低强度超声增强顺铂对卵巢癌细胞细胞毒作用的研究
作者：于廷和 胡凯 江森 王智彪
单位：于廷和 胡凯 江森(山东医科大学附属医院妇产科)；王智彪(重庆医科大学医学超声工程研究所 400016)
关键词：
中华超声影像学杂志001215
顺铂(cisplatin,DDP)是卵巢癌化学治疗的首选药物，许多研究试图增强其对恶性细胞的细胞毒作用以增强疗效和减少对正常细胞、组织的损伤。本研究发现低强度超声可以增强顺铂对体外培养的人卵巢癌细胞的损伤作用，现报告如下。
材料与方法
1.细胞:卵巢癌细胞3AO以RPMI 1640(GIBCO)培养基培养，培养液含10%新生小牛血清(华西生物研究所)，培养条件为5%CO2、37℃。实验时，以胰蛋白酶消化，制备单细胞悬液。
, 百拇医药
2.超声辐照:超声波系统及超声辐照均参照以往实验，辐照剂量为 5.12 W/cm2×5 s，因已经证实,该剂量未致3AO细胞克隆形成力明显受抑制[1]。
3.药物反应性:分3组进行。①DDP组,仅以DDP(山东齐鲁制药厂)处理;②DDP+US组,加入DDP后予以超声辐照;③US+DDP组,超声辐照后给予DDP。各组细胞经上述处理后，37℃温育 2 h，离心,弃含药培养液，以PBS洗涤，以克隆原细胞分析法分析各组细胞对药物的反应性[2]。培养 14 d后，结晶紫(Amresco)染色，镜下计数细胞数大于50个的克隆数，计算克隆成活率。
4.统计学处理:采用方差分析。
结果
DDP+US组和US+DDP组克隆成活率均低于DDP组(均P<0.01)，DDP+US组克隆成活率也低于US+DDP组(P<0.01)(图1)。
, 百拇医药
图1 三组间剂量-效应关系比较
讨论
本研究发现，DDP+US组和US+DDP组克隆成活率均低于DDP组，因而超声实际增强了DDP对卵巢癌细胞的毒性。仅用DDP时高剂量对恶性细胞的杀伤作用，使用较低剂量药物与超声联合作用即可达到，这对提高其疗效和减小毒副作用是很有利的。
超声增强DDP的作用可能是通过增加膜通透性,使细胞内药物聚集量增加而实现的，超声致膜通透性有效增加的持续时间与物质分子量相关，而DDP分子量较小。在DDP+US组，克隆成活率更低，这提示超声与DDP联用时，应在超声辐照前给予药物， 以达到最佳疗效。可能由于超声辐照当时在声压作用下即使部分药物进入细胞，辐照后的膜通透性改变又促使DDP进一步进入细胞。但其确切机制尚需阐明。在使用超声转基因时，一般在辐照前加入质粒[3]。
Rapoport等[4]报道超声可增加HL-60细胞对共聚物微粒中阿霉素的摄取，超声也可促使微粒穿越微血管而促进其在组织中的扩散[5]。如果能进一步在顺铂用于治疗实验性卵巢癌中被证实，则提示超声可用于卵巢癌的靶向化疗。
, http://www.100md.com
于廷和 山东医科大学研究生
参 考 文 献
1，Yu TH, Cai HZ, Wang ZB. Bioeffects of low-level and low-frequency ultrasound on human ovarian carcinoma cell line 3AO in vitro. Journal of CAUME,1999,5:126-129.
2，Calio MJ, Vitaux P, Lafon C, et al.Multifactoral mechanisms of potentiation of cisplatin(CDDP) cytotoxicity by all-trans-retionic acid (ATRA) in human ovarian carcinoma cell lines. Br J Cancer, 1997,75:333-340.
, 百拇医药
3，Tata DB, Dunn F, Tindall DJ. Selective clinical ultrasound signals mediate differential gene transfer and expression in two human prostate cancer cell lines: LnCap and PC-3. Biochem Biophys Res Commu, 1997,234:64-67.
4，Rapoport NY, Hemon JN, Pitt WG, et al.Micellar delivery of doxorubicin and its paramagetic analog, ruboxyl, to HL-60 cells: effects of micelle structure and ultrasound on the intracellular uptake. J Controlled Release, 1999,58:153-162.
5，Price RJ, Skyba DM, Kaul S, et al.Delivery of colloidal particles and red blood cells to tissue through microvessel rupture created by targeted microbubble destruction with ultrasound. Circulation, 1998,98:1264-1267.
