高胆固醇血症家兔自然恢复过程中红细胞膜脂质的变化
作者：高秀梅 张伯礼 王同胜 史红 内龙道
单位：高秀梅 张伯礼 王同胜 史红 天津中医学院中医研究所 (天津300193)；内龙道 天津中医学院留学生
关键词：高胆固醇血症；血清脂蛋白；载脂蛋白；红细胞膜胆固醇；肝脂质
中国血液流变学杂志990404 摘要 本文采用喂饲家兔高脂饲料4周后，血清中TC升高约10倍，LDL
-c、APOB、APOAⅠ也升高，HDL-c降低；肝组织中TC、LDL-c、HDL-c以及红细胞膜Ch、Ch/P1比值也随之升高，说明该模型已成功，模型组成功后停喂高脂饲料，2周后血清、肝组织中上述各项指标也随之下降，以血清脂质下降明显，但红细胞膜上Ch、Ch/P1比值并未随血清脂质下降而下降，这说明血清中脂质并不能真正反应体内的脂质代谢情况，而红细胞膜上Ch、Ch/P1比值可作为监测机体血脂代谢的一项指标。
, 百拇医药
中图分类号 R454.2
CHANGES OF ERYTHROCYTE MEMBRANE LIPID IN THE NATURAL
RECOVERY OF RABBITS WITH HIGH CHOLESTEREMIA
Gao Xiumei Zhang Boli Wang Tongsheng Shi Hong Nei Dolong
(Natural Medicine Istitute of Tianjin Natural Medicine College(300193)
家兔通过喂饲外源性胆固醇可造成高胆固醇血症，停止摄服外源性胆固醇后血清中脂类可降低，但红细胞膜脂质是否随之降低，目前尚未有报道，为此，我们观察了高脂血症家兔自然恢复过程中不同部位脂质变化，现报告于下。
, 百拇医药
1 材料和方法
1.1 动物及分组
正常大耳白家兔30只，体重2.04±0.24Kg，雌雄各半，由天津市动物中心提供，按体重性别分层，随机分为空白对照组、模型组、自然恢复组，每组10只，其中空白对照组1只在实验开始时采血而死。
1.2 高脂饲料的制备
按每日每只兔进食胆固醇0.5g，蛋黄粉5g计算，均匀地拌于普通饲料中，制成高脂颗粒饲料。
1.3 造模方法
空白对照组喂饲普通饲料，其余两组均喂饲高脂饲料，喂饲4周后，将空白对照组，模型组家兔心脏采血、处死摘取肝脏。自然恢复组改为普通饲料，继续喂饲两周后，心脏采血、处死摘取肝脏。
, 百拇医药
1.4 脂质测定方法
1.4.1 血清中脂质测定 胆固醇(TC)、高密度脂蛋白(HDL-c)、低密度脂蛋白(LDL-c)：采用酶法测定。载脂蛋白A(APOAⅠ)、载脂蛋白B(APOB)：采用透射比浊法。
1.4.2 红细胞膜脂质的测定 取5ml抗凝血参考Dodge法[1]制备红细胞膜，冷冻离心机4℃下用pH7.4Tris-HCl缓冲液离心制备红细胞膜，将最后获得白色膜冰冻干燥备用。膜磷脂(P1)测定参考Lindberg法[2]进行。膜胆固醇(Ch)测定参考Parekh法。[3]
1.4.3 肝组织中脂质的测定：取新鲜肝脏进行称重、研磨，采用乙醇丙(比例为1∶1)抽提脂类后，采用酶法测定TC、HDL-c、LDL-c。
1.5 统计学处理
, 百拇医药
采用多组数据计量资料方差分析，组间比较用q检验。
2 结 果
2.1 高胆固醇血症家兔自然恢复过程中血清脂质变化
经造模后，模型组和空白对照组相比，血清中TC、LDL-c、LDL-c/HDL-c比值、APOAⅠ、APOB明显增高，均为P<0.01，而HDL-c、APOAⅠ/APOAB比值明显降低，P<0.05，提示该项实验造模成功。
模型成功后停喂高脂饲料，经过两周自然恢复血清中TC、LDL-c、LDL-c/HDL-c比值、APOAⅠ、APOB均明显下降，HDL-c、APOAⅠ/APOAB比值升高，除HDL-c、APOB、APOAⅠ/APOB比值外，其余各项均有非常显著差异，见表1、2。
表1 高脂血症家兔自然恢复中血清胆固醇 (
±s)
, 百拇医药
分 组
n
TC(mmol/L)
空白对照组
9
1.83±0.51
模型组
10
20.24±5.32**
自然恢复组
10
12.09±4.92△△
, 百拇医药
注：与空白组相比，*P<0.05,**P<0.01.与模型组相比，△P<0.05,△△P<0.01
表2 高脂血症家兔自然恢复中血清脂蛋白变化 (±s)
分 组
n
HDL-c(mmol/L)
LDL-c(mmol/L)
LDL-c/HDL-c
空白对照组
, 百拇医药 9
0.20±0.06
