108例小儿葡萄球菌感染的细菌学分类及抗生素耐药性分析
作者：单才华 贺超奇
单位：单才华(311200 浙江省萧山市第一人民医院儿科)；贺超奇(311200 浙江省萧山市第一人民医院儿科)
关键词：
中华儿科杂志000218 败血症是儿科院内感染的重要疾病，葡萄球菌则是导致小儿败血症的重要致病菌，随着第三代头孢类广谱抗生素的广泛应用，耐甲氧西林葡萄球菌(MRS)所占比例越来越大。最近几年来对葡萄球菌的分类研究又有新的进展。为了了解小儿感染病原体中葡萄球菌的分类学及抗生素耐药性特点，我们对本院108例儿科葡萄球菌感染进行调查，报告如下。
材料方法
1.菌株来源：1996年3月～1997年间我院儿科血培养中分离出的108株葡萄球菌。其诊断标准符合小儿败血症的诊断标准[1]。
, 百拇医药
2.材料：血液双相培养瓶、葡萄球菌鉴定系统来自法国梅里埃公司，抗生素除万古霉素为Sigma化学公司产品；氧氟沙星为昆山制药厂厂家标准品；诺氟沙星为新昌制药厂厂家标准品；青霉素为江西东风制药厂生产，其余均为中国药品生物制品检定所生产的标准品；暂行标准品或对照品。质控菌株ATCC29213。
3.方法：葡萄球菌的分离及鉴定参照文献[2]及梅里埃公司配套说明，凝固酶用试管法。耐甲氧西林葡萄球菌(MRS)用苯唑西林纸片、含4 %NaCl的M-H琼脂35℃ 24 h确定, 凝固酶阴性葡萄球菌(CNS)延迟至48 h判读。β-内酰胺酶测定为碘试管法，参照文献[3]的方法进行测定。最小抑菌浓度(MIC)采用微量肉汤稀释法[4]，根椐测定结果分别计算各种抗生素对MRS和甲氧西林敏感葡萄球菌(MSS)的最小抑菌浓度的50 %(MIC50)和最小抑菌浓度的90 %(MIC90)，并根据临界浓度计算敏感率。
, http://www.100md.com 结果
1.1996年3月～1997年12月间，同期不同年龄组血培养阳性率及葡萄球菌的比例提示年龄越小，则葡萄球菌性败血症的比例越高，其中1岁以下病例中血培养阳性率的比例高达10.4 %，2～6岁组为7.3 %,7～15岁组为5.5 %。葡萄球菌性败血症的比例1岁以下病例中为70.3 %,2～6岁组为38.6 %,7～15岁组为27.9 %。经统计学处理(χ2分析)三者差异有非常显著的意义(P<0.01)。
2.108株葡萄球菌分布于10种葡萄球菌内，以金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、溶血葡萄球菌及木糖葡萄球菌为主，上述4种葡萄球菌的分离率占94.4 %(102/108),在102株临床分离菌中，耐甲氧西林葡萄球菌(MRS)占62.7 %(64/102)，4种葡萄球菌以金黄色葡萄球菌的MRS的分离率最高(69.1 %),其它3种葡萄球菌的MRS分离率分别为57.9 %;58.3 %;60.0 %,经统计学处理(χ2分析)差异无显著性。不同菌种的产β-内酰胺酶率差异均无显著性，但MRS的产酶率(0.91)高于MSS的(0.74), 差异有显著性 (P<0.05)。具体结果见表1。
, http://www.100md.com
表1 108株临床分离菌的细菌学分布及耐药性 细菌种类
菌株数
(产β-内酰胺酶株)
MRS检出率(%)
(菌株数)
金黄色葡萄球菌*
42(36)
69.1(29)
表皮葡萄球菌
38(32)
57.9(22)
, 百拇医药 溶血葡萄球菌**
12(10)
58.3( 7)
木糖葡萄球菌
10(8)
60.0( 6)
其它葡萄球菌△
6(4)
16.7( 2)
合计
108(90)
61.1(66)
, 百拇医药
*凝固酶100%阳性,**凝固酶8%(1/12)阳性,△共有华纳、松鼠、人型、腐生、头型、迟缓葡萄球菌各1株表2 葡萄球菌对不同药物的敏感率(%) 抗生素
临界浓度
(μg/ml)
MRS(n=66)
MSS(n=42)
MRS敏感率 (%)
MIC50
MIC90
MRS敏感率(%)
, http://www.100md.com
MIC50
MIC90
青霉素G
0.1
0
32
>128
33.6
8
64
氨苄青霉素
0.25
0
, 百拇医药
64
>128
29.2
8
64
苯唑青霉素
2
0
32
>128
100.0
2.0
8
, 百拇医药 头孢唑啉
8
13
64
>128
92.0
0.5
2
头孢噻肟
8
46
16
>128
92.0
, 百拇医药
2
4
头孢哌酮
16
