调节源口服液对高脂大鼠红细胞及肝细胞膜流动性影响的研究*
作者：马晓翠 高佩琦 许 艳 李静杰
单位：马晓翠 高佩琦 许 艳(哈尔滨医科大学生物物理教研室 黑龙江150086)；李静杰(黑龙江省双城市医院神经内科)
关键词：调节源口服液；红细胞膜流动性；肝匀浆膜流动性；脂质过氧化物(LPO)；血脂；肝脂
中国血液流变学杂志990201 摘 要 以实验性高脂血症大鼠为模型研究了调节源口服液对高脂大鼠红细胞膜流动性、肝匀浆膜流动性的影响。并对血脂、肝脂血浆及肝组织中脂质过氧化物(LPO)加以测定，结果显示：调节源口服液能显著降低血浆、肝组织中胆固醇含量(P<0.01)，也同样能显著降低血浆、肝组织中脂质过氧化物的含量(P<0.01)，提高了红细胞膜、肝组织匀浆膜流动性。
EFFECTS OF THE ORAL SOLUTION OF TOGYRUN ON MEMBRANE
, 百拇医药
FLUIDITY OF ERYTHROCYTES AND MEMBRANE FLUIDITY
OF THE HEPATIC CELLS
Ma Xiaocui et al
Department of Biophysics,Harbin Medical(Harbin 150086)
Abstract In this research,we studied the effects of the oral solution of ToGyRun on membrane fludity of erythrocytes and membrane fluidity of the hepatic cells with hyperlipdaemia rats from the angle of the cholesteral concentration and lipid peroxdation level.The results showed that the oral solution of ToGyRun could significantly decrease the cholesteral concentration and the lipid peroxidation level of serum and liver (P<0.01),while the membrane fluidity of erythrocytes and membrane fluidity of the hepatic cells significantly lowered(P<0.03 and P<0.01).
, 百拇医药
Keywords Oral Solution of ToGyRun Lipid peroxidation level Membrane fluidity of the hepatic clees TC Membrane fluidity of erythrocytes
细胞膜流动性的维持对细胞功能的正常发挥至关重要。高脂血症可使大鼠红细胞膜、肝匀浆细胞膜流动性降低。以黄芪多糖为主要成分的调节源口服液具有多种保健功能。本研究旨在观察高脂大鼠红细胞膜及肝匀浆细胞膜流动性的变化及黄芪多糖的调节作用，并探讨其作用机理。
1 材料与方法
1.1 实验动物 健康雄性Wistar大鼠30只，体重150±10g。
1.2 实验方法
1.2.1 动物造型与给药 Wistar大鼠30只按体重随机分为3组。正常对照组：喂普通饲料30天。高脂对照组：喂高脂饲料(组成为：普通饲料加2%胆固醇，10%猪油，5%蛋黄粉,0.2%甲基硫氧嘧啶)[1]30天。调节源口服液组：喂高脂饲料30天，从第16天起灌胃调节源口服液，每日一次，剂量为10ml/kg。禁食16小时后于第31日上午肝素抗凝、取眼血及肝脏。
, 百拇医药
1.2.2 血脂、肝脂测定 0.1g肝组织用生理盐水匀浆定容5ml,离心后取上清20μl及血浆20μl，用总胆固醇试剂盒(CHOD-PAP法)测定TC含量，用甘油三脂试剂盒(GPO-PAP法)测定TG含量。(试剂盒由北京中生生物工程高技术公司生产)
1.2.3 LPO测定 血浆LPO直接采用硫代巴比妥酸分光光度法测定[2]、肝脏LPO测定时先取0.1g肝组织用生理盐水匀浆后定容5ml，取匀浆液0.1ml，然后用硫代巴比妥酸分光光度法测定。
