山莨菪碱对缺血缺氧性脑损伤新生大鼠脑内兴奋性氨基酸及丙二醛的影响
作者：夏哲智 冯建华 水泉祥
单位：夏哲智(310003 杭州，浙江大学医学院附属儿童医院内科)；冯建华(310003 杭州，浙江大学医学院附属儿童医院内科)；水泉祥(310003 杭州，浙江大学医学院附属儿童医院内科)
关键词：
中华儿科杂志000618 新生儿窒息是新生儿常见病，窒息引起的缺血缺氧性脑病及颅内出血是新生儿期重要的死亡原因。目前缺血缺氧性脑病发病机制尚未完全阐明，本研究通过制备半球性缺血缺氧性脑损伤动物模型，观察脑内谷氨酸(Glu)、天门冬氨酸(Asp)及丙二醛(MDA)的变化，探讨山莨菪碱(654-2)在缺血缺氧性脑损伤中可能的作用机制。
材料和方法
1.动物模型的制备和分组：实验用Wistar新生大鼠53只，体重12～22 g，由浙江大学医学院动物实验中心提供。按Johnston方法改良[1]，7日龄大鼠清醒状态下，行右颈总动脉结扎术，室温下放置1～2 h后进行低氧处理。将动物置于37℃恒温的密闭容器中，给以体积容积为8% O2和体积容积为92% N2的混合气体，2 h后取出。实验组分别于低氧后0、60、120 min迅速断头取右侧脑组织行Glu、Asp及MDA测定。654-2组亦在清醒状态下，行右颈总动脉结扎后于低氧前向腹腔内注射654-2(1 mg/kg)，低氧后2 h取右侧脑组织进行有关测定。同时设立对照组，对照组不做任何处理，只在相应时间取脑组织进行测定。
, 百拇医药
2.脑组织兴奋性氨基酸(EAA)的测定：取脑后立即称重，将标本用5%三氯醋酸于冰水环境中制成匀浆，低温离心后上清液冰冻保存，用氨基酸自动分析仪(日立835型)测定。具体操作步骤按要求进行。
3.脑组织MDA测定：采用硫代巴比妥酸法，测定组织脂质过氧化终产物MDA含量，以每克脑组织湿重表示。
4.统计学处理：测得数据用均数±标准差(
±s)表示，采用t检验(t′检验)。
结果
由表1可见，对照组可测得一定量的Glu、Asp及MDA，与对照组比较，缺血缺氧组即刻上述指标改变不明显，60及120 min时均明显升高，654-2组与缺血缺氧120 min组比较，除Asp未见明显改变外，Glu及MDA均明显下降。
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表1 654-2对缺血缺氧新生鼠脑内EAA及
MDA的影响(±s,μmol/mg) 组别
鼠数(只)
Glu
Asp
MDA
对照组
11
7.1±1.2
2.6±0.7
140±33
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缺血缺氧组
即刻
11
8.0±1.4
2.8±0.9
145±37
60 min
11
9.2±1.9*
3.2±0.4*
172±19*
120 min
, http://www.100md.com
11
10.8±1.7**
3.9±0.8**
208±19**
654-2治疗组
9
8.7±1.5△
3.8±0.8
150±21△
注：与对照组比较， * P<0.05，**P<0.01；与缺血缺氧120 min组比较，△P<0.01 讨论
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本实验结果表明，缺血缺氧后即刻脑组织MDA改变不明显，随时间延长在缺血缺氧后60 min及120 min时均明显增高，提示脑组织缺血缺氧时存在脂质过氧化，使黄嘌呤脱氢酶转化为黄嘌呤氧化酶，后者催化次黄嘌呤的反应过程中产生O-2和H2O2，进而生成OH-。这些自由基作用于细胞膜的不饱和脂肪酸，生成过氧化脂质(LPO)。MDA是LPO的主要代谢终产物，故MDA升高。LPO可使Na+-K+ ATP酶失去活性，膜通透性改变，溶酶体颗粒崩溃，而致细胞坏死[2]。可见缺血缺氧时LPO升高，LPO又进一步加重组织器官的损害，形成恶性循环，使病情加重。
以Glu、Asp为主的EAA与相应受体结合后即发挥生理性神经递质功能，但病理性过度兴奋则成为有害于脑组织的兴奋毒性物质，是导致脑细胞死亡的关键作用之一[3]。本研究发现新生鼠缺血缺氧时脑内EAA明显升高，提示EAA与自由基一起参与脑损伤的过程，EAA的大量释放依赖于N-甲基D-门冬氨酸(NMDA)受体的Ca2+通道的过度激活，Ca2+大量内流，导致神经元迟发性损伤[4]。
