假肥大型肌营养不良患者肌型肌酸激酶亚型的临床研究
作者：赵 昕1 韩 冰1 杨振华1 张毅芳2 叶贤坤2 赵振军2
单位：1 北京医院，北京东单大华路1号，100730；2 石家庄开发区医药研究所
关键词：假肥大型肌营养不良；肌酸激酶；电泳
假肥大型肌营养不良患者肌型肌酸激酶 亚型的临床研究 摘要 目的：研究假肥大型肌营养不良(DMD)患者肌型肌酸激酶(CK-MM)亚型的变化，为早期诊断和评价病情提供依据。方法：采用不连续缓冲体系，在稳流低压条件下电泳，将CK-MM亚型分离、荧光扫描。结果：DMD患者在不同阶段的CK-MM亚型值均与对照组相比有显著性差异(P<0.05)；DMD患者不同阶段的MM2/MM1值也有显著性差异(P<0.05)。结论：CK-MM亚型的改变是DMD患者诊断及判断病情的重要指标，MM2/MM1值是判断DMD患者病情的特异性指标。
, http://www.100md.com
A clinical study on CK-MM in patients with Duchenne muscular dystrophy/ZHAO Xin,HAN Bing,YANG Zhenhua,et al//Chinese Journal of Rehabilitation Medicine,1998,13(4):159～161
Abstract Objective:To study the changes of isoforms of creatine kinase-muscular model(CK-MM) in patients with Duchenne muscular dystrophy(DMD) for the purpose of early diagnosis and evaluation.Method:A discontinuous buffer system was used.CK-MM isoform was separated by electrophoresis,under constant current and low voltage,fluorescence scanning.Result:A statistically significant changes of isoforms of CK-MM in each age group of subjects when compared with control group(P<0.05),and also statistically significant between the ratio of MM2/MM1 among these three age groups of the subjects(P<0.05).Conclusion:The ratio of MM2/MM1 could be considered as a special indicator of degree in the development of DMD.
, 百拇医药
Author′s address Beijing Hospital,100730
Key words Duchenne muscular dystrophy;Creatine kinase;Electrophoresis
关于肌酸激酶(creatine kinase,CK)在肌营养不良中的诊断意义，国内外已有较多的报告〔1，2〕，但CK活性的大小不能完全反映病变的严重程度。人类的CK主要由CK-MM，CK-MB和CK-BB 3种同功酶组成，而只有肌型同功酶(CK-MM)主要存在于骨骼肌和心肌，但研究CK-MM本身一般意义不大。近十年来发现CK-MM可以进一步分为不同亚型，并较多的报告了急性心肌梗塞时这些亚型的变化〔3〕，1989年英国利物浦大学报告了用等电聚焦法测定骨骼肌损伤时CK-MM亚型的变化〔4〕，国内尚未见报告。本文报告用电泳法研究假肥大型肌营养不良(duchenne muscular dystrophy，DMD)患者CK-MM亚型的变化。
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1 材料与方法
1.1 病例来源
随机选取1995年8月6日到1996年2月6日在石家庄开发区医药研究所就诊的DMD患者49例，其中男48例，女1例；年龄最小3岁，最大32岁，平均年龄11.3岁。并除外心肌梗塞和脑血管病等可能影响CK活性的疾病，抽血前2周内未用任何可能影响CK活性的药物，抽血后立即放入-20℃冰箱保存。
1.2 对照组
随机选取在本院门诊做体检的健康人40例，其中男23例，女17例。选取经体检证实各项生化指标均正常者。
1.3 仪器及试剂
仪器：电泳槽、Appraise荧光光密度计、浇板装置、DYY-Ⅲ2稳压稳流电泳仪、日立7150全自动生化分析仪。
, 百拇医药
试剂：琼脂糖、CK基质液、吗啡啉丙磺酸、吗啡啉羟基丙磺酸、琼脂糖凝胶缓冲液(pH为6.6)、阴极电泳槽缓冲液(pH为7.8)。
1.4 方法
用日立7150全自动生化分析仪用动力学方法测定CK，反应温度为37℃。CK-MM亚型测定采用琼脂糖电泳法，使用不连续缓冲体系，将自配的1%琼脂糖凝胶加样后，电泳30min，使CK-MM分为MM1、MM2和MM3，加基质液后放入42℃恒温箱反应20min，烘干后在520nm下荧光扫描。
2 结果
