人类白细胞抗原与格林-巴利综合征相关性的研究
作者：孙璐 刘天慈 郭玉红 关小蕾 吴沪生
单位：孙璐(100045 北京儿科研究所免疫遗传室)；郭玉红(100045 北京儿科研究所免疫遗传室)关小蕾(100045 北京儿科研究所免疫遗传室)；刘天慈(首都医科大学附属北京儿童医院神经科)；吴沪生(首都医科大学附属北京儿童医院神经科)
关键词：
中华儿科杂志000314 格林-巴利综合征(Guillain-Barré syndrome, GBS)又称急性感染性多发性神经根炎，病因尚未完全阐明。一般认为，GBS是由病毒感染后继发的变态反应所引起。国外学者设想人类白细胞抗原(HLA)可能是研究GBS的一个指标，但除了在38例墨西哥患者的调查中发现GBS与DR3 (基因位点)有相关性外[1]，其他研究[2-4]均未发现GBS与HLA抗原具有显著相关性。由于HLA基因频率在不同种族和地区存在差异，因此，我们对汉族GBS患儿与HLA的相关性进行研究。
, 百拇医药
对象
患儿组：50例经北京儿童医院神经专业门诊确诊为GBS的患儿，其中男27例，女23例；发病年龄2～10岁；为华北地区汉族人。对照组：107名同地区健康成人，其中100例进行白细胞Ⅰ类抗原和DR分型，7例只进行Ⅰ类抗原分型。
方法
HLA测定：HLA-Ⅰ类抗原分型按国际标准微量淋巴细胞毒法进行,分型血清由中日友好医院血清中心提供。DR位点的等位基因用聚合酶链式反应/序列特异性引物方法(PCR/SSP)测定。患儿DNA提取使用饱和醋酸钠盐析法，调节DNA浓度为100 mg/L。PCR反应体系25 μl，反应条件为94℃变性60 s，60℃退火90 s，72℃聚合60 s，共30个循环。扩增产物用2%琼脂糖凝胶电泳检测。统计学处理采用相对风险(RR)及卡方检验判定其关联的程度[5]。
结果
, 百拇医药
由表1可见，患儿组与对照组HLA-A、B、DR位点的抗原之间差异无显著性 (P>0.05)，在DR位点，仅DR3的RR值略有增加，但差异无显著性(P>0.05)。在A、B位点上，A3、B16、B22频率较对照组偏高，亦无统计学意义。
表1 HLA与GBS患儿相关性的检测结果 HLA
抗原
患儿组(n=50)
对照组(n=107)
RR值
Pc值
阳性数
阳性率(%)
, 百拇医药 阳性数
阳性率(%)
DR3
3
6
3
2.8
2.0638
1.000
A3
11
22
12
, 百拇医药 11.2
2.2329
0.732
B16
3
6
3
2.8
2.2128
1.000
B22
5
10
, http://www.100md.com 4
3.7
2.8611
1.000
讨论
本研究表明，HLA-Ⅰ、Ⅱ类抗原与该病可能无关，未发现GBS与HLA-A、B、DR位点的相关性。Hillert等[2]报道，HLA-DR、DQ、DP位点与GBS亦无关联。自身免疫性疾病与HLA的相关性除受种族、地理分布等影响外，可能与多个位点相关，即具有多基因综合作用。在GBS患者中发现免疫表达异常，而HLA又具有重要的免疫功能，如细胞免疫与体液免疫均需HLA抗原参与，其中Ⅱ类抗原在自身免疫性疾病及感染性疾病的易感性方面发挥主要作用[6]。因此在探讨本病病因过程中，不应单纯考虑HLA的因素，而应考虑多个基因位点的综合作用，如调控基因的影响，HLA区域以外的因素或抗原构象的影响。此外，外部因素(致病原、环境等)的影响亦不容忽视。
, 百拇医药
本研究虽发现某些HLA-Ⅰ类抗原(A3、B16、B22) 升高,但无统计学差异。在Ⅱ类抗原中发现DR3的RR值略高，差异虽无显著性，但值得注意是DR3与许多自身免疫疾病相关，如系统性红斑狼疮(EF=0.58)、重症肌无力(EF=0.30)、突眼性甲状腺肿(EF=0.42)、乳糜泻(EF=0.72)、疱疹样皮肤炎(EF=0.80)等。从Govodegky等[1]所做的HLA-DR抗原与墨西哥GBS患者的相关性研究发现DR3阳性患儿明显增加(Pc=0.014)，表明本病与HLA之间具有一定内在联系。
依据不同的分类标准GBS可分为不同亚型。由于本研究的患儿组绝大部分具有较为一致的临床表现：四肢出现对称性、弛缓性瘫痪、肌力下降、数对颅神经(主要集中在第Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ、Ⅺ)受损、呼吸肌麻痹Ⅱ～Ⅲ度、肌电图显示神经原性受损，因此未能进行不同类型患儿的比较。国外有学者试图通过不同方面(如年龄、性别、致病原、严重程度及对血浆交换疗法的反应等)的比较来寻找HLA与GBS的相关性，但都未发现具有统计学意义的证据。仅Winer等[3]报道英国GBS患儿中，DR2与急性重症患儿相关。近年北京市儿童医院对所收治的GBS患儿进行了神经电生理检测，认为GBS可分为急性炎症脱髓鞘型和轴索型，而且此两种类型在免疫学致病特征方面有一定差异[7]。如依据以上两种类型进行HLA相关性的研究，并结合基因测序、肽链合成、表位分析等分子遗传学实验技术，必将有助于我们对GBS乃至自身免疫病的认识。
, 百拇医药
参考文献
1，Gorodezky C, Varela B, Castro-Escobar LE, et al. HLA-DR antigens in mexican patients with Guillain-Barré syndrome. J Neuroimmunol, 1983, 4: 1-7.