53
8
>128
100.0
4
8
洁霉素
0.5
0
>128
, 百拇医药
>128
37.5
4
>128
红霉素
0.5
12
>128
>128
42.6
2
>128
氯霉素
, 百拇医药
8
46
32
>128
86.3
8
64
妥布霉素
4
39
32
>128
67.0
, 百拇医药 2
32
庆大霉素
4
38
64
128
77.0
1
128
丁胺卡那
16
62
16
, http://www.100md.com
128
82.0
4
64
四环素
4
37
16
128
71.0
2
128
诺氟沙星
, http://www.100md.com 4
60
2
>128
88.0
1
16
氧氟沙星
2
76
1
16
76.0
0.25
, http://www.100md.com
2
环丙氟哌酸
1
71
0.5
16
92.0
<0.12
1
万古霉素
4
100
2
, 百拇医药 2
100.0
1
2
3.对抗生素敏感性：MRS和MSS对17种抗生素敏感性试验结果，见表2。所有葡萄球菌对万古霉素均敏感，MRS对环丙沙星、丁胺卡那敏感率较高。MRS的多重耐药性较MSS严重。对17种抗生素的多重耐药在6～16种不等。
讨论
1.由结果可见小儿血培养阳性率高于同期成人，新生儿尤其明显。其中感染菌以葡萄球菌增加为主要因素。以前曾认为凝固酶阴性葡萄球菌为污染菌，支持这一观点的依据是凝固酶阴性葡萄球菌致病性弱，但最近的研究表明凝固酶阴性葡萄球菌具有细胞粘质等致病因子，有一定致病能力，是医院感染的重要菌种[5]。而儿童尤其是新生儿免疫功能不全是葡萄球菌感染的重要易感因素。国外的研究表明，体重过小及胎龄不足是败血症的两个高危因素，以G+球菌感染机会更大。故凝固酶阴性的葡萄球菌检出特别在新生儿血培养中检出不容忽视。
, 百拇医药
2.以凝固酶来鉴别葡萄球菌自60年代临床沿用多年，而后葡萄球菌属新检出的菌种日渐增多，至1991年已有30多种，且大多为凝固酶阴性，表1的结果表明了这点。故简单用凝固酶区分葡萄球菌不够科学。108株葡萄球菌共分布于10种葡萄球菌内，以金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、溶血葡萄球菌和木糖葡萄球菌4种为主，这和国内外报道不尽相符，可能为地域性差别所致。
3.以对苯唑西林的敏感性可把葡萄球菌分为耐甲氧西林葡萄球菌(MRS)和甲氧西林敏感葡萄球菌(MSS)，MRS中以耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)研究较多，近来耐甲氧西林的凝固酶阴性葡萄球菌(MRScon)已引起人们的注意，有资料表明两者的耐药谱及机理都有许多相似的地方，MRS对苯唑西林耐药，是由于其细胞壁上的青霉素结合蛋白结构变异所致，而其胞内往往有多种耐药机制如对氨基糖苷类药的纯化酶、对喹喏酮类药物的耐药机理是由于DNA旋转酶的变异等，使其对多种药物耐药。MSS对青霉素类耐药仅因产生青霉素酶，一般用含有酶抑制剂的或耐酶药物敏感。我们的结果也证实这一点。MRS的比例和近年国内资料相近。对MRS较敏感的药物分别为万古霉素、环丙沙星、丁胺卡那。
, 百拇医药
参考文献
[1]张澍.现代儿科学.北京：人民军医出版社，1998.403.
[2]Kloos WE, Schleifer KH. Simplified scheme for routine identification of human Staplococcus species. J Clin Microbiol, 1975,1:82.
[3]Lennette EH, ed. Manual of clinical microbiology. 4th ed. Washington DC: American Society for Microbiology, 1985.1005-1006.
[4]National Committee for Clinical Laboratory standards.Approved standard M7-A3.Methods for dilution antimicrobial susceptibility tsets fot bacteria that grow aerobically-thiraedition.Villanova Pa: NCCLS, 1993.12-18.