40例对照组测定结果：CK总酶：74.9±34.2u/l，其中MM1：62.8%±4.0%，MM2：27.3%±3.9%，MM3：9.9%±2.9%，MM2/MM1：0.435±0.013。
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见附表。DMD患者各年龄组的MM2/MM1均与对照组有显著差异(P<0.05)。各年龄组间的MM2/MM1也有显著差异(P<0.05)。
3 讨论
在正常情况下，CK-MM主要存在于骨骼肌细胞内，血液中也能测到少量CK-MM的存在。被释放入血液的CK-MM最初以MM3的形式进入血循环，在羧基肽酶的作用下，MM3中的一个M亚基C端的赖氨酸被水解下来，MM3转变成MM2。在羧基肽酶的持续作用下，另一M亚基C端的赖氨酸又被水解下来，使MM2进一步变成MM1；MM1的半衰期比MM2长，MM3最短。因此，结果部分和图1所示的MM1>MM2>MM3的正常分布状态。CK正常值虽是20～200u/l，但在通常情况下，大都在100u/l以下。
, 百拇医药
附表 49例DMD患者CK总酶和CK-MM亚型(
±s)
年龄组(岁)
例数
CK(u/l)
CK-MM(%)
MM2/MM1
MM1
MM2
MM3
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3～7
12
7231±4934
42.4±9.1
34.1±2.6
23.6±7.4
0.842±0.207
8～10
16
7156±3080
38.3±11.0
35.9±3.4
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25.8±9.4
1.025±0.330
11～19
18
6114±3871
33.6±7.6
36.6±3.2
29.8±8.2
1.150±0.313
20～32
3
2738±3503
, 百拇医药
32.3±0.5
40.8±2.4
26.9±2.4
1.270±0.075
图1 对照组CK-MM亚型电泳图
图2 5岁DMD患者CK-MM亚型电泳图
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图3 13岁DMD患者CK-MM亚型电泳图
图4 32岁DMD患者CK-MM亚型电泳图
如附表所示，DMD患者血中CK活性通常很高，但存在着巨大差异。其病情与CK活性不一致〔1〕，在病变的晚期CK活性可以不高〔5〕。从本组病例看出，随着年龄的增高，病情加重，但CK活性反而下降，说明CK活性不是DMD患者的特异性诊断指标。并且，一些其它疾病也能引起CK活性升高，往往造成一部分病人被误诊。
DMD是一种由基因缺陷引起的肌细胞膜功能障碍，导致肌原纤维断裂、坏死、MM3大量释放到血液中，造成血液中MM3和MM2高于对照组，MM2与MM1的比值显著高于对照组(P<0.05)。随着年龄的增大，病情加重，CK-MM亚型的改变也越大。在发病早期MM3即可轻微增高，如图2；MM3大量释放时，即肌细胞大量破坏时出现3个波峰倒置，如图3；病变晚期出现MM2大量堆积，如图4。说明CK-MM亚型的改变是反映肌营养不良患者病情的重要指标。
, 百拇医药
与CK总酶比较，CK-MM亚型是相对稳定的指标。CK-MM的波动很小，不论是哪个年龄组均表现为MM3和MM2升高，从而导致MM2与MM1的比值改变。早在临床症状出现前或刚刚出现时就已经发生了CK-MM亚型的变化，此时的CK总酶往往尚未升高。本组病例中有一4岁男孩，其MM1、MM2和MM3分别为57.7%、26.5%和15.8%，已开始发生CK-MM亚型的改变。而其CK总酶只有24u/l，该患者的CK总酶在半年后才升高到9533u/l。另一例情况则说明DMD患者CK-MM亚型的改变并不受CK总酶活性高低的影响。即使在CK总酶活性尚未升高，甚至在CK总酶活性下降的过程中，只要查出CK-MM亚型的改变，就说明肌肉损伤已开始发生或仍在继续发生〔4〕。因此，CK-MM亚型的测定可为判定DMD患者的病情提供有价值的信息，且特异性强。如心肌梗塞患者也有CK-MM亚型的改变，但这种改变从达高峰到恢复正常是在48～72小时内完成的并且主要是MM3与 MM1比值的改变。研究CK-MM亚型的改变也可为评价某些药物的疗效提供科学依据。
, 百拇医药
4 参考文献
1 Audrey SP,et al.Muscular dystrophy in young girl.Neurology,1970,20:147.
2 Hood D,et al.Serum enzyme alterations in chronic muscle disease.Clinical Chemistry,1991,95:402.
3 Yasmineh WG,et al.Postsynthetic variants of creatine kinase MM.J Lab.Clin Med,1981,98:109.
4 Page S,et al.Isoforms of creatine kinase:MM in the study of skeletal muscle damage.Eur J Clin Ives,1989,19:185.
5 Leal AM,et al.Relations between delayed diagnosis and forms of onset in Duchenne muscular dystrophy.Gac Med Mex,1994,130:459.