2，Hillert J, Osterman PO, Olerup O. No association with HLA-DR, -DQ or -DP alleles in Guillain-Barré syndrome. J Neuroimmunol, 1991, 31: 67-72.
3，Winer JB, Briggs D, Welsh K, et al. HLA antigens in the Guillain-Barré syndrome. J Neuroimmunol, 1988, 18: 13-16.
, 百拇医药
4，Kaslow RA, Sullivan-Bolyai JZ, Hafkin B, et al. HLA antigens in Guillain-Barré syndrome. Neurology,1984, 34: 240-242.
5，赵桐茂. HLA分型原理和应用. 上海:上海科学技术出版社，1982.209-211.
6，Dahle C, Vrethem M, Ernerudh J. T lymphocyte subset abnormalities in peripheral blood from patients with the Guillain-Barré syndrome. J Neuroimmunol, 1994, 53: 219-225.
7，张靖，吴沪生，方方，等. 儿童不同类型格林-巴利综合征神经电生理研究.中华儿科杂志，1998，36：457-460.
(收稿日期：1999-07-20), http://www.100md.com
单位：孙璐(100045 北京儿科研究所免疫遗传室)；郭玉红(100045 北京儿科研究所免疫遗传室)关小蕾(100045 北京儿科研究所免疫遗传室)；刘天慈(首都医科大学附属北京儿童医院神经科)；吴沪生(首都医科大学附属北京儿童医院神经科)
关键词：
中华儿科杂志000314 格林-巴利综合征(Guillain-Barré syndrome, GBS)又称急性感染性多发性神经根炎，病因尚未完全阐明。一般认为，GBS是由病毒感染后继发的变态反应所引起。国外学者设想人类白细胞抗原(HLA)可能是研究GBS的一个指标，但除了在38例墨西哥患者的调查中发现GBS与DR3 (基因位点)有相关性外[1]，其他研究[2-4]均未发现GBS与HLA抗原具有显著相关性。由于HLA基因频率在不同种族和地区存在差异，因此，我们对汉族GBS患儿与HLA的相关性进行研究。
, 百拇医药
对象
患儿组：50例经北京儿童医院神经专业门诊确诊为GBS的患儿，其中男27例，女23例；发病年龄2～10岁；为华北地区汉族人。对照组：107名同地区健康成人，其中100例进行白细胞Ⅰ类抗原和DR分型，7例只进行Ⅰ类抗原分型。
方法
HLA测定：HLA-Ⅰ类抗原分型按国际标准微量淋巴细胞毒法进行,分型血清由中日友好医院血清中心提供。DR位点的等位基因用聚合酶链式反应/序列特异性引物方法(PCR/SSP)测定。患儿DNA提取使用饱和醋酸钠盐析法，调节DNA浓度为100 mg/L。PCR反应体系25 μl，反应条件为94℃变性60 s，60℃退火90 s，72℃聚合60 s，共30个循环。扩增产物用2%琼脂糖凝胶电泳检测。统计学处理采用相对风险(RR)及卡方检验判定其关联的程度[5]。
结果
, 百拇医药
由表1可见，患儿组与对照组HLA-A、B、DR位点的抗原之间差异无显著性 (P>0.05)，在DR位点，仅DR3的RR值略有增加，但差异无显著性(P>0.05)。在A、B位点上，A3、B16、B22频率较对照组偏高，亦无统计学意义。
表1 HLA与GBS患儿相关性的检测结果 HLA
抗原
患儿组(n=50)
对照组(n=107)
RR值
Pc值
阳性数
阳性率(%)
, 百拇医药 阳性数
阳性率(%)
DR3
3
6
3
2.8
2.0638
1.000
A3
11
22
12
, 百拇医药 11.2
2.2329
0.732
B16
3
6
3
2.8
2.2128
1.000
B22
5
10
, http://www.100md.com 4
3.7
2.8611
1.000
讨论