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山莨菪碱是一种抗胆碱能药，具有保护组织，改善微循环的作用。本研究发现654-2可明显减轻缺血缺氧新生鼠脑组织MDA含量，同时也能减少Glu的过度产生，表明654-2对缺血缺氧新生大鼠脑损伤有一定的保护作用。其确切保护作用机制至今还不很清楚，可能与以下作用有关[5-6]：(1)膜稳定作用；(2)阻断Ca2+内流，减轻Ca2+超载：(3)减少氧自由基的生成，防止膜脂质过氧化；(4)减少EAA的过度释放。
参考文献
1，Johnston MV. Neurotransmitter alterations in a model of perinatal hypoxic-ischemic brain injury. Ann Neural, 1983,13:511-516.
2，Chan PH. Role of oxidants in ischemic damage. Stroke, 1996,27:1124-1129.
, http://www.100md.com
3，Steven PB, Ross B, David IG, et al. Correlation between amino acid release and neuropathologic outcome in rat brain following middleartery occlusin. stroke, 1990,21:1727-1733.
4，Meldrum B, Garthwaite J. Excitatory amino acid neurotoxicity and neurodegenerative disease. Trends Pharmacol Sci,1990,11:379-385.
5，徐如祥，易声禹，吴声伶，等.神经细胞Ca2+通道变化及鼠血脑屏障通透性和外伤性脑水肿的影响.中华神经外科杂志，1992,8:41-44.
6，毛少平，龚梅芳，钟萍.山莨菪碱对脑血管内皮细胞与自由基的影响.微循环学杂志，1996,6(4):15-16.
(收稿日期：1999-06-24), http://www.100md.com
单位：夏哲智(310003 杭州，浙江大学医学院附属儿童医院内科)；冯建华(310003 杭州，浙江大学医学院附属儿童医院内科)；水泉祥(310003 杭州，浙江大学医学院附属儿童医院内科)
关键词：
中华儿科杂志000618 新生儿窒息是新生儿常见病，窒息引起的缺血缺氧性脑病及颅内出血是新生儿期重要的死亡原因。目前缺血缺氧性脑病发病机制尚未完全阐明，本研究通过制备半球性缺血缺氧性脑损伤动物模型，观察脑内谷氨酸(Glu)、天门冬氨酸(Asp)及丙二醛(MDA)的变化，探讨山莨菪碱(654-2)在缺血缺氧性脑损伤中可能的作用机制。
材料和方法
1.动物模型的制备和分组：实验用Wistar新生大鼠53只，体重12～22 g，由浙江大学医学院动物实验中心提供。按Johnston方法改良[1]，7日龄大鼠清醒状态下，行右颈总动脉结扎术，室温下放置1～2 h后进行低氧处理。将动物置于37℃恒温的密闭容器中，给以体积容积为8% O2和体积容积为92% N2的混合气体，2 h后取出。实验组分别于低氧后0、60、120 min迅速断头取右侧脑组织行Glu、Asp及MDA测定。654-2组亦在清醒状态下，行右颈总动脉结扎后于低氧前向腹腔内注射654-2(1 mg/kg)，低氧后2 h取右侧脑组织进行有关测定。同时设立对照组，对照组不做任何处理，只在相应时间取脑组织进行测定。
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2.脑组织兴奋性氨基酸(EAA)的测定：取脑后立即称重，将标本用5%三氯醋酸于冰水环境中制成匀浆，低温离心后上清液冰冻保存，用氨基酸自动分析仪(日立835型)测定。具体操作步骤按要求进行。
3.脑组织MDA测定：采用硫代巴比妥酸法，测定组织脂质过氧化终产物MDA含量，以每克脑组织湿重表示。
4.统计学处理：测得数据用均数±标准差(
±s)表示，采用t检验(t′检验)。结果
由表1可见，对照组可测得一定量的Glu、Asp及MDA，与对照组比较，缺血缺氧组即刻上述指标改变不明显，60及120 min时均明显升高，654-2组与缺血缺氧120 min组比较，除Asp未见明显改变外，Glu及MDA均明显下降。
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表1 654-2对缺血缺氧新生鼠脑内EAA及
