神经原性血浆外渗法测量皮肤的神经再支配
作者：陈绍宗 杨帆 李跃军
单位：第四军医大学唐都医院整形外科 710038 西安市
关键词：神经原性血浆外渗法；神经埋入；失神经皮瓣；神经再支配
中国临床解剖学杂志000129
摘 要：目的：观察皮瓣埋入神经后不同时间获得神经再支配的范围。方法：兔耳大神经埋入转移到耳背的颈肩部失神经皮瓣，用神经原性血浆外渗和图像分析法测量皮瓣的染色面积。结果：3.0 cm直径圆形皮瓣下埋入1.5 cm长神经，术后1个月为103.5 mm2，3个月为312.3 mm2，5个月为459.0 mm2，8个月为585.5 mm2，分别占皮瓣总面积的16.8%、50.7%、74.6%和95.0%。结论：兔3.0 cm直径圆形皮瓣埋入1.5 cm长皮神经后8个月可完全获得神经再支配。
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Neurogenic plasma extravasation technique to measure skin reinnervation
Chen Shaozong Yang Fan Li Yaojun.
Department of Plastic Surgery,Tangdu Hospital,The Fourth Military Medical University,Xi'an 710038
Abstract：Objective:To observe the dyed regions of skin flaps with nerve implantation at different intervals.Methods:After the rabbit great auricular nerve embedded in the cervico-shoulder flap which was transplanted to the ear dorsum,the neurogenic plasma extravasation and image analysis techniques were used to measure the dyed area of the flap.Results:After the nerve 1.5 cm in length was embedded in a round flap with the diameter of 3.0 cm,the dyed region and the percentage it accounted for are as follows:1 month 103.5 mm2 and 16.8%,3 months 312.3 mm2 and 50.7%,5 months 459.0 mm2 and 74.6%,8 months 585.5 mm2 and 95.0%.Conclusion: The flap with the diameter of 3 cm implanted a nerve 1.5 cm in length could completely be reinnervated in 8 months.
, 百拇医药
Key words：Neurogenic plasma extravasation Nerve embeding in denvervated skin Reinnervation▲
近年，感觉神经植入术得到较深入的研究，但埋入的神经能支配多大面积的皮肤尚未回答。我们用神经电生理、神经原性血浆外渗和免疫组化三种方法进行了检测，所得结果显示充分的一致性。本文重点报告血浆外渗实验结果。
1 材料和方法
2.0～2.5kg体重新西兰兔25只，不拘雌雄。左耳背和颈肩部剪毛，2.5%戊巴比妥钠耳缘静脉麻醉(30mg/kg)。切除耳背中央3.0 cm直径全厚度圆形皮肤，在创面的近侧结扎耳中央动静脉，解剖出耳大神经。在颈肩部掀起3.5 cm×4.5 cm带蒂皮瓣，转移到耳背创面。设实验组(皮瓣内埋入神经，分为1、3、5、8个月四个组)和对照组(不埋入神经)，各组动物5只。实验组动物：在皮瓣中央肉膜上作小切口，向着耳大神经近段方向作真皮肉膜间隧道。在耳背创面远侧缘切断耳大神经，近段末端引入隧道，固定于皮瓣真皮上1针，神经埋入1.5 cm。对照组动物：耳背创面内耳大神经全部予以切除，皮瓣内无神经埋入。
, 百拇医药
动物观察到期后，以α-氯醛糖和氨基甲酸乙酯混合麻药耳静脉麻醉(5ml/kg)。在皮瓣近侧耳背上解剖出耳大神经干2.0 cm，挂在连接于电刺激器(日本 NIHON KOHDEN公司)的电极上。向颈总动脉注入美兰溶液(50mg/kg体重)，10min后给予方波刺激(40V，波宽1ms，10Hz，持续20min)。之后，用硫酸纸描记皮瓣边缘和染色区，Quantimet 570图像分析仪计算染色面积。
2 结果
对照组皮瓣于术后8个月未出现染色。
