哮喘豚鼠磷脂酶A2及其代谢产物的变化和雷公藤多甙的调节作用
作者：叶新民 葛传生 季纯珍 雷其洪
单位：叶新民(210008 南京市儿童医院呼吸科)；葛传生(210008 南京市儿童医院呼吸科)；季纯珍(210008 南京市儿童医院呼吸科)；雷其洪(210008 南京市儿童医院呼吸科)
关键词：
中华儿科杂志000716 支气管哮喘是由多种炎性细胞参与的慢性气道炎症性疾病，其中磷脂酶A2(PLA2)及其激活后的代谢产物前列腺素类(PGs)介质起着重要的作用。
雷公藤多甙(Tripterygium polyglycoside，T Ⅱ)有很强的抗炎和免疫调节作用，据报道其治疗哮喘的疗效明显[1]。我们通过观察哮喘动物模型鼠PLA2及其代谢产物血栓素B2(TXB2)和6-酮-前列腺素F1α(6-K-PGF1α)的水平变化及TⅡ的影响，进一步研究哮喘的发病机制和TⅡ对哮喘炎症的抑制作用。
, 百拇医药
材料
健康豚鼠36只，体重350～500 g，随机均分成治疗组、哮喘组和对照组3组。
方法
1.动物模型的制作：参照Hutson等人的方法。用生理盐水制成的1%卵白蛋白溶液作致敏原，给豚鼠雾化吸入5 min，两周后再次予卵白蛋白吸入5 min诱发豚鼠哮喘发作。诱发前30 min予治疗组及哮喘组豚鼠苯海拉明10 mg/kg腹腔注射，以阻止豚鼠因过强的过敏反应而死亡，连续诱发3 d。对治疗组动物诱发前1周开始给予TⅡ悬浮液15 mg/(kg*d)灌胃，分两次进行，直至诱发3 d后将其处死；对哮喘组及对照组豚鼠给予生理盐水作对照，但后者不诱发哮喘。
2.标本采集、处理和测定：用3%戊巴比妥钠30 mg/kg腹腔注射麻醉动物后，经心脏穿刺采血，留取血清及部分抗凝血浆后，再取1 g肺组织制成匀浆分别进行检测。TXB2和6-K-PGF1α的检测按北京东亚生物技术研究所的放免试剂盒说明书进行，PLA2活性的检测按陈思锋等[2]的方法进行，规定在37℃，每分钟每毫升样本反应消耗1 nmol/L盐酸为1个PLA2活性单位(U)。
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3.统计学处理：采用
±s表示，组间比较采用两组间的非参数检验。
结果
1.动物的一般情况：致敏豚鼠再次吸入卵白蛋白后，哮喘组很快出现烦躁不安，呼吸加快，咳嗽、喘息等症状；而治疗组豚鼠引发哮喘潜伏期较哮喘组明显延长，呼吸频率明显降低，无明显咳嗽及喘息等症状。
2.诱发哮喘后各组豚鼠PLA2活性及血浆TXB2和6-K-PGF1α的水平变化(表1)：与对照组比，哮喘组豚鼠肺组织PLA2和血清PLA2活性及血浆TXB2水平明显增加，6-K-PGF1α水平明显降低。与哮喘组比，治疗组豚鼠肺组织PLA2和PLA2活性及TXB2水平明显降低，血浆 6-K-PGF1α水平明显增加；而治疗组豚鼠与对照组比，均差异无显著意义。
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表1 各组豚鼠PLA2活性及TXB2和6-K-PGF1α的
水平变化(±s) 组别
鼠数
(只)
肺组织
PLA2(U)
血清
PLA2(U)
TXB2
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(ng/L)
6-K-PGF1α
(ng/L)
哮喘组
12
184±114*
140±50**
304±165**
48±14*
治疗组
12
, 百拇医药
80± 54△
96±33△
133± 64△△
106±57△△
对照组
12
67± 34
74±27
136± 81
89±22
注：与对照组比：** P<0.01，* P<0.001；与哮喘组比：△ P<0.05，△△ P<0.01；实验过程中，因组织匀浆时匀浆器损坏，哮喘组和对照组的肺组织标本各减少2个
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讨论
PLA2是一种蛋白水解酶，绝大多数白三烯类、PGs、血小板活化因子等脂介质的前体物质花生四烯酸和溶血磷脂胆碱由PLA2催化生成。作为炎症启动因子和重要的炎性介质，PLA2不仅是启动脂介质合成的关键酶，还能导致多种受体的代谢失衡，激活炎性细胞[3]，甚至能直接收缩气道平滑肌，因此在哮喘的发病机制中起重要作用。血栓素A2(TXA2)和前列环素I2(PGI2)均是花生四烯酸的代谢产物，属PGs介质，两者的平衡失调是哮喘发病的一重要机制，而TXB2和6-K-PGF1α是其稳定代谢产物，间接反映了PGs的水平[4]。