1.2.4 红细胞膜流动性 用一步低渗溶血法提取红细胞膜，用DPH荧光探针标记红细胞膜脂区，测量EX=362nm,EM=432nm时荧光偏振度，并计算微粘度。(荧光偏振度于RF540型荧光分光光度计上测量)
1.2.5 肝匀浆膜流动性测定 0.1g肝组织用生理盐水匀浆定容5ml,用DPH标记后，于日本岛津公司生产的RF540型荧光分光光度计上测量。(EX=362nm,EM=432nm)。
, 百拇医药
2 结 果
2.1 对血脂、肝脂的影响
高脂饲料喂饲30天后，血浆甘油三脂、胆固醇、肝脏甘油三脂、胆固醇均显著升高(P<0.01)。调节源口服液灌胃后，血、肝胆固醇含量极显著降低(P<0.01)。血浆中甘油三脂含量也有显著性降低(P<0.05),肝中甘油三脂虽有降低，但并无统计学意义。
表1 调节源口服液对高脂大鼠肝脂、血脂的影响(
±s,mmol/l) 组 别
动物数
血 脂
肝 脂
TC
, 百拇医药
TG
TC
TG
正常组
10
1.196±0.029*
0.143±0.002*
0.152±0.004*
0.464±0.021*
高脂组
10
, http://www.100md.com 16.023±10.963
0.606±0.028
0.738±0.053
0.838±0.039
调节源
口服液组
10
4.453±3.071*
0.497±0.009**
0.320±0.030*
0.766±0.176#
, 百拇医药
与高脂组比较:*P<0.01 **P.0.05 #P>0.05
2.2 对血浆LPO及肝脏LPO的影响
高脂组血浆、肝中LPO含量较对照均有显著性升高(P<0.01),调节源口服液组较高脂组均有显著性降低(P<0.01)。
表2 调节源口服液对高脂大鼠血浆、肝组织中LPO的影响(±s) 组别
动物数
血浆LPO(μ mol/l)
肝组织LPO(mmol/g)
正常组
, 百拇医药
10
1.50±0.02
0.84±0.02
高脂组
10
1.88±0.01
7.71±3.30
调节源口服液组
10
1.69±0.02
3.70±1.60
与高脂组比较:P<0.01
, http://www.100md.com
2.3 对红细胞膜及肝匀浆膜流动性的影响
红细胞膜流动性：高脂组荧光偏振度P值微粘度
较正常组显著升高(P<0.05)，调节源口服液组较高脂组P，均明显降低(P<0.03和P<0.01)表明高脂组膜流动性降低，而调节源口服液组膜流动性升高。
肝匀浆膜流动性：高脂组大鼠肝细胞膜荧光偏振度P及微粘度较正常组明显升高(P<0.01),表明膜流动性降低，调节源组P，值均较高脂组明显降低(P<0.05,P<0.01)表明膜流动性升高。
, 百拇医药
表3 调节源口服液对高脂大鼠红细胞膜、肝匀浆细胞膜流动性的影响(±s) 组 别
动物数
红细胞膜
肝匀浆细胞膜
P
(泊)
P
(泊)
正常组
10
0.2911±0.0004***
, http://www.100md.com
3.514±0.410***
0.1710±0.004*
1.117±0.028*
高脂组
10
0.3184±0.0016
4.003±0.3994
0.2435±0.0006
2.182±0.028
调节源
口服液组
, 百拇医药
10
0.2915±0.0001**
3.469±0.0449*
0.2280±0.0002*
1.987±0.057**
与高脂组比较:*P<0.01 **P<0.03 ***P<0.05
3 讨 论
在正常生理条件下，细胞膜保持一定的流动性，从而保证完成细胞的各项功能，细胞膜流动性的降低会引起多种细胞功能障碍，如膜上酶活性降低，膜的转运功能下降，膜受体表达降低等[3]。
, http://www.100md.com
动物摄入高脂饲料后，随着血浆、肝脏中胆固醇含量的升高、红细胞膜，肝组织细胞膜上的胆固醇含量也随之增加，使膜上胆固醇与磷脂比值升高，导致流动性下降。调节源口服液能显著降低血中及肝中胆固醇含量，减少胆固醇在膜上的沉积，这是调节源口服液改善红细胞、肝匀浆细胞流动性的原因之一。