[5]罗海波.现代医学细菌学.北京:人民卫生出版社,1995.5-8.
收稿日期：1999-07-19, http://www.100md.com
单位：单才华(311200 浙江省萧山市第一人民医院儿科)；贺超奇(311200 浙江省萧山市第一人民医院儿科)
关键词：
中华儿科杂志000218 败血症是儿科院内感染的重要疾病，葡萄球菌则是导致小儿败血症的重要致病菌，随着第三代头孢类广谱抗生素的广泛应用，耐甲氧西林葡萄球菌(MRS)所占比例越来越大。最近几年来对葡萄球菌的分类研究又有新的进展。为了了解小儿感染病原体中葡萄球菌的分类学及抗生素耐药性特点，我们对本院108例儿科葡萄球菌感染进行调查，报告如下。
材料方法
1.菌株来源：1996年3月～1997年间我院儿科血培养中分离出的108株葡萄球菌。其诊断标准符合小儿败血症的诊断标准[1]。
, 百拇医药
2.材料：血液双相培养瓶、葡萄球菌鉴定系统来自法国梅里埃公司，抗生素除万古霉素为Sigma化学公司产品；氧氟沙星为昆山制药厂厂家标准品；诺氟沙星为新昌制药厂厂家标准品；青霉素为江西东风制药厂生产，其余均为中国药品生物制品检定所生产的标准品；暂行标准品或对照品。质控菌株ATCC29213。
3.方法：葡萄球菌的分离及鉴定参照文献[2]及梅里埃公司配套说明，凝固酶用试管法。耐甲氧西林葡萄球菌(MRS)用苯唑西林纸片、含4 %NaCl的M-H琼脂35℃ 24 h确定, 凝固酶阴性葡萄球菌(CNS)延迟至48 h判读。β-内酰胺酶测定为碘试管法，参照文献[3]的方法进行测定。最小抑菌浓度(MIC)采用微量肉汤稀释法[4]，根椐测定结果分别计算各种抗生素对MRS和甲氧西林敏感葡萄球菌(MSS)的最小抑菌浓度的50 %(MIC50)和最小抑菌浓度的90 %(MIC90)，并根据临界浓度计算敏感率。
, http://www.100md.com 结果
1.1996年3月～1997年12月间，同期不同年龄组血培养阳性率及葡萄球菌的比例提示年龄越小，则葡萄球菌性败血症的比例越高，其中1岁以下病例中血培养阳性率的比例高达10.4 %，2～6岁组为7.3 %,7～15岁组为5.5 %。葡萄球菌性败血症的比例1岁以下病例中为70.3 %,2～6岁组为38.6 %,7～15岁组为27.9 %。经统计学处理(χ2分析)三者差异有非常显著的意义(P<0.01)。
2.108株葡萄球菌分布于10种葡萄球菌内，以金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、溶血葡萄球菌及木糖葡萄球菌为主，上述4种葡萄球菌的分离率占94.4 %(102/108),在102株临床分离菌中，耐甲氧西林葡萄球菌(MRS)占62.7 %(64/102)，4种葡萄球菌以金黄色葡萄球菌的MRS的分离率最高(69.1 %),其它3种葡萄球菌的MRS分离率分别为57.9 %;58.3 %;60.0 %,经统计学处理(χ2分析)差异无显著性。不同菌种的产β-内酰胺酶率差异均无显著性，但MRS的产酶率(0.91)高于MSS的(0.74), 差异有显著性 (P<0.05)。具体结果见表1。
, http://www.100md.com
表1 108株临床分离菌的细菌学分布及耐药性 细菌种类
菌株数
(产β-内酰胺酶株)
MRS检出率(%)
(菌株数)
金黄色葡萄球菌*
42(36)
69.1(29)
表皮葡萄球菌
38(32)
57.9(22)
, 百拇医药 溶血葡萄球菌**
12(10)
58.3( 7)
木糖葡萄球菌
10(8)
60.0( 6)
其它葡萄球菌△
6(4)
16.7( 2)
合计
108(90)
61.1(66)
, 百拇医药
*凝固酶100%阳性,**凝固酶8%(1/12)阳性,△共有华纳、松鼠、人型、腐生、头型、迟缓葡萄球菌各1株表2 葡萄球菌对不同药物的敏感率(%) 抗生素
临界浓度
(μg/ml)
MRS(n=66)
MSS(n=42)
MRS敏感率 (%)
MIC50
MIC90
MRS敏感率(%)
, http://www.100md.com
MIC50
MIC90
青霉素G
0.1
0
32
>128
33.6
8
64
氨苄青霉素
0.25
0
, 百拇医药
64
>128
29.2
8
64
苯唑青霉素
2
0
32
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100.0
2.0
8
, 百拇医药 头孢唑啉
8
13
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>128
92.0
0.5
2
头孢噻肟
8
46
16
>128
92.0
, 百拇医药
2
4
头孢哌酮
16
53
8
>128
100.0
4
8
洁霉素
0.5
0
>128
, 百拇医药
>128
37.5
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>128
红霉素
0.5
12
>128
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2
>128
氯霉素
, 百拇医药
8
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86.3