本实验结果显示，哮喘豚鼠血清及肺组织PLA2活性均明显升高，血浆中相互拮抗的两种PGs稳定产物的水平均有明显的变化，进一步反映了他们在哮喘炎症中的重要作用，而TⅡ治疗组结果则趋于正常，表明TⅡ对PLA2及其代谢产物有明显的抑制和调节作用。动物的一般情况也显示，TⅡ能明显改善哮喘豚鼠的临床症状。虽然PLA2在哮喘中的作用已经引起普遍关注，但目前尚未合成PLA2非特异性的抑制剂，因此本研究中显示的TⅡ抑制PLA2活性，调节其代谢产物水平的作用，对其治疗哮喘有重要意义。以往有研究显示TⅡ剂量过大时可以出现一定的毒付作用，因此本研究根据小鼠和大鼠的半数致死量，并参照以往的动物实验[5]，选择TⅡ的剂量，实验中豚鼠未出现明显胃肠道症状和体重减轻等副作用，治疗效果也较满意。
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参考文献
1，梁晓燕.雷公藤多甙片治疗小儿哮喘疗效及其免疫作用机理的研究.中国病理生理杂志，1993，9：454.
2，陈思锋，吴中立.体液和组织磷脂酶A2简便快速测定法.第二军医大学学报，1989，10：254.
3，Tocker JE，Durham SK，Wetton AF, et al.Phospholipase A2-induced pulmonary and hemodynamic responses in the guinea pigs.Am Rev Respir Dis，1990，142：1193-1199.
4，Kurosawa M，Kobayashi H , Kobayashi S.Plasma prostaglandin levels from bronchial asthmatic patients assayed by 9-anthryldiazomethane-HPLC method.J Asthma,1990，27：349-358.
5，李瑞林，舒达夫.雷公藤的研究与临床应用.北京：中国科学技术出版社，1989.362-365.
(收稿日期：1999-08-19), http://www.100md.com
单位：叶新民(210008 南京市儿童医院呼吸科)；葛传生(210008 南京市儿童医院呼吸科)；季纯珍(210008 南京市儿童医院呼吸科)；雷其洪(210008 南京市儿童医院呼吸科)
关键词：
中华儿科杂志000716 支气管哮喘是由多种炎性细胞参与的慢性气道炎症性疾病，其中磷脂酶A2(PLA2)及其激活后的代谢产物前列腺素类(PGs)介质起着重要的作用。
雷公藤多甙(Tripterygium polyglycoside，T Ⅱ)有很强的抗炎和免疫调节作用，据报道其治疗哮喘的疗效明显[1]。我们通过观察哮喘动物模型鼠PLA2及其代谢产物血栓素B2(TXB2)和6-酮-前列腺素F1α(6-K-PGF1α)的水平变化及TⅡ的影响，进一步研究哮喘的发病机制和TⅡ对哮喘炎症的抑制作用。
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材料
健康豚鼠36只，体重350～500 g，随机均分成治疗组、哮喘组和对照组3组。
方法
1.动物模型的制作：参照Hutson等人的方法。用生理盐水制成的1%卵白蛋白溶液作致敏原，给豚鼠雾化吸入5 min，两周后再次予卵白蛋白吸入5 min诱发豚鼠哮喘发作。诱发前30 min予治疗组及哮喘组豚鼠苯海拉明10 mg/kg腹腔注射，以阻止豚鼠因过强的过敏反应而死亡，连续诱发3 d。对治疗组动物诱发前1周开始给予TⅡ悬浮液15 mg/(kg*d)灌胃，分两次进行，直至诱发3 d后将其处死；对哮喘组及对照组豚鼠给予生理盐水作对照，但后者不诱发哮喘。
2.标本采集、处理和测定：用3%戊巴比妥钠30 mg/kg腹腔注射麻醉动物后，经心脏穿刺采血，留取血清及部分抗凝血浆后，再取1 g肺组织制成匀浆分别进行检测。TXB2和6-K-PGF1α的检测按北京东亚生物技术研究所的放免试剂盒说明书进行，PLA2活性的检测按陈思锋等[2]的方法进行，规定在37℃，每分钟每毫升样本反应消耗1 nmol/L盐酸为1个PLA2活性单位(U)。
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3.统计学处理：采用