高脂动物细胞膜更易受自由基的攻击[4]，脂质过氧化物是自由基作用于生物膜磷脂中的不饱和脂肪酸而生成的产物，主要损伤细胞膜质膜和亚细胞器，引起细胞结构与功能障碍。[5]在自由基的攻击下使膜中磷脂发生过氧化损伤，脂质过氧化物的代谢终产物丙二醛在膜内形成交联，亦导致细胞膜流动性下降。[6]在本次实验中高脂组血浆LPO及肝组织LPO均显著高于对照组，而调节源口服液组能显著降低这一指标。从而从脂过氧化方面改善膜流动性。
在高脂血症中，脂质代谢的改变特别是胆固醇及LPO的增多导致膜流动性下降[6]。已知黄芪能降血脂抗脂质过氧化损伤[7]，这是否同其有效成分黄芪多糖的作用有关，目前尚不清楚。本实验显示，以黄芪多糖为主要成分的调节源口服液可明显降低肝组织，血浆中胆固醇的含量，减轻脂质过氧化损伤，改善红细胞膜及肝组织匀浆细胞膜流动性。
, 百拇医药
*黑龙江省自然科学基金资助课题
参考文献
[1] 孟昭光等.燕麦对大鼠实验性高脂血症的降脂作用.药理杂志，1987,22(6):342-343
[2] 问荣等.过氧化脂质硫代巴比妥酸分光光度法改进.生物化学与生物物理进展，1990,17(8):141
[3] 林克椿等.细胞膜的流动性.生理科学进展，1985,16(1):83
[4] 杨林等.实验性高脂大鼠丙二醛.游离脂肪酸
[5] Slater TP.Free-radical mechanism in tissue in jury Biochem J 1984;222:1
[6] 林克椿等.细胞膜的流动性.物理科学进展，1985,16(1):83
[7] 陈鸿基等.黄芪对大鼠肾缺血再灌注时过氧化脂质含量的影响.徐州医学院学报，1989,9(3):186
(1998年9月24日收稿), http://www.100md.com
单位：马晓翠 高佩琦 许 艳(哈尔滨医科大学生物物理教研室 黑龙江150086)；李静杰(黑龙江省双城市医院神经内科)
关键词：调节源口服液；红细胞膜流动性；肝匀浆膜流动性；脂质过氧化物(LPO)；血脂；肝脂
中国血液流变学杂志990201 摘 要 以实验性高脂血症大鼠为模型研究了调节源口服液对高脂大鼠红细胞膜流动性、肝匀浆膜流动性的影响。并对血脂、肝脂血浆及肝组织中脂质过氧化物(LPO)加以测定，结果显示：调节源口服液能显著降低血浆、肝组织中胆固醇含量(P<0.01)，也同样能显著降低血浆、肝组织中脂质过氧化物的含量(P<0.01)，提高了红细胞膜、肝组织匀浆膜流动性。
EFFECTS OF THE ORAL SOLUTION OF TOGYRUN ON MEMBRANE
, 百拇医药
FLUIDITY OF ERYTHROCYTES AND MEMBRANE FLUIDITY
OF THE HEPATIC CELLS
Ma Xiaocui et al
Department of Biophysics,Harbin Medical(Harbin 150086)
Abstract In this research,we studied the effects of the oral solution of ToGyRun on membrane fludity of erythrocytes and membrane fluidity of the hepatic cells with hyperlipdaemia rats from the angle of the cholesteral concentration and lipid peroxdation level.The results showed that the oral solution of ToGyRun could significantly decrease the cholesteral concentration and the lipid peroxidation level of serum and liver (P<0.01),while the membrane fluidity of erythrocytes and membrane fluidity of the hepatic cells significantly lowered(P<0.03 and P<0.01).