1.36±0.38
6.19±3.02
模型组
10
0.15±0.04*
16.42±4.84**
124.08±62.94**
自然恢复组
10
, http://www.100md.com 0.19±0.05
6.83±3.74△△
36.54±22.05△△
2.2 高脂血症家兔自然恢复过程中肝组织中脂质变化
造模后，模型组与空白对照组相比，肝组织中TC、HDL-c、LDL-c、LDL/HDL-c比值明显增高，P<0.01或P<0.05。模型组经过两周的自然恢复后，肝组织中LDL-c/HDL-c比值与模型组相比显著降低，P<0.05，而TC、LDL-c、HDL-c也有下降趋势，但无显著差异。见表3。
表3 高脂血症家兔自然恢复中血清载脂蛋白变化 (±s)
, 百拇医药
分 组
N
APOAⅠ(g/L)
APOB(g/L)
APOAⅠ/APOB
空白对照组
9
0.23±0.03
0.18±0.05
1.26±0.56
模型组
10
, http://www.100md.com 0.61±0.23**
1.73±0.66**
0.36±0.08**
自然恢复组
10
0.27±0.11△△
0.58±0.24
0.45±0.14
2.3 高脂血症家兔自然恢复过程中红细胞膜脂质的变化
模型组红细胞膜中Ch、Ch/P1比值明显高于空白对照组，P<0.05。模型组经过两周的自然恢复后，红细胞膜的Ch、P1与模型组相比无明显变化。P1在各组之间无明显差异，见表4。 表4 高脂血症家兔自然恢复中肝组织TC (±s)
, 百拇医药
分 组
n
TC(mg/g肝)
空白对照组
9
0.68±0.39
模型组
10
5.03±0.78**
自然恢复组
10
4.36±1.92
, http://www.100md.com 表5 高脂血症家兔自然恢复中肝组织脂蛋白 (±s) 分 组
n
HDL-c(mg/g肝)
LDL-c
LDL-c/HDL-c
空白对照组
9
0.25±0.14
0.33±0.24
1.32±1.81
, 百拇医药
模型组
10
0.63±0.30**
3.07±0.20*
5.21±2.94*
自然恢复组
10
0.62±0.27
2.87±1.34
4.72±0.99*
表6 高脂血症家兔自然恢复中红细胞膜脂 (±s) 分 组
, 百拇医药
N
Ch
P1
Ch/P1
空白对照组
9
0.06±0.01
0.054±0.007
1.11±0.15
模型组
10
0.11±0.03*
, 百拇医药 0.056±0.009
1.89±0.66*
自然恢复组
10
0.12±0.04
0.057±0.028
2.10±1.22
3 讨 论
在临床治疗高脂血症时，首要任务是控制饮食，为此我们观察了停喂高脂饲料后不同部位脂质的恢复情况。实验结果表明：模型组停喂高脂饲料后，肝组织、血清血脂水平均可有不同程度下降。但红细胞膜中的cH、P1变化甚微，说明红细胞膜胆固醇一旦增高，则不易恢复，其并不随血清脂质的下降而下降，红细胞膜胆固醇与磷脂比值对红细胞膜的结构影响较大，由于Ch/P1比值升高可影响红细胞膜质和膜蛋白的相互作用及膜蛋白编排重组，引起红细胞膜的流动性和变形能力减低，使红细胞通过微血管时发生障碍，产生微循环灌注不足。若在动脉硬化的基础上，可诱发心肌梗塞和脑梗塞等疾病发生或妨碍侧支循环建立。
, 百拇医药
田氏等人[4]观察到急性脑梗塞患者虽然血清中胆固醇在正常范围之内，但红细胞膜的胆固醇明显增高，这一结果佐证了本实验的结果，结合两组实验结果，我们认为红细胞ch/P1比值可作为监测体内脂质变化的可靠指标。在治疗高脂血症时，在控制饮食同时适当配合药物治疗促进其早日恢复。 天津市青年基金资助No:963708611
参考文献
1 Dodge T,et al.The preparation and chemical characteristics of Hemoglobin-Free Ghosts of human erythrocytes Arch Biochem Biophys 1963;100:119.
2 Linberg O,et al.Determination of organic phosphorus compounds by phosphate analysis.In:Glic D(ed).methods of biochemical analysis.New York:Interscience publisher,1956,1.
