用综合疗法，丹参、脑活素、NGF的疗效尚有争议，本实验应用上述三种药物对新生鼠模型进行干预后，左、右大脑半球NO、NOS较HIE组均明显下降，提示此类药物在HIE时的治疗作用机制之一，可能与抑制NO生成有关，从而为HIE时应用丹参、脑活素及NGF治疗提供了一定的理论依据。
, 百拇医药
基金项目：河南省教委基金资助项目(97320007)
参考文献：
[1]Dobbing J, Sands J. Comparative aspective of the brain growth spurt. Early Human Development. 1979, 3:79-82.
[2]Moncada S, Higgs A. The L-arginine-nitric oxide pathway. N Eng J Med, 1993, 329: 2002-2012.
收稿日期：1999-01-27, http://www.100md.com
单位：贾莉婷 吴金良 王小阳 程秀永 朱长连 张国珍 张欣欣(郑州，河南医科大学第三附属医院儿科 450052)；郭丽英 周元聪(中国科学院上海生物化学研究所)
关键词：
中华儿科杂志000116 随着对一氧化氮(NO)生物作用研究的深入,NO与缺氧缺血性脑损伤的关系引起人们的广泛关注,但新生儿缺氧缺血性脑病(HIE)与NO的关系报道较少。为了探讨NO在HIE发生中的作用，采用新生大鼠HIE模型观察了HIE及药物干预对脑组织中NO及一氧化氮合酶(NOS)的影响。
对象
7日龄Wistar大鼠[1]，雌雄不限，体重12～18 g，购自河南医科大学实验动物中心，随机分为:(1)正常对照组：未做任何处理;(2)HIE组：分为缺氧1 h和2 h组;(3)药物干预组：分为丹参、脑活素和神经生长因子(NGF)干预组。术前30 min腹腔注射药物，乙醚吸入麻醉后，分离并结扎左侧颈总动脉及吸入8%氧2 h制成HIE模型，1 h后再次腹腔注射药物一剂。药物剂量：丹参0.2 ml/20 g,脑活素0.05 ml/20 g，NGF 0.02 mg/20 g。NGF系从江浙腹蛇毒中提取，由中国科学院上海生化所提供。
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方法
HIE后48 h处死鼠，分离左、右大脑并精确称重，冰浴中按1∶6加4℃生理盐水，匀浆、离心后取上清用分光光度法测NO含量及NOS活性。试剂盒购自南京建成生物工程研究所。NOS活性定义为每毫克脑组织蛋白每分钟生成1 nmol NO为一个活性单位。脑蛋白含量测定用双缩脲法。
结果
1.缺氧时间对左、右半球脑组织NO、NOS的影响(表1)：表1显示缺氧缺血后大脑半球NO、NOS均明显高于对照组的测定值(P<0.01)，而且缺氧1 h与缺氧2 h的测定值无明显差别(P>0.05),在缺氧2 h后缺血组NO测定值左、右半球存在差异(t=3.767，P<0.001)。
表1 缺氧缺血性脑损伤时大鼠左、右半球脑组织NO、NOS变化(
±s) 组别, 百拇医药
鼠数
NO(μmol/L)
NOS[U/(mg.min)]
左脑
右脑
左脑
右脑
对照组
16
20± 8
17±6
2.2±0.6
, 百拇医药
2.0±0.6
缺氧1 h组
10
32±11*
26±5*
3.0±0.6*
3.4±0.6*
缺氧2 h组
17
36±12*
24±6*
, 百拇医药
3.3±0.8*
3.1±0.7*
注：与对照组比较，t检验*P<0.01
2.药物干预对新生大鼠左、右半球脑组织NO、NOS的影响(表2)：表2显示左、右大脑半球NO、NOS的测定值在药物干预后均明显低于HIE组(P<0.01)，其中尤以左侧大脑半球的NO含量降低最明显，且显著低于对照组(P<0.05，<0.01),NO含量及NOS活性在左、右大脑无明显差别。
表2 药物干预对HIE大鼠左、右半球脑组织NO、NOS的影响(
±s) 组别鼠
, 百拇医药
数
NO(μmol/L)
NOS[U/(mg.min)]
左脑
右脑
左脑
右脑
对照组
16
19.6± 7.6
16.5±6.0
2.2±0.6
, 百拇医药
2.0±0.6
HIE组
17
36.0±12.1*
23.8±5.6*
3.3±0.8*
3.1±0.7*
丹参组
12
9.5± 3.3*△
18.0±6.2△
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2.2±0.4△
1.9±0.9△
脑活素组
12
13.3± 4.7**△
15.4±2.6△
2.5±0.6△
2.3±0.5△
NGF组
12
12.2± 2.4*△
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14.2±3.5△
2.0±0.4△
1.9±0.8△
注：与对照组比较，t检验*P<0.01，**P<0.05；与HIE组比较，t检验△P<0.01 讨论
NO是一种自由基性质的生物活性分子，在细胞之间广泛起作用[2]。过高浓度的NO则对神经元产生损伤作用。脑组织中NO水平的高低主要由NOS控制。本实验缺氧1 h与2 h组左、右半球NO、NOS无明显差别，但在缺氧2 h组左半球脑组织NO含量明显高于右半球脑组织，表明在缺血基础上随缺氧时间延长脑组织损伤更严重。新生儿HIE多采用综合疗法，丹参、脑活素、NGF的疗效尚有争议，本实验应用上述三种药物对新生鼠模型进行干预后，左、右大脑半球NO、NOS较HIE组均明显下降，提示此类药物在HIE时的治疗作用机制之一，可能与抑制NO生成有关，从而为HIE时应用丹参、脑活素及NGF治疗提供了一定的理论依据。
, 百拇医药
基金项目：河南省教委基金资助项目(97320007)
参考文献：
[1]Dobbing J, Sands J. Comparative aspective of the brain growth spurt. Early Human Development. 1979, 3:79-82.
[2]Moncada S, Higgs A. The L-arginine-nitric oxide pathway. N Eng J Med, 1993, 329: 2002-2012.
收稿日期：1999-01-27, http://www.100md.com