, 百拇医药
Keywords Oral Solution of ToGyRun Lipid peroxidation level Membrane fluidity of the hepatic clees TC Membrane fluidity of erythrocytes
细胞膜流动性的维持对细胞功能的正常发挥至关重要。高脂血症可使大鼠红细胞膜、肝匀浆细胞膜流动性降低。以黄芪多糖为主要成分的调节源口服液具有多种保健功能。本研究旨在观察高脂大鼠红细胞膜及肝匀浆细胞膜流动性的变化及黄芪多糖的调节作用，并探讨其作用机理。
1 材料与方法
1.1 实验动物 健康雄性Wistar大鼠30只，体重150±10g。
1.2 实验方法
1.2.1 动物造型与给药 Wistar大鼠30只按体重随机分为3组。正常对照组：喂普通饲料30天。高脂对照组：喂高脂饲料(组成为：普通饲料加2%胆固醇，10%猪油，5%蛋黄粉,0.2%甲基硫氧嘧啶)[1]30天。调节源口服液组：喂高脂饲料30天，从第16天起灌胃调节源口服液，每日一次，剂量为10ml/kg。禁食16小时后于第31日上午肝素抗凝、取眼血及肝脏。
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1.2.2 血脂、肝脂测定 0.1g肝组织用生理盐水匀浆定容5ml,离心后取上清20μl及血浆20μl，用总胆固醇试剂盒(CHOD-PAP法)测定TC含量，用甘油三脂试剂盒(GPO-PAP法)测定TG含量。(试剂盒由北京中生生物工程高技术公司生产)
1.2.3 LPO测定 血浆LPO直接采用硫代巴比妥酸分光光度法测定[2]、肝脏LPO测定时先取0.1g肝组织用生理盐水匀浆后定容5ml，取匀浆液0.1ml，然后用硫代巴比妥酸分光光度法测定。
1.2.4 红细胞膜流动性 用一步低渗溶血法提取红细胞膜，用DPH荧光探针标记红细胞膜脂区，测量EX=362nm,EM=432nm时荧光偏振度，并计算微粘度。(荧光偏振度于RF540型荧光分光光度计上测量)
1.2.5 肝匀浆膜流动性测定 0.1g肝组织用生理盐水匀浆定容5ml,用DPH标记后，于日本岛津公司生产的RF540型荧光分光光度计上测量。(EX=362nm,EM=432nm)。
, 百拇医药
2 结 果
2.1 对血脂、肝脂的影响
高脂饲料喂饲30天后，血浆甘油三脂、胆固醇、肝脏甘油三脂、胆固醇均显著升高(P<0.01)。调节源口服液灌胃后，血、肝胆固醇含量极显著降低(P<0.01)。血浆中甘油三脂含量也有显著性降低(P<0.05),肝中甘油三脂虽有降低，但并无统计学意义。
表1 调节源口服液对高脂大鼠肝脂、血脂的影响(
±s,mmol/l) 组 别动物数
血 脂
肝 脂
TC
, 百拇医药
TG
TC
TG
正常组
10
1.196±0.029*
0.143±0.002*
0.152±0.004*
0.464±0.021*
高脂组
10
, http://www.100md.com 16.023±10.963
0.606±0.028
0.738±0.053
0.838±0.039
调节源
口服液组
10
4.453±3.071*
0.497±0.009**
0.320±0.030*
0.766±0.176#
, 百拇医药
与高脂组比较:*P<0.01 **P.0.05 #P>0.05
2.2 对血浆LPO及肝脏LPO的影响
高脂组血浆、肝中LPO含量较对照均有显著性升高(P<0.01),调节源口服液组较高脂组均有显著性降低(P<0.01)。
表2 调节源口服液对高脂大鼠血浆、肝组织中LPO的影响(
±s) 组别动物数
血浆LPO(μ mol/l)
肝组织LPO(mmol/g)
正常组
, 百拇医药
10
1.50±0.02
0.84±0.02
高脂组
10
1.88±0.01
7.71±3.30
调节源口服液组
10
1.69±0.02
3.70±1.60
