儿童恶性骨肿瘤患者Th1/Th2亚群漂移的研究
作者：郭爱林 隋延仿 叶菁 范清宇
单位：郭爱林(710032 西安，第四军医大学病理教研室)；隋延仿(710032 西安，第四军医大学病理教研室)；叶菁(710032 西安，第四军医大学病理教研室)；范清宇(第四军医大学唐都医院骨肿瘤研究室)
关键词：
中华儿科杂志000523 儿童恶性骨肿瘤的发病率仅次于造血系统恶性肿瘤，其中成骨肉瘤约占儿童恶性肿瘤的5 %。本病对手术及放化疗的效果不佳，预后极差[1]。随着肿瘤免疫学的发展，以细胞因子为核心的免疫治疗逐渐被临床所接受。根据分泌细胞因子的不同，可将辅助性T淋巴细胞亚群分为辅助性亚群1(Th1)和辅助性亚群2(Th2)两个亚群。Th1亚群与Th2亚群平衡状态的失调，必然导致细胞因子网络的紊乱，从而影响细胞免疫和体液免疫的功能。通过检测细胞因子的水平，可以反映Th1/Th2的平衡状态[2]。恶性骨肿瘤患儿体内Th1/Th2状态尚未见报道。本实验对此进行了研究，以期为细胞因子免疫治疗提供依据。
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对象
儿童恶性骨肿瘤14例，其中成骨肉瘤10例，滑膜肉瘤及成纤维肉瘤各1例，Ewing's肉瘤2例。年龄9～14岁。正常对照组为同年龄、同性别的健康体检的学生。
方法
白细胞介素2(IL-2) 放免试剂盒由上海原子能研究所提供。白细胞介素6 (IL-6) 放免试剂盒由北京北方免疫所提供。白细胞介素10(IL-10)、白细胞介素12(IL-12)、白细胞介素4(IL-4)酶联免疫分析试剂盒由Medgenix、Endogen公司提供。患者血清及外周血单个核细胞培养上清液的获得见参考文献[3]。所有样品均储藏于-80℃ 冰箱。细胞因子检测按照产品说明书进行。
结果
1.血清IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IL-12的检测结果详见表1。恶性骨肿瘤患儿血清中IL-2、IL-12显著降低,IL-4、IL-6、IL-10显著升高(P<0.01)。
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表1 14例恶性肿瘤患儿血清IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IL-12的含量(ng/L) 分组
n
IL-2
IL-4
IL-6
IL-10
IL-12
对照组
14
24.7±2.6
115±39
16±4
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5.3±2.8
6.4±1.7
患者组
14
16.5±4.1
275±54
29±8
14.9±3.1
3.2±2.0
P值
<0.01
<0.001
<0.01
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<0.001
<0.01
2.外周血单个核细胞培养上清IL-2、IL-4的检测结果详见表2。结果表明在使用植物血凝素(PHA)刺激的儿童恶性骨肿瘤患者外周血单核细胞培养上清液中，IL-2含量均较正常对照组显著降低，而IL-4含量显著升高；在不使用PHA刺激的培养上清液中IL-2变化不大，IL-4显著升高。
讨论
大量的证据表明细胞免疫应答在肿瘤免疫中起着主导作用，而辅助性T淋巴细胞亚群居于细胞免疫应答的中心，表2 骨肿瘤患儿外周血单个核细胞培养
上清液中IL-2、IL-4的含量(ng/L) 组别
例数
IL-2
, 百拇医药
IL-4
IL-2+PHA
IL-4+PHA
对照组
6
8±4
5±4
259±78
22± 8
患儿组
6
6±3
9±4
, 百拇医药
138±51
40±11
P值
>0.1
<0.01
<0.01
<0.01
在肿瘤免疫中具有重要作用[4]。进一步的研究发现根据分泌细胞因子的不同，可将辅助性T淋巴细胞亚群分为Th1和Th2两个亚群。Th1亚群以分泌IL-2、γ干扰素(IFN-γ)、IL-12为主。Th2亚群以分泌IL-4、IL-5、IL-6、IL-10为主。Th1主要功能为增强杀伤细胞的细胞毒作用，介导细胞免疫应答，对体液免疫应答有抑制作用。Th2细胞促进抗体的产生，介导体液免疫应答，对细胞免疫应答有抑制作用。Th1亚群与Th2亚群的平衡状态失调必然导致细胞因子网络的紊乱，从而影响细胞免疫和体液免疫的功能。
, 百拇医药