(收稿日期:2000-01-03), 百拇医药
单位：于廷和 胡凯 江森(山东医科大学附属医院妇产科)；王智彪(重庆医科大学医学超声工程研究所 400016)
关键词：
中华超声影像学杂志001215
顺铂(cisplatin,DDP)是卵巢癌化学治疗的首选药物，许多研究试图增强其对恶性细胞的细胞毒作用以增强疗效和减少对正常细胞、组织的损伤。本研究发现低强度超声可以增强顺铂对体外培养的人卵巢癌细胞的损伤作用，现报告如下。
材料与方法
1.细胞:卵巢癌细胞3AO以RPMI 1640(GIBCO)培养基培养，培养液含10%新生小牛血清(华西生物研究所)，培养条件为5%CO2、37℃。实验时，以胰蛋白酶消化，制备单细胞悬液。
, 百拇医药
2.超声辐照:超声波系统及超声辐照均参照以往实验，辐照剂量为 5.12 W/cm2×5 s，因已经证实,该剂量未致3AO细胞克隆形成力明显受抑制[1]。
3.药物反应性:分3组进行。①DDP组,仅以DDP(山东齐鲁制药厂)处理;②DDP+US组,加入DDP后予以超声辐照;③US+DDP组,超声辐照后给予DDP。各组细胞经上述处理后，37℃温育 2 h，离心,弃含药培养液，以PBS洗涤，以克隆原细胞分析法分析各组细胞对药物的反应性[2]。培养 14 d后，结晶紫(Amresco)染色，镜下计数细胞数大于50个的克隆数，计算克隆成活率。
4.统计学处理:采用方差分析。
结果
DDP+US组和US+DDP组克隆成活率均低于DDP组(均P<0.01)，DDP+US组克隆成活率也低于US+DDP组(P<0.01)(图1)。
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图1 三组间剂量-效应关系比较
讨论
本研究发现，DDP+US组和US+DDP组克隆成活率均低于DDP组，因而超声实际增强了DDP对卵巢癌细胞的毒性。仅用DDP时高剂量对恶性细胞的杀伤作用，使用较低剂量药物与超声联合作用即可达到，这对提高其疗效和减小毒副作用是很有利的。
超声增强DDP的作用可能是通过增加膜通透性,使细胞内药物聚集量增加而实现的，超声致膜通透性有效增加的持续时间与物质分子量相关，而DDP分子量较小。在DDP+US组，克隆成活率更低，这提示超声与DDP联用时，应在超声辐照前给予药物， 以达到最佳疗效。可能由于超声辐照当时在声压作用下即使部分药物进入细胞，辐照后的膜通透性改变又促使DDP进一步进入细胞。但其确切机制尚需阐明。在使用超声转基因时，一般在辐照前加入质粒[3]。
Rapoport等[4]报道超声可增加HL-60细胞对共聚物微粒中阿霉素的摄取，超声也可促使微粒穿越微血管而促进其在组织中的扩散[5]。如果能进一步在顺铂用于治疗实验性卵巢癌中被证实，则提示超声可用于卵巢癌的靶向化疗。
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于廷和 山东医科大学研究生
参 考 文 献
1，Yu TH, Cai HZ, Wang ZB. Bioeffects of low-level and low-frequency ultrasound on human ovarian carcinoma cell line 3AO in vitro. Journal of CAUME,1999,5:126-129.
2，Calio MJ, Vitaux P, Lafon C, et al.Multifactoral mechanisms of potentiation of cisplatin(CDDP) cytotoxicity by all-trans-retionic acid (ATRA) in human ovarian carcinoma cell lines. Br J Cancer, 1997,75:333-340.
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3，Tata DB, Dunn F, Tindall DJ. Selective clinical ultrasound signals mediate differential gene transfer and expression in two human prostate cancer cell lines: LnCap and PC-3. Biochem Biophys Res Commu, 1997,234:64-67.
4，Rapoport NY, Hemon JN, Pitt WG, et al.Micellar delivery of doxorubicin and its paramagetic analog, ruboxyl, to HL-60 cells: effects of micelle structure and ultrasound on the intracellular uptake. J Controlled Release, 1999,58:153-162.
5，Price RJ, Skyba DM, Kaul S, et al.Delivery of colloidal particles and red blood cells to tissue through microvessel rupture created by targeted microbubble destruction with ultrasound. Circulation, 1998,98:1264-1267.
(收稿日期:2000-01-03), 百拇医药