收稿日期：1997-11-17, 百拇医药(赵 昕1 韩 冰1 杨振华1 张毅芳2 叶贤坤2 赵振军2)
单位：1 北京医院，北京东单大华路1号，100730；2 石家庄开发区医药研究所
关键词：假肥大型肌营养不良；肌酸激酶；电泳
假肥大型肌营养不良患者肌型肌酸激酶 亚型的临床研究 摘要 目的：研究假肥大型肌营养不良(DMD)患者肌型肌酸激酶(CK-MM)亚型的变化，为早期诊断和评价病情提供依据。方法：采用不连续缓冲体系，在稳流低压条件下电泳，将CK-MM亚型分离、荧光扫描。结果：DMD患者在不同阶段的CK-MM亚型值均与对照组相比有显著性差异(P<0.05)；DMD患者不同阶段的MM2/MM1值也有显著性差异(P<0.05)。结论：CK-MM亚型的改变是DMD患者诊断及判断病情的重要指标，MM2/MM1值是判断DMD患者病情的特异性指标。
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A clinical study on CK-MM in patients with Duchenne muscular dystrophy/ZHAO Xin,HAN Bing,YANG Zhenhua,et al//Chinese Journal of Rehabilitation Medicine,1998,13(4):159～161
Abstract Objective:To study the changes of isoforms of creatine kinase-muscular model(CK-MM) in patients with Duchenne muscular dystrophy(DMD) for the purpose of early diagnosis and evaluation.Method:A discontinuous buffer system was used.CK-MM isoform was separated by electrophoresis,under constant current and low voltage,fluorescence scanning.Result:A statistically significant changes of isoforms of CK-MM in each age group of subjects when compared with control group(P<0.05),and also statistically significant between the ratio of MM2/MM1 among these three age groups of the subjects(P<0.05).Conclusion:The ratio of MM2/MM1 could be considered as a special indicator of degree in the development of DMD.
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Author′s address Beijing Hospital,100730
Key words Duchenne muscular dystrophy;Creatine kinase;Electrophoresis
关于肌酸激酶(creatine kinase,CK)在肌营养不良中的诊断意义，国内外已有较多的报告〔1，2〕，但CK活性的大小不能完全反映病变的严重程度。人类的CK主要由CK-MM，CK-MB和CK-BB 3种同功酶组成，而只有肌型同功酶(CK-MM)主要存在于骨骼肌和心肌，但研究CK-MM本身一般意义不大。近十年来发现CK-MM可以进一步分为不同亚型，并较多的报告了急性心肌梗塞时这些亚型的变化〔3〕，1989年英国利物浦大学报告了用等电聚焦法测定骨骼肌损伤时CK-MM亚型的变化〔4〕，国内尚未见报告。本文报告用电泳法研究假肥大型肌营养不良(duchenne muscular dystrophy，DMD)患者CK-MM亚型的变化。
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1 材料与方法
1.1 病例来源
随机选取1995年8月6日到1996年2月6日在石家庄开发区医药研究所就诊的DMD患者49例，其中男48例，女1例；年龄最小3岁，最大32岁，平均年龄11.3岁。并除外心肌梗塞和脑血管病等可能影响CK活性的疾病，抽血前2周内未用任何可能影响CK活性的药物，抽血后立即放入-20℃冰箱保存。
1.2 对照组
随机选取在本院门诊做体检的健康人40例，其中男23例，女17例。选取经体检证实各项生化指标均正常者。
1.3 仪器及试剂
仪器：电泳槽、Appraise荧光光密度计、浇板装置、DYY-Ⅲ2稳压稳流电泳仪、日立7150全自动生化分析仪。
, 百拇医药
试剂：琼脂糖、CK基质液、吗啡啉丙磺酸、吗啡啉羟基丙磺酸、琼脂糖凝胶缓冲液(pH为6.6)、阴极电泳槽缓冲液(pH为7.8)。
1.4 方法
用日立7150全自动生化分析仪用动力学方法测定CK，反应温度为37℃。CK-MM亚型测定采用琼脂糖电泳法，使用不连续缓冲体系，将自配的1%琼脂糖凝胶加样后，电泳30min，使CK-MM分为MM1、MM2和MM3，加基质液后放入42℃恒温箱反应20min，烘干后在520nm下荧光扫描。
2 结果
40例对照组测定结果：CK总酶：74.9±34.2u/l，其中MM1：62.8%±4.0%，MM2：27.3%±3.9%，MM3：9.9%±2.9%，MM2/MM1：0.435±0.013。