本研究显示恶性骨肿瘤患儿血清中IL-2、IL-12含量显著低于对照组，而IL-4、IL-6、IL-10含量显著高于对照组。IL-2在体内主要由Th1亚群产生，IL-4主要由Th2亚群产生，因此恶性骨肿瘤患儿体内Th1/Th2向Th2亚群方向漂移，从而使细胞免疫应答受到抑制。IL-4由肥大细胞产生，IL-2、IL-6、IL-12由单核细胞、NK细胞产生。PHA刺激T淋巴细胞增殖，不刺激单核巨噬细胞、NK细胞及嗜碱性粒细胞增殖。为排除此类细胞分泌细胞因子的影响，我们检测了外周血单个核细胞在有或无PHA存在时分泌IL-2、IL-4的能力。患者外周血单个核细胞在有或无PHA存在的情况下，其分泌IL-4的能力显著提高，而分泌IL-2的能力在PHA存在的情况下降低，进一步证实了Th1细胞功能减弱，而Th2功能增强。
患者Th1/Th2向Th2漂移的现象，为肿瘤的免疫治疗提供了一条线索。一方面可以向机体注射IL-2、IFN-γ等Th1型细胞因子，另一方面可以应用抗IL-4抗体进行治疗，从而使机体由Th2向Th1逆转，增强细胞免疫，杀伤肿瘤细胞，延长患者生命。我们已根据检测结果向IL-2明显不足的患者注射IL-2、IFN-γ等细胞因子，显示出一定的临床效果。
, http://www.100md.com
基金项目：全军九五重点课题基金资助项目(96Z048)
参考文献
1，吴钥.努力提高我国儿童恶性肿瘤的诊治水平.中华儿科杂志,1998,36:263-264.
2，魏海明，刘志，田志刚,等.检测Th1/Th2亚群的意义.中华医学检验杂志,1998，21:56-59.
3，Patriza P, Anna MB, Tizana DB, et al. Disregulation in Th1/Th2 subsets of CD4+T cell in peripheral blood of colorectal cancer patients and involvement in cancer establishment and progression. Cancer Immunol Immunother， 1996,42：1-8.
4，秦建国，韩本立，潘世春,等. 原发性肝癌患者T淋巴细胞亚群及功能变化在肿瘤复发中的临床意义.中华实验外科杂志,1998，15：11-13.
(收稿日期：1999-05-25), 百拇医药
单位：郭爱林(710032 西安，第四军医大学病理教研室)；隋延仿(710032 西安，第四军医大学病理教研室)；叶菁(710032 西安，第四军医大学病理教研室)；范清宇(第四军医大学唐都医院骨肿瘤研究室)
关键词：
中华儿科杂志000523 儿童恶性骨肿瘤的发病率仅次于造血系统恶性肿瘤，其中成骨肉瘤约占儿童恶性肿瘤的5 %。本病对手术及放化疗的效果不佳，预后极差[1]。随着肿瘤免疫学的发展，以细胞因子为核心的免疫治疗逐渐被临床所接受。根据分泌细胞因子的不同，可将辅助性T淋巴细胞亚群分为辅助性亚群1(Th1)和辅助性亚群2(Th2)两个亚群。Th1亚群与Th2亚群平衡状态的失调，必然导致细胞因子网络的紊乱，从而影响细胞免疫和体液免疫的功能。通过检测细胞因子的水平，可以反映Th1/Th2的平衡状态[2]。恶性骨肿瘤患儿体内Th1/Th2状态尚未见报道。本实验对此进行了研究，以期为细胞因子免疫治疗提供依据。
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对象
儿童恶性骨肿瘤14例，其中成骨肉瘤10例，滑膜肉瘤及成纤维肉瘤各1例，Ewing's肉瘤2例。年龄9～14岁。正常对照组为同年龄、同性别的健康体检的学生。
方法
白细胞介素2(IL-2) 放免试剂盒由上海原子能研究所提供。白细胞介素6 (IL-6) 放免试剂盒由北京北方免疫所提供。白细胞介素10(IL-10)、白细胞介素12(IL-12)、白细胞介素4(IL-4)酶联免疫分析试剂盒由Medgenix、Endogen公司提供。患者血清及外周血单个核细胞培养上清液的获得见参考文献[3]。所有样品均储藏于-80℃ 冰箱。细胞因子检测按照产品说明书进行。
结果
1.血清IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IL-12的检测结果详见表1。恶性骨肿瘤患儿血清中IL-2、IL-12显著降低,IL-4、IL-6、IL-10显著升高(P<0.01)。
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表1 14例恶性肿瘤患儿血清IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IL-12的含量(ng/L) 分组