神经埋入1月组，皮瓣染色区位于神经埋入处及其附近，染色面积平均为103.5 mm2，占皮瓣面积的16.8%。之后，染色面积逐步扩大，如3月组平均染色面积为312.3 mm2，占皮瓣面积的50.7%；5月组染色面积为459.0 mm2，占皮瓣面积的74.6%；8月组染色面积为585.5 mm2，占皮瓣面积的95.0%(见附表和附图)。
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附表 各组皮瓣血浆外渗染色面积 组 别
染色区面积(
±s) mm2
%
1月
103.5±5.2
16.8
3月
312.3±4.9
50.7
5月
459.0±8.3
, 百拇医药
74.6
8月
585.5±10.6
95.0
未埋神经
0
-
组间t检验P<0.01，皮瓣总面积为615.8 mm2
附图 神经埋入兔耳失神经皮瓣后血浆外渗染色区
(A、B、C、D分别为术后1、3、5、8个月)
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3 讨论
感觉神经植入术中，埋入多大外径和长度的神经能使多大面积的皮肤获得神经再支配尚无报告。本实验沿用以往的失神经皮瓣模型，皮瓣直径为3.0 cm，圆形，面积约700 mm2，移植以后面积有些缩小，计算为615.8 mm2。实验同期，测量20条耳大神经外径，其左右径为1.28±0.17 mm，前后径为0.7±0.09 mm。神经埋在肉膜浅面，长度为1.5 cm。此条件下术后8个月整个皮瓣获得神经再支配。考虑到神经再生速度进展较快以及两观察组间相距较长，作者认为达到这种再支配程度会早于8个月。作者以往的临床实践和研究表明，埋入1条神经虽支配范围有限，但由于神经是以轴突抽芽的方式再生，故可用增加移植神经数目、移植带分叉的移植体、增加移植体长度、将神经迂回曲折埋入以及全程而不是只将神经末端固定于皮瓣的点穴式埋入等方法，增加神经的分布范围以增大再生神经轴突发芽机会，扩大再支配范围。也可把神经放在皮瓣的中央，而边缘依靠邻近的皮神经长入(侧支神经再支配)，加上神经营养药物应用和功能训练等方法，促进感觉功能的恢复，已为临床工作证实[1]。
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本实验进行前，先用神经单纤维放电是引导的电生理方法获得再生纤维放电分布等资料，之后又收集放电部位的皮肤标本，用抗NF抗体免疫组化法作形态学证实，三种方法相互印证。电生理和免疫组化实验结果与作者以前所报告的结果完全一致，显示了高度的可重复性；三种检测方法的结果也充分相符，因此客观测量了再生纤维支配的面积，同时也能明确再生纤维的感觉类型。计算其数量、比率，了解再生过程和程度。
Brenan(1986)首先证明大鼠隐神经的分布范围与血浆外渗染色区相同[2]。其原理是皮肤中与伤害感受器C类纤维相连的无髓传入纤维被激活后，即刻使末稍支配的皮肤中的血管通透性增加，而某些活性染料(如Evans blue)因迅速与血浆蛋白结合随血浆外渗。这种方法被认为只能确定特定的C类纤维分布，而不是全部的C类纤维。而我们以前的以及本实验之先所做的电生理实验证实C类纤维较少(正常皮肤也如此)，A类纤维较多。实验中也未发现两类纤维出现放电时间上的差别，加之电生理、血浆外渗和形态学观察结果的充分一致性，作者认为被染色的区域可以代表所有再生纤维的支配区。■
参考文献：
[1]陈绍宗，姜树军，胡三觉，等.神经植入重建皮瓣感觉的实验研究和临床应用.中华整形烧伤外科杂志，1991，7(3)：164
[2]Brenan A.Collateral reinnervation of skin by C-fibres following nerve injury in the rat.Brain Res，1986,385(1):152
收稿日期：1998-12-06, 百拇医药
单位：第四军医大学唐都医院整形外科 710038 西安市
关键词：神经原性血浆外渗法；神经埋入；失神经皮瓣；神经再支配
中国临床解剖学杂志000129
摘 要：目的：观察皮瓣埋入神经后不同时间获得神经再支配的范围。方法：兔耳大神经埋入转移到耳背的颈肩部失神经皮瓣，用神经原性血浆外渗和图像分析法测量皮瓣的染色面积。结果：3.0 cm直径圆形皮瓣下埋入1.5 cm长神经，术后1个月为103.5 mm2，3个月为312.3 mm2，5个月为459.0 mm2，8个月为585.5 mm2，分别占皮瓣总面积的16.8%、50.7%、74.6%和95.0%。结论：兔3.0 cm直径圆形皮瓣埋入1.5 cm长皮神经后8个月可完全获得神经再支配。
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Neurogenic plasma extravasation technique to measure skin reinnervation
Chen Shaozong Yang Fan Li Yaojun.