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见附表。DMD患者各年龄组的MM2/MM1均与对照组有显著差异(P<0.05)。各年龄组间的MM2/MM1也有显著差异(P<0.05)。
3 讨论
在正常情况下，CK-MM主要存在于骨骼肌细胞内，血液中也能测到少量CK-MM的存在。被释放入血液的CK-MM最初以MM3的形式进入血循环，在羧基肽酶的作用下，MM3中的一个M亚基C端的赖氨酸被水解下来，MM3转变成MM2。在羧基肽酶的持续作用下，另一M亚基C端的赖氨酸又被水解下来，使MM2进一步变成MM1；MM1的半衰期比MM2长，MM3最短。因此，结果部分和图1所示的MM1>MM2>MM3的正常分布状态。CK正常值虽是20～200u/l，但在通常情况下，大都在100u/l以下。
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附表 49例DMD患者CK总酶和CK-MM亚型(
±s)年龄组(岁)
例数
CK(u/l)
CK-MM(%)
MM2/MM1
MM1
MM2
MM3
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3～7
12
7231±4934
42.4±9.1
34.1±2.6
23.6±7.4
0.842±0.207
8～10
16
7156±3080
38.3±11.0
35.9±3.4
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25.8±9.4
1.025±0.330
11～19
18
6114±3871
33.6±7.6
36.6±3.2
29.8±8.2
1.150±0.313
20～32
3
2738±3503
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32.3±0.5
40.8±2.4
26.9±2.4
1.270±0.075
图1 对照组CK-MM亚型电泳图
图2 5岁DMD患者CK-MM亚型电泳图
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图3 13岁DMD患者CK-MM亚型电泳图
图4 32岁DMD患者CK-MM亚型电泳图
如附表所示，DMD患者血中CK活性通常很高，但存在着巨大差异。其病情与CK活性不一致〔1〕，在病变的晚期CK活性可以不高〔5〕。从本组病例看出，随着年龄的增高，病情加重，但CK活性反而下降，说明CK活性不是DMD患者的特异性诊断指标。并且，一些其它疾病也能引起CK活性升高，往往造成一部分病人被误诊。
DMD是一种由基因缺陷引起的肌细胞膜功能障碍，导致肌原纤维断裂、坏死、MM3大量释放到血液中，造成血液中MM3和MM2高于对照组，MM2与MM1的比值显著高于对照组(P<0.05)。随着年龄的增大，病情加重，CK-MM亚型的改变也越大。在发病早期MM3即可轻微增高，如图2；MM3大量释放时，即肌细胞大量破坏时出现3个波峰倒置，如图3；病变晚期出现MM2大量堆积，如图4。说明CK-MM亚型的改变是反映肌营养不良患者病情的重要指标。
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与CK总酶比较，CK-MM亚型是相对稳定的指标。CK-MM的波动很小，不论是哪个年龄组均表现为MM3和MM2升高，从而导致MM2与MM1的比值改变。早在临床症状出现前或刚刚出现时就已经发生了CK-MM亚型的变化，此时的CK总酶往往尚未升高。本组病例中有一4岁男孩，其MM1、MM2和MM3分别为57.7%、26.5%和15.8%，已开始发生CK-MM亚型的改变。而其CK总酶只有24u/l，该患者的CK总酶在半年后才升高到9533u/l。另一例情况则说明DMD患者CK-MM亚型的改变并不受CK总酶活性高低的影响。即使在CK总酶活性尚未升高，甚至在CK总酶活性下降的过程中，只要查出CK-MM亚型的改变，就说明肌肉损伤已开始发生或仍在继续发生〔4〕。因此，CK-MM亚型的测定可为判定DMD患者的病情提供有价值的信息，且特异性强。如心肌梗塞患者也有CK-MM亚型的改变，但这种改变从达高峰到恢复正常是在48～72小时内完成的并且主要是MM3与 MM1比值的改变。研究CK-MM亚型的改变也可为评价某些药物的疗效提供科学依据。
, 百拇医药
4 参考文献
1 Audrey SP,et al.Muscular dystrophy in young girl.Neurology,1970,20:147.
2 Hood D,et al.Serum enzyme alterations in chronic muscle disease.Clinical Chemistry,1991,95:402.
3 Yasmineh WG,et al.Postsynthetic variants of creatine kinase MM.J Lab.Clin Med,1981,98:109.
4 Page S,et al.Isoforms of creatine kinase:MM in the study of skeletal muscle damage.Eur J Clin Ives,1989,19:185.
5 Leal AM,et al.Relations between delayed diagnosis and forms of onset in Duchenne muscular dystrophy.Gac Med Mex,1994,130:459.
收稿日期：1997-11-17, 百拇医药(赵 昕1 韩 冰1 杨振华1 张毅芳2 叶贤坤2 赵振军2)