本研究表明，HLA-Ⅰ、Ⅱ类抗原与该病可能无关，未发现GBS与HLA-A、B、DR位点的相关性。Hillert等[2]报道，HLA-DR、DQ、DP位点与GBS亦无关联。自身免疫性疾病与HLA的相关性除受种族、地理分布等影响外，可能与多个位点相关，即具有多基因综合作用。在GBS患者中发现免疫表达异常，而HLA又具有重要的免疫功能，如细胞免疫与体液免疫均需HLA抗原参与，其中Ⅱ类抗原在自身免疫性疾病及感染性疾病的易感性方面发挥主要作用[6]。因此在探讨本病病因过程中，不应单纯考虑HLA的因素，而应考虑多个基因位点的综合作用，如调控基因的影响，HLA区域以外的因素或抗原构象的影响。此外，外部因素(致病原、环境等)的影响亦不容忽视。
, 百拇医药
本研究虽发现某些HLA-Ⅰ类抗原(A3、B16、B22) 升高,但无统计学差异。在Ⅱ类抗原中发现DR3的RR值略高，差异虽无显著性，但值得注意是DR3与许多自身免疫疾病相关，如系统性红斑狼疮(EF=0.58)、重症肌无力(EF=0.30)、突眼性甲状腺肿(EF=0.42)、乳糜泻(EF=0.72)、疱疹样皮肤炎(EF=0.80)等。从Govodegky等[1]所做的HLA-DR抗原与墨西哥GBS患者的相关性研究发现DR3阳性患儿明显增加(Pc=0.014)，表明本病与HLA之间具有一定内在联系。
依据不同的分类标准GBS可分为不同亚型。由于本研究的患儿组绝大部分具有较为一致的临床表现：四肢出现对称性、弛缓性瘫痪、肌力下降、数对颅神经(主要集中在第Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ、Ⅺ)受损、呼吸肌麻痹Ⅱ～Ⅲ度、肌电图显示神经原性受损，因此未能进行不同类型患儿的比较。国外有学者试图通过不同方面(如年龄、性别、致病原、严重程度及对血浆交换疗法的反应等)的比较来寻找HLA与GBS的相关性，但都未发现具有统计学意义的证据。仅Winer等[3]报道英国GBS患儿中，DR2与急性重症患儿相关。近年北京市儿童医院对所收治的GBS患儿进行了神经电生理检测，认为GBS可分为急性炎症脱髓鞘型和轴索型，而且此两种类型在免疫学致病特征方面有一定差异[7]。如依据以上两种类型进行HLA相关性的研究，并结合基因测序、肽链合成、表位分析等分子遗传学实验技术，必将有助于我们对GBS乃至自身免疫病的认识。
, 百拇医药
参考文献
1，Gorodezky C, Varela B, Castro-Escobar LE, et al. HLA-DR antigens in mexican patients with Guillain-Barré syndrome. J Neuroimmunol, 1983, 4: 1-7.
2，Hillert J, Osterman PO, Olerup O. No association with HLA-DR, -DQ or -DP alleles in Guillain-Barré syndrome. J Neuroimmunol, 1991, 31: 67-72.
3，Winer JB, Briggs D, Welsh K, et al. HLA antigens in the Guillain-Barré syndrome. J Neuroimmunol, 1988, 18: 13-16.
, 百拇医药
4，Kaslow RA, Sullivan-Bolyai JZ, Hafkin B, et al. HLA antigens in Guillain-Barré syndrome. Neurology,1984, 34: 240-242.
5，赵桐茂. HLA分型原理和应用. 上海:上海科学技术出版社，1982.209-211.
6，Dahle C, Vrethem M, Ernerudh J. T lymphocyte subset abnormalities in peripheral blood from patients with the Guillain-Barré syndrome. J Neuroimmunol, 1994, 53: 219-225.
7，张靖，吴沪生，方方，等. 儿童不同类型格林-巴利综合征神经电生理研究.中华儿科杂志，1998，36：457-460.
(收稿日期：1999-07-20), http://www.100md.com