±s表示，组间比较采用两组间的非参数检验。结果
1.动物的一般情况：致敏豚鼠再次吸入卵白蛋白后，哮喘组很快出现烦躁不安，呼吸加快，咳嗽、喘息等症状；而治疗组豚鼠引发哮喘潜伏期较哮喘组明显延长，呼吸频率明显降低，无明显咳嗽及喘息等症状。
2.诱发哮喘后各组豚鼠PLA2活性及血浆TXB2和6-K-PGF1α的水平变化(表1)：与对照组比，哮喘组豚鼠肺组织PLA2和血清PLA2活性及血浆TXB2水平明显增加，6-K-PGF1α水平明显降低。与哮喘组比，治疗组豚鼠肺组织PLA2和PLA2活性及TXB2水平明显降低，血浆 6-K-PGF1α水平明显增加；而治疗组豚鼠与对照组比，均差异无显著意义。
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表1 各组豚鼠PLA2活性及TXB2和6-K-PGF1α的
水平变化(
±s) 组别鼠数
(只)
肺组织
PLA2(U)
血清
PLA2(U)
TXB2
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(ng/L)
6-K-PGF1α
(ng/L)
哮喘组
12
184±114*
140±50**
304±165**
48±14*
治疗组
12
, 百拇医药
80± 54△
96±33△
133± 64△△
106±57△△
对照组
12
67± 34
74±27
136± 81
89±22
注：与对照组比：** P<0.01，* P<0.001；与哮喘组比：△ P<0.05，△△ P<0.01；实验过程中，因组织匀浆时匀浆器损坏，哮喘组和对照组的肺组织标本各减少2个
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讨论
PLA2是一种蛋白水解酶，绝大多数白三烯类、PGs、血小板活化因子等脂介质的前体物质花生四烯酸和溶血磷脂胆碱由PLA2催化生成。作为炎症启动因子和重要的炎性介质，PLA2不仅是启动脂介质合成的关键酶，还能导致多种受体的代谢失衡，激活炎性细胞[3]，甚至能直接收缩气道平滑肌，因此在哮喘的发病机制中起重要作用。血栓素A2(TXA2)和前列环素I2(PGI2)均是花生四烯酸的代谢产物，属PGs介质，两者的平衡失调是哮喘发病的一重要机制，而TXB2和6-K-PGF1α是其稳定代谢产物，间接反映了PGs的水平[4]。
本实验结果显示，哮喘豚鼠血清及肺组织PLA2活性均明显升高，血浆中相互拮抗的两种PGs稳定产物的水平均有明显的变化，进一步反映了他们在哮喘炎症中的重要作用，而TⅡ治疗组结果则趋于正常，表明TⅡ对PLA2及其代谢产物有明显的抑制和调节作用。动物的一般情况也显示，TⅡ能明显改善哮喘豚鼠的临床症状。虽然PLA2在哮喘中的作用已经引起普遍关注，但目前尚未合成PLA2非特异性的抑制剂，因此本研究中显示的TⅡ抑制PLA2活性，调节其代谢产物水平的作用，对其治疗哮喘有重要意义。以往有研究显示TⅡ剂量过大时可以出现一定的毒付作用，因此本研究根据小鼠和大鼠的半数致死量，并参照以往的动物实验[5]，选择TⅡ的剂量，实验中豚鼠未出现明显胃肠道症状和体重减轻等副作用，治疗效果也较满意。
, http://www.100md.com
参考文献
1，梁晓燕.雷公藤多甙片治疗小儿哮喘疗效及其免疫作用机理的研究.中国病理生理杂志，1993，9：454.
2，陈思锋，吴中立.体液和组织磷脂酶A2简便快速测定法.第二军医大学学报，1989，10：254.
3，Tocker JE，Durham SK，Wetton AF, et al.Phospholipase A2-induced pulmonary and hemodynamic responses in the guinea pigs.Am Rev Respir Dis，1990，142：1193-1199.
4，Kurosawa M，Kobayashi H , Kobayashi S.Plasma prostaglandin levels from bronchial asthmatic patients assayed by 9-anthryldiazomethane-HPLC method.J Asthma,1990，27：349-358.
5，李瑞林，舒达夫.雷公藤的研究与临床应用.北京：中国科学技术出版社，1989.362-365.
(收稿日期：1999-08-19), http://www.100md.com