3 Parekh AC,et al.Cholesterol determination with ferric acetateuranjum acetate and sulfuric acid-ferrus reagents Anal Chem 1970;42:1423
4 田桂玲，杨露春等.红细胞变形性与膜胆固醇关系研究.中国神经精神疾病杂志1997，23(1)：37:38
(1998年8月6日收稿), http://www.100md.com
单位：高秀梅 张伯礼 王同胜 史红 天津中医学院中医研究所 (天津300193)；内龙道 天津中医学院留学生
关键词：高胆固醇血症；血清脂蛋白；载脂蛋白；红细胞膜胆固醇；肝脂质
中国血液流变学杂志990404 摘要 本文采用喂饲家兔高脂饲料4周后，血清中TC升高约10倍，LDL
-c、APOB、APOAⅠ也升高，HDL-c降低；肝组织中TC、LDL-c、HDL-c以及红细胞膜Ch、Ch/P1比值也随之升高，说明该模型已成功，模型组成功后停喂高脂饲料，2周后血清、肝组织中上述各项指标也随之下降，以血清脂质下降明显，但红细胞膜上Ch、Ch/P1比值并未随血清脂质下降而下降，这说明血清中脂质并不能真正反应体内的脂质代谢情况，而红细胞膜上Ch、Ch/P1比值可作为监测机体血脂代谢的一项指标。
, 百拇医药
中图分类号 R454.2
CHANGES OF ERYTHROCYTE MEMBRANE LIPID IN THE NATURAL
RECOVERY OF RABBITS WITH HIGH CHOLESTEREMIA
Gao Xiumei Zhang Boli Wang Tongsheng Shi Hong Nei Dolong
(Natural Medicine Istitute of Tianjin Natural Medicine College(300193)
家兔通过喂饲外源性胆固醇可造成高胆固醇血症，停止摄服外源性胆固醇后血清中脂类可降低，但红细胞膜脂质是否随之降低，目前尚未有报道，为此，我们观察了高脂血症家兔自然恢复过程中不同部位脂质变化，现报告于下。
, 百拇医药
1 材料和方法
1.1 动物及分组
正常大耳白家兔30只，体重2.04±0.24Kg，雌雄各半，由天津市动物中心提供，按体重性别分层，随机分为空白对照组、模型组、自然恢复组，每组10只，其中空白对照组1只在实验开始时采血而死。
1.2 高脂饲料的制备
按每日每只兔进食胆固醇0.5g，蛋黄粉5g计算，均匀地拌于普通饲料中，制成高脂颗粒饲料。
1.3 造模方法
空白对照组喂饲普通饲料，其余两组均喂饲高脂饲料，喂饲4周后，将空白对照组，模型组家兔心脏采血、处死摘取肝脏。自然恢复组改为普通饲料，继续喂饲两周后，心脏采血、处死摘取肝脏。
, 百拇医药
1.4 脂质测定方法
1.4.1 血清中脂质测定 胆固醇(TC)、高密度脂蛋白(HDL-c)、低密度脂蛋白(LDL-c)：采用酶法测定。载脂蛋白A(APOAⅠ)、载脂蛋白B(APOB)：采用透射比浊法。
1.4.2 红细胞膜脂质的测定 取5ml抗凝血参考Dodge法[1]制备红细胞膜，冷冻离心机4℃下用pH7.4Tris-HCl缓冲液离心制备红细胞膜，将最后获得白色膜冰冻干燥备用。膜磷脂(P1)测定参考Lindberg法[2]进行。膜胆固醇(Ch)测定参考Parekh法。[3]
1.4.3 肝组织中脂质的测定：取新鲜肝脏进行称重、研磨，采用乙醇丙(比例为1∶1)抽提脂类后，采用酶法测定TC、HDL-c、LDL-c。
1.5 统计学处理
, 百拇医药
采用多组数据计量资料方差分析，组间比较用q检验。
2 结 果
2.1 高胆固醇血症家兔自然恢复过程中血清脂质变化
经造模后，模型组和空白对照组相比，血清中TC、LDL-c、LDL-c/HDL-c比值、APOAⅠ、APOB明显增高，均为P<0.01，而HDL-c、APOAⅠ/APOAB比值明显降低，P<0.05，提示该项实验造模成功。
模型成功后停喂高脂饲料，经过两周自然恢复血清中TC、LDL-c、LDL-c/HDL-c比值、APOAⅠ、APOB均明显下降，HDL-c、APOAⅠ/APOAB比值升高，除HDL-c、APOB、APOAⅠ/APOB比值外，其余各项均有非常显著差异，见表1、2。
表1 高脂血症家兔自然恢复中血清胆固醇 (
±s), 百拇医药
分 组
n
TC(mmol/L)
空白对照组
9
1.83±0.51
模型组
10
20.24±5.32**
自然恢复组
10
12.09±4.92△△
, 百拇医药
注：与空白组相比，*P<0.05,**P<0.01.与模型组相比，△P<0.05,△△P<0.01
表2 高脂血症家兔自然恢复中血清脂蛋白变化 (
±s)分 组
n
HDL-c(mmol/L)
LDL-c(mmol/L)
LDL-c/HDL-c
空白对照组
, 百拇医药 9
0.20±0.06
1.36±0.38
6.19±3.02