MDA的影响(
±s,μmol/mg) 组别鼠数(只)
Glu
Asp
MDA
对照组
11
7.1±1.2
2.6±0.7
140±33
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缺血缺氧组
即刻
11
8.0±1.4
2.8±0.9
145±37
60 min
11
9.2±1.9*
3.2±0.4*
172±19*
120 min
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11
10.8±1.7**
3.9±0.8**
208±19**
654-2治疗组
9
8.7±1.5△
3.8±0.8
150±21△
注：与对照组比较， * P<0.05，**P<0.01；与缺血缺氧120 min组比较，△P<0.01 讨论
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本实验结果表明，缺血缺氧后即刻脑组织MDA改变不明显，随时间延长在缺血缺氧后60 min及120 min时均明显增高，提示脑组织缺血缺氧时存在脂质过氧化，使黄嘌呤脱氢酶转化为黄嘌呤氧化酶，后者催化次黄嘌呤的反应过程中产生O-2和H2O2，进而生成OH-。这些自由基作用于细胞膜的不饱和脂肪酸，生成过氧化脂质(LPO)。MDA是LPO的主要代谢终产物，故MDA升高。LPO可使Na+-K+ ATP酶失去活性，膜通透性改变，溶酶体颗粒崩溃，而致细胞坏死[2]。可见缺血缺氧时LPO升高，LPO又进一步加重组织器官的损害，形成恶性循环，使病情加重。
以Glu、Asp为主的EAA与相应受体结合后即发挥生理性神经递质功能，但病理性过度兴奋则成为有害于脑组织的兴奋毒性物质，是导致脑细胞死亡的关键作用之一[3]。本研究发现新生鼠缺血缺氧时脑内EAA明显升高，提示EAA与自由基一起参与脑损伤的过程，EAA的大量释放依赖于N-甲基D-门冬氨酸(NMDA)受体的Ca2+通道的过度激活，Ca2+大量内流，导致神经元迟发性损伤[4]。
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山莨菪碱是一种抗胆碱能药，具有保护组织，改善微循环的作用。本研究发现654-2可明显减轻缺血缺氧新生鼠脑组织MDA含量，同时也能减少Glu的过度产生，表明654-2对缺血缺氧新生大鼠脑损伤有一定的保护作用。其确切保护作用机制至今还不很清楚，可能与以下作用有关[5-6]：(1)膜稳定作用；(2)阻断Ca2+内流，减轻Ca2+超载：(3)减少氧自由基的生成，防止膜脂质过氧化；(4)减少EAA的过度释放。
参考文献
1，Johnston MV. Neurotransmitter alterations in a model of perinatal hypoxic-ischemic brain injury. Ann Neural, 1983,13:511-516.
2，Chan PH. Role of oxidants in ischemic damage. Stroke, 1996,27:1124-1129.
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3，Steven PB, Ross B, David IG, et al. Correlation between amino acid release and neuropathologic outcome in rat brain following middleartery occlusin. stroke, 1990,21:1727-1733.
4，Meldrum B, Garthwaite J. Excitatory amino acid neurotoxicity and neurodegenerative disease. Trends Pharmacol Sci,1990,11:379-385.
5，徐如祥，易声禹，吴声伶，等.神经细胞Ca2+通道变化及鼠血脑屏障通透性和外伤性脑水肿的影响.中华神经外科杂志，1992,8:41-44.
6，毛少平，龚梅芳，钟萍.山莨菪碱对脑血管内皮细胞与自由基的影响.微循环学杂志，1996,6(4):15-16.
(收稿日期：1999-06-24), http://www.100md.com