Department of Plastic Surgery,Tangdu Hospital,The Fourth Military Medical University,Xi'an 710038
Abstract：Objective:To observe the dyed regions of skin flaps with nerve implantation at different intervals.Methods:After the rabbit great auricular nerve embedded in the cervico-shoulder flap which was transplanted to the ear dorsum,the neurogenic plasma extravasation and image analysis techniques were used to measure the dyed area of the flap.Results:After the nerve 1.5 cm in length was embedded in a round flap with the diameter of 3.0 cm,the dyed region and the percentage it accounted for are as follows:1 month 103.5 mm2 and 16.8%,3 months 312.3 mm2 and 50.7%,5 months 459.0 mm2 and 74.6%,8 months 585.5 mm2 and 95.0%.Conclusion: The flap with the diameter of 3 cm implanted a nerve 1.5 cm in length could completely be reinnervated in 8 months.
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Key words：Neurogenic plasma extravasation Nerve embeding in denvervated skin Reinnervation▲
近年，感觉神经植入术得到较深入的研究，但埋入的神经能支配多大面积的皮肤尚未回答。我们用神经电生理、神经原性血浆外渗和免疫组化三种方法进行了检测，所得结果显示充分的一致性。本文重点报告血浆外渗实验结果。
1 材料和方法
2.0～2.5kg体重新西兰兔25只，不拘雌雄。左耳背和颈肩部剪毛，2.5%戊巴比妥钠耳缘静脉麻醉(30mg/kg)。切除耳背中央3.0 cm直径全厚度圆形皮肤，在创面的近侧结扎耳中央动静脉，解剖出耳大神经。在颈肩部掀起3.5 cm×4.5 cm带蒂皮瓣，转移到耳背创面。设实验组(皮瓣内埋入神经，分为1、3、5、8个月四个组)和对照组(不埋入神经)，各组动物5只。实验组动物：在皮瓣中央肉膜上作小切口，向着耳大神经近段方向作真皮肉膜间隧道。在耳背创面远侧缘切断耳大神经，近段末端引入隧道，固定于皮瓣真皮上1针，神经埋入1.5 cm。对照组动物：耳背创面内耳大神经全部予以切除，皮瓣内无神经埋入。
, 百拇医药
动物观察到期后，以α-氯醛糖和氨基甲酸乙酯混合麻药耳静脉麻醉(5ml/kg)。在皮瓣近侧耳背上解剖出耳大神经干2.0 cm，挂在连接于电刺激器(日本 NIHON KOHDEN公司)的电极上。向颈总动脉注入美兰溶液(50mg/kg体重)，10min后给予方波刺激(40V，波宽1ms，10Hz，持续20min)。之后，用硫酸纸描记皮瓣边缘和染色区，Quantimet 570图像分析仪计算染色面积。
2 结果