模型组
10
0.15±0.04*
16.42±4.84**
124.08±62.94**
自然恢复组
10
, http://www.100md.com 0.19±0.05
6.83±3.74△△
36.54±22.05△△
2.2 高脂血症家兔自然恢复过程中肝组织中脂质变化
造模后，模型组与空白对照组相比，肝组织中TC、HDL-c、LDL-c、LDL/HDL-c比值明显增高，P<0.01或P<0.05。模型组经过两周的自然恢复后，肝组织中LDL-c/HDL-c比值与模型组相比显著降低，P<0.05，而TC、LDL-c、HDL-c也有下降趋势，但无显著差异。见表3。
表3 高脂血症家兔自然恢复中血清载脂蛋白变化 (
±s), 百拇医药
分 组
N
APOAⅠ(g/L)
APOB(g/L)
APOAⅠ/APOB
空白对照组
9
0.23±0.03
0.18±0.05
1.26±0.56
模型组
10
, http://www.100md.com 0.61±0.23**
1.73±0.66**
0.36±0.08**
自然恢复组
10
0.27±0.11△△
0.58±0.24
0.45±0.14
2.3 高脂血症家兔自然恢复过程中红细胞膜脂质的变化
模型组红细胞膜中Ch、Ch/P1比值明显高于空白对照组，P<0.05。模型组经过两周的自然恢复后，红细胞膜的Ch、P1与模型组相比无明显变化。P1在各组之间无明显差异，见表4。 表4 高脂血症家兔自然恢复中肝组织TC (
±s), 百拇医药
分 组
n
TC(mg/g肝)
空白对照组
9
0.68±0.39
模型组
10
5.03±0.78**
自然恢复组
10
4.36±1.92
, http://www.100md.com 表5 高脂血症家兔自然恢复中肝组织脂蛋白 (
±s) 分 组n
HDL-c(mg/g肝)
LDL-c
LDL-c/HDL-c
空白对照组
9
0.25±0.14
0.33±0.24
1.32±1.81
, 百拇医药
模型组
10
0.63±0.30**
3.07±0.20*
5.21±2.94*
自然恢复组
10
0.62±0.27
2.87±1.34
4.72±0.99*
表6 高脂血症家兔自然恢复中红细胞膜脂 (
±s) 分 组, 百拇医药
N
Ch
P1
Ch/P1
空白对照组
9
0.06±0.01
0.054±0.007
1.11±0.15
模型组
10
0.11±0.03*
, 百拇医药 0.056±0.009
1.89±0.66*
自然恢复组
10
0.12±0.04
0.057±0.028
2.10±1.22
3 讨 论
在临床治疗高脂血症时，首要任务是控制饮食，为此我们观察了停喂高脂饲料后不同部位脂质的恢复情况。实验结果表明：模型组停喂高脂饲料后，肝组织、血清血脂水平均可有不同程度下降。但红细胞膜中的cH、P1变化甚微，说明红细胞膜胆固醇一旦增高，则不易恢复，其并不随血清脂质的下降而下降，红细胞膜胆固醇与磷脂比值对红细胞膜的结构影响较大，由于Ch/P1比值升高可影响红细胞膜质和膜蛋白的相互作用及膜蛋白编排重组，引起红细胞膜的流动性和变形能力减低，使红细胞通过微血管时发生障碍，产生微循环灌注不足。若在动脉硬化的基础上，可诱发心肌梗塞和脑梗塞等疾病发生或妨碍侧支循环建立。
, 百拇医药
田氏等人[4]观察到急性脑梗塞患者虽然血清中胆固醇在正常范围之内，但红细胞膜的胆固醇明显增高，这一结果佐证了本实验的结果，结合两组实验结果，我们认为红细胞ch/P1比值可作为监测体内脂质变化的可靠指标。在治疗高脂血症时，在控制饮食同时适当配合药物治疗促进其早日恢复。 天津市青年基金资助No:963708611
参考文献
1 Dodge T,et al.The preparation and chemical characteristics of Hemoglobin-Free Ghosts of human erythrocytes Arch Biochem Biophys 1963;100:119.
2 Linberg O,et al.Determination of organic phosphorus compounds by phosphate analysis.In:Glic D(ed).methods of biochemical analysis.New York:Interscience publisher,1956,1.
3 Parekh AC,et al.Cholesterol determination with ferric acetateuranjum acetate and sulfuric acid-ferrus reagents Anal Chem 1970;42:1423
4 田桂玲，杨露春等.红细胞变形性与膜胆固醇关系研究.中国神经精神疾病杂志1997，23(1)：37:38
(1998年8月6日收稿), http://www.100md.com