n
IL-2
IL-4
IL-6
IL-10
IL-12
对照组
14
24.7±2.6
115±39
16±4
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5.3±2.8
6.4±1.7
患者组
14
16.5±4.1
275±54
29±8
14.9±3.1
3.2±2.0
P值
<0.01
<0.001
<0.01
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<0.001
<0.01
2.外周血单个核细胞培养上清IL-2、IL-4的检测结果详见表2。结果表明在使用植物血凝素(PHA)刺激的儿童恶性骨肿瘤患者外周血单核细胞培养上清液中，IL-2含量均较正常对照组显著降低，而IL-4含量显著升高；在不使用PHA刺激的培养上清液中IL-2变化不大，IL-4显著升高。
讨论
大量的证据表明细胞免疫应答在肿瘤免疫中起着主导作用，而辅助性T淋巴细胞亚群居于细胞免疫应答的中心，表2 骨肿瘤患儿外周血单个核细胞培养
上清液中IL-2、IL-4的含量(ng/L) 组别
例数
IL-2
, 百拇医药
IL-4
IL-2+PHA
IL-4+PHA
对照组
6
8±4
5±4
259±78
22± 8
患儿组
6
6±3
9±4
, 百拇医药
138±51
40±11
P值
>0.1
<0.01
<0.01
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在肿瘤免疫中具有重要作用[4]。进一步的研究发现根据分泌细胞因子的不同，可将辅助性T淋巴细胞亚群分为Th1和Th2两个亚群。Th1亚群以分泌IL-2、γ干扰素(IFN-γ)、IL-12为主。Th2亚群以分泌IL-4、IL-5、IL-6、IL-10为主。Th1主要功能为增强杀伤细胞的细胞毒作用，介导细胞免疫应答，对体液免疫应答有抑制作用。Th2细胞促进抗体的产生，介导体液免疫应答，对细胞免疫应答有抑制作用。Th1亚群与Th2亚群的平衡状态失调必然导致细胞因子网络的紊乱，从而影响细胞免疫和体液免疫的功能。
, 百拇医药
本研究显示恶性骨肿瘤患儿血清中IL-2、IL-12含量显著低于对照组，而IL-4、IL-6、IL-10含量显著高于对照组。IL-2在体内主要由Th1亚群产生，IL-4主要由Th2亚群产生，因此恶性骨肿瘤患儿体内Th1/Th2向Th2亚群方向漂移，从而使细胞免疫应答受到抑制。IL-4由肥大细胞产生，IL-2、IL-6、IL-12由单核细胞、NK细胞产生。PHA刺激T淋巴细胞增殖，不刺激单核巨噬细胞、NK细胞及嗜碱性粒细胞增殖。为排除此类细胞分泌细胞因子的影响，我们检测了外周血单个核细胞在有或无PHA存在时分泌IL-2、IL-4的能力。患者外周血单个核细胞在有或无PHA存在的情况下，其分泌IL-4的能力显著提高，而分泌IL-2的能力在PHA存在的情况下降低，进一步证实了Th1细胞功能减弱，而Th2功能增强。
患者Th1/Th2向Th2漂移的现象，为肿瘤的免疫治疗提供了一条线索。一方面可以向机体注射IL-2、IFN-γ等Th1型细胞因子，另一方面可以应用抗IL-4抗体进行治疗，从而使机体由Th2向Th1逆转，增强细胞免疫，杀伤肿瘤细胞，延长患者生命。我们已根据检测结果向IL-2明显不足的患者注射IL-2、IFN-γ等细胞因子，显示出一定的临床效果。
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基金项目：全军九五重点课题基金资助项目(96Z048)
参考文献
1，吴钥.努力提高我国儿童恶性肿瘤的诊治水平.中华儿科杂志,1998,36:263-264.
2，魏海明，刘志，田志刚,等.检测Th1/Th2亚群的意义.中华医学检验杂志,1998，21:56-59.
3，Patriza P, Anna MB, Tizana DB, et al. Disregulation in Th1/Th2 subsets of CD4+T cell in peripheral blood of colorectal cancer patients and involvement in cancer establishment and progression. Cancer Immunol Immunother， 1996,42：1-8.
4，秦建国，韩本立，潘世春,等. 原发性肝癌患者T淋巴细胞亚群及功能变化在肿瘤复发中的临床意义.中华实验外科杂志,1998，15：11-13.
(收稿日期：1999-05-25), 百拇医药