对照组皮瓣于术后8个月未出现染色。
神经埋入1月组，皮瓣染色区位于神经埋入处及其附近，染色面积平均为103.5 mm2，占皮瓣面积的16.8%。之后，染色面积逐步扩大，如3月组平均染色面积为312.3 mm2，占皮瓣面积的50.7%；5月组染色面积为459.0 mm2，占皮瓣面积的74.6%；8月组染色面积为585.5 mm2，占皮瓣面积的95.0%(见附表和附图)。
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附表 各组皮瓣血浆外渗染色面积 组 别
染色区面积(
±s) mm2%
1月
103.5±5.2
16.8
3月
312.3±4.9
50.7
5月
459.0±8.3
, 百拇医药
74.6
8月
585.5±10.6
95.0
未埋神经
0
-
组间t检验P<0.01，皮瓣总面积为615.8 mm2
附图 神经埋入兔耳失神经皮瓣后血浆外渗染色区
(A、B、C、D分别为术后1、3、5、8个月)
, http://www.100md.com
3 讨论
感觉神经植入术中，埋入多大外径和长度的神经能使多大面积的皮肤获得神经再支配尚无报告。本实验沿用以往的失神经皮瓣模型，皮瓣直径为3.0 cm，圆形，面积约700 mm2，移植以后面积有些缩小，计算为615.8 mm2。实验同期，测量20条耳大神经外径，其左右径为1.28±0.17 mm，前后径为0.7±0.09 mm。神经埋在肉膜浅面，长度为1.5 cm。此条件下术后8个月整个皮瓣获得神经再支配。考虑到神经再生速度进展较快以及两观察组间相距较长，作者认为达到这种再支配程度会早于8个月。作者以往的临床实践和研究表明，埋入1条神经虽支配范围有限，但由于神经是以轴突抽芽的方式再生，故可用增加移植神经数目、移植带分叉的移植体、增加移植体长度、将神经迂回曲折埋入以及全程而不是只将神经末端固定于皮瓣的点穴式埋入等方法，增加神经的分布范围以增大再生神经轴突发芽机会，扩大再支配范围。也可把神经放在皮瓣的中央，而边缘依靠邻近的皮神经长入(侧支神经再支配)，加上神经营养药物应用和功能训练等方法，促进感觉功能的恢复，已为临床工作证实[1]。
, http://www.100md.com
本实验进行前，先用神经单纤维放电是引导的电生理方法获得再生纤维放电分布等资料，之后又收集放电部位的皮肤标本，用抗NF抗体免疫组化法作形态学证实，三种方法相互印证。电生理和免疫组化实验结果与作者以前所报告的结果完全一致，显示了高度的可重复性；三种检测方法的结果也充分相符，因此客观测量了再生纤维支配的面积，同时也能明确再生纤维的感觉类型。计算其数量、比率，了解再生过程和程度。
Brenan(1986)首先证明大鼠隐神经的分布范围与血浆外渗染色区相同[2]。其原理是皮肤中与伤害感受器C类纤维相连的无髓传入纤维被激活后，即刻使末稍支配的皮肤中的血管通透性增加，而某些活性染料(如Evans blue)因迅速与血浆蛋白结合随血浆外渗。这种方法被认为只能确定特定的C类纤维分布，而不是全部的C类纤维。而我们以前的以及本实验之先所做的电生理实验证实C类纤维较少(正常皮肤也如此)，A类纤维较多。实验中也未发现两类纤维出现放电时间上的差别，加之电生理、血浆外渗和形态学观察结果的充分一致性，作者认为被染色的区域可以代表所有再生纤维的支配区。■
参考文献：
[1]陈绍宗，姜树军，胡三觉，等.神经植入重建皮瓣感觉的实验研究和临床应用.中华整形烧伤外科杂志，1991，7(3)：164
[2]Brenan A.Collateral reinnervation of skin by C-fibres following nerve injury in the rat.Brain Res，1986,385(1):152
收稿日期：1998-12-06, 百拇医药