与高脂组比较:P<0.01
, http://www.100md.com
2.3 对红细胞膜及肝匀浆膜流动性的影响
红细胞膜流动性：高脂组荧光偏振度P值微粘度
较正常组显著升高(P<0.05)，调节源口服液组较高脂组P，均明显降低(P<0.03和P<0.01)表明高脂组膜流动性降低，而调节源口服液组膜流动性升高。肝匀浆膜流动性：高脂组大鼠肝细胞膜荧光偏振度P及微粘度
较正常组明显升高(P<0.01),表明膜流动性降低，调节源组P，值均较高脂组明显降低(P<0.05,P<0.01)表明膜流动性升高。, 百拇医药
表3 调节源口服液对高脂大鼠红细胞膜、肝匀浆细胞膜流动性的影响(
±s) 组 别动物数
红细胞膜
肝匀浆细胞膜
P
(泊)
P
(泊)
正常组
10
0.2911±0.0004***
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3.514±0.410***
0.1710±0.004*
1.117±0.028*
高脂组
10
0.3184±0.0016
4.003±0.3994
0.2435±0.0006
2.182±0.028
调节源
口服液组
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10
0.2915±0.0001**
3.469±0.0449*
0.2280±0.0002*
1.987±0.057**
与高脂组比较:*P<0.01 **P<0.03 ***P<0.05
3 讨 论
在正常生理条件下，细胞膜保持一定的流动性，从而保证完成细胞的各项功能，细胞膜流动性的降低会引起多种细胞功能障碍，如膜上酶活性降低，膜的转运功能下降，膜受体表达降低等[3]。
, http://www.100md.com
动物摄入高脂饲料后，随着血浆、肝脏中胆固醇含量的升高、红细胞膜，肝组织细胞膜上的胆固醇含量也随之增加，使膜上胆固醇与磷脂比值升高，导致流动性下降。调节源口服液能显著降低血中及肝中胆固醇含量，减少胆固醇在膜上的沉积，这是调节源口服液改善红细胞、肝匀浆细胞流动性的原因之一。
高脂动物细胞膜更易受自由基的攻击[4]，脂质过氧化物是自由基作用于生物膜磷脂中的不饱和脂肪酸而生成的产物，主要损伤细胞膜质膜和亚细胞器，引起细胞结构与功能障碍。[5]在自由基的攻击下使膜中磷脂发生过氧化损伤，脂质过氧化物的代谢终产物丙二醛在膜内形成交联，亦导致细胞膜流动性下降。[6]在本次实验中高脂组血浆LPO及肝组织LPO均显著高于对照组，而调节源口服液组能显著降低这一指标。从而从脂过氧化方面改善膜流动性。
在高脂血症中，脂质代谢的改变特别是胆固醇及LPO的增多导致膜流动性下降[6]。已知黄芪能降血脂抗脂质过氧化损伤[7]，这是否同其有效成分黄芪多糖的作用有关，目前尚不清楚。本实验显示，以黄芪多糖为主要成分的调节源口服液可明显降低肝组织，血浆中胆固醇的含量，减轻脂质过氧化损伤，改善红细胞膜及肝组织匀浆细胞膜流动性。
, 百拇医药
*黑龙江省自然科学基金资助课题
参考文献
[1] 孟昭光等.燕麦对大鼠实验性高脂血症的降脂作用.药理杂志，1987,22(6):342-343
[2] 问荣等.过氧化脂质硫代巴比妥酸分光光度法改进.生物化学与生物物理进展，1990,17(8):141
[3] 林克椿等.细胞膜的流动性.生理科学进展，1985,16(1):83
[4] 杨林等.实验性高脂大鼠丙二醛.游离脂肪酸
[5] Slater TP.Free-radical mechanism in tissue in jury Biochem J 1984;222:1
[6] 林克椿等.细胞膜的流动性.物理科学进展，1985,16(1):83
[7] 陈鸿基等.黄芪对大鼠肾缺血再灌注时过氧化脂质含量的影响.徐州医学院学报，1989,9(3):186
(1998年9月24日收稿), http://www.100md.com