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64
妥布霉素
4
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67.0
, 百拇医药 2
32
庆大霉素
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38
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丁胺卡那
16
62
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82.0
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四环素
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37
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71.0
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诺氟沙星
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氧氟沙星
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2
环丙氟哌酸
1
71
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<0.12
1
万古霉素
4
100
2
, 百拇医药 2
100.0
1
2
3.对抗生素敏感性：MRS和MSS对17种抗生素敏感性试验结果，见表2。所有葡萄球菌对万古霉素均敏感，MRS对环丙沙星、丁胺卡那敏感率较高。MRS的多重耐药性较MSS严重。对17种抗生素的多重耐药在6～16种不等。
讨论
1.由结果可见小儿血培养阳性率高于同期成人，新生儿尤其明显。其中感染菌以葡萄球菌增加为主要因素。以前曾认为凝固酶阴性葡萄球菌为污染菌，支持这一观点的依据是凝固酶阴性葡萄球菌致病性弱，但最近的研究表明凝固酶阴性葡萄球菌具有细胞粘质等致病因子，有一定致病能力，是医院感染的重要菌种[5]。而儿童尤其是新生儿免疫功能不全是葡萄球菌感染的重要易感因素。国外的研究表明，体重过小及胎龄不足是败血症的两个高危因素，以G+球菌感染机会更大。故凝固酶阴性的葡萄球菌检出特别在新生儿血培养中检出不容忽视。
, 百拇医药
2.以凝固酶来鉴别葡萄球菌自60年代临床沿用多年，而后葡萄球菌属新检出的菌种日渐增多，至1991年已有30多种，且大多为凝固酶阴性，表1的结果表明了这点。故简单用凝固酶区分葡萄球菌不够科学。108株葡萄球菌共分布于10种葡萄球菌内，以金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、溶血葡萄球菌和木糖葡萄球菌4种为主，这和国内外报道不尽相符，可能为地域性差别所致。
3.以对苯唑西林的敏感性可把葡萄球菌分为耐甲氧西林葡萄球菌(MRS)和甲氧西林敏感葡萄球菌(MSS)，MRS中以耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)研究较多，近来耐甲氧西林的凝固酶阴性葡萄球菌(MRScon)已引起人们的注意，有资料表明两者的耐药谱及机理都有许多相似的地方，MRS对苯唑西林耐药，是由于其细胞壁上的青霉素结合蛋白结构变异所致，而其胞内往往有多种耐药机制如对氨基糖苷类药的纯化酶、对喹喏酮类药物的耐药机理是由于DNA旋转酶的变异等，使其对多种药物耐药。MSS对青霉素类耐药仅因产生青霉素酶，一般用含有酶抑制剂的或耐酶药物敏感。我们的结果也证实这一点。MRS的比例和近年国内资料相近。对MRS较敏感的药物分别为万古霉素、环丙沙星、丁胺卡那。
, 百拇医药
参考文献
[1]张澍.现代儿科学.北京：人民军医出版社，1998.403.
[2]Kloos WE, Schleifer KH. Simplified scheme for routine identification of human Staplococcus species. J Clin Microbiol, 1975,1:82.
[3]Lennette EH, ed. Manual of clinical microbiology. 4th ed. Washington DC: American Society for Microbiology, 1985.1005-1006.
[4]National Committee for Clinical Laboratory standards.Approved standard M7-A3.Methods for dilution antimicrobial susceptibility tsets fot bacteria that grow aerobically-thiraedition.Villanova Pa: NCCLS, 1993.12-18.
[5]罗海波.现代医学细菌学.北京:人民卫生出版社,1995.5-8.
收稿日期：1999-07-19, http://www.100md.com