安体舒通对自发性高血压大鼠肺组织胶原形成的抑制作用
作者：陈秀芳 龚永生 严哲 郑绿珍
单位：(温州医学院 肺心病研究室，浙江 温州 325027)
关键词：自发性高血压；大鼠；醛固酮；胶原；安体舒通
温州医学院学报000205
[摘 要] 目的:观察自发性高血压大鼠(SHR)肺胶原的变化及安体舒通的作用，探讨醛固酮在肺胶原代谢中的意义。 方法:用放射免疫法测定血浆与肺组织的醛固酮含量，肺组织的胶原采用改良的Bergman法测羟脯氨酸含量。 结果:SHR肺组织胶原含量明显增加，安体舒通可显著抑制 SHR胶原的增加程度。结论:醛固酮与SHR肺纤维化有关，安体舒通有抑制纤维化程度的作用。
[中图分类号] R333.6 [文献标识码] A [文章编号] 1000-2138(2000)02-0102-02
, 百拇医药
The inhibition of spironolactone on the collagen biosynthesis of lung tissues in spontaneously hypertensive rats
CHEN Xiu-fang GONG Yong-sheng YAN Zhe
(Department of Biochemistry, Wenzhou Medical College,Wenzhou(325027))
Abstract： Objective：To investigate the changes of collagen of lung tissues in spontaneously hypertensive rats(SHR) and the effects of spironolactone,and to explore the significance of aldosterone in collagen metabolism of lung tissues in SHR.Methods：Aldosterone level in plasma and lung tissues were determined by radioimmunoassay. Collagen contents of lung tissues were measured by determining of hydroxy proline concentration with improved Bergman method.Results：Collagen contents of lung tissues in SHR increased significantly. Spironolactone could remarkably inhibit the increase of collagen conents in lung tissues.Conclusion：Aldosterone may be closely related to the pathogenesis of pulmonary fibrosis in SHR. Spironolactone could inhibit the degree of pulmonary fibrosis.
, 百拇医药
Key words： spontaneously hypertensive; rats; aldosterone; collagen; spironolactone
动物实验和临床均表明高血压性左心室肥厚时，心肌有明显间质纤维化，并与血浆、心肌醛固酮含量增高有关[1]。但高血压时是否存在肺纤维化，以及与醛固酮的关系，尚未见文献报道。本实验以肺组织醛固酮、胶原含量的变化为指标研究了安体舒通对自发性高血压大鼠(SHR)的抗纤维化作用，探讨醛固酮与肺纤维化的关系。
1 材料和方法
1.1 动物与分组 雄性SHR 25只及同源Wistar-Kyoto 大鼠(WKY)10只，体重均为200～260g。其中SHR 随机分为二组：①不用药组(SHR组)，共12只；②用安体舒通组(SHRs组)，共13只，每天予以100mg/kg 体重的安体舒通(杭州民生药厂生产)灌胃，连续8周。同源Wistar-kyoto大鼠(WKY)作为正常对照组(WKY组)。SHR组和WKY 组每天喂以等量的生理盐水。
, 百拇医药
1.2 标本采集 大鼠用0.3%戊巴比妥钠(30mg/kg体重)腹腔麻醉后，左颈动脉插管，多道生理记录仪记录颈动脉收缩压。放血，处死动物，取颈动脉血和左肺下叶组织待测。
1.3 血浆、肺组织醛固酮含量测定 取待测肺组织，按每克组织加生理盐水5ml制备匀浆，12000r/min离心20min，取上清液。采用放射免疫分析法(FJ2008c自动γ免疫计数器)测定醛固酮含量，测试盒由北京北方免疫试剂研究所提供，按测试说明书操作。测试结果血浆醛固酮含量以pg/ml表示，肺组织醛固酮含量以pg/(mg.prot)表示，蛋白定量按Lowry法[2]。
1.4 肺组织胶原含量测定 将肺组织用生理盐水洗涤后，用滤纸吸干，称重，剪碎，以6N HCl为介质研成匀浆，置110℃烤箱烘烤24h，再放入70℃水浴中蒸干，然后加1ml蒸馏水复溶，过滤，滤液即为羟脯氨酸提取液。采用改良的Bergman法[3] 测羟脯氨酸浓度，再乘以7.46换算成胶原含量，结果以每克组织胶原含量[mg/(g.tissue)]表示。
, 百拇医药
1.5 统计学处理 数据以均数±标准差 (
±s)表示，采用ANOVA组间q 检验作差异显著性分析。
2 结果
2.1 各组指标测定结果 见附表。
附表 各组实验结果比较(±s) 组别
n
血压(mmHg)
血浆醛固酮
(pg/ml)
肺组织醛固酮
, http://www.100md.com
[pg/(mg.prot)]
肺胶原
[mg/(g.tissue)]
WKY组
10
118±10
338±49
20.1±6.1
3.9±0.6
SHR组
12
193±18**
, 百拇医药
452±61**
31.3±7.9**
8.1±1.7**△△
SHRs组
13
181±17**
487±79**
33.2±7.3**
6.3±0.8**
与WKY组比较：**P<0.01；与SHRs组比较：△ △P<0.01
, 百拇医药
2.2 血浆、肺组织醛固酮含量的变化 附表显示，自发性高血压大鼠(SHR组和SHRs组)血浆及肺组织醛固酮含量均明显高于正常对照组(WKY组)，差异有显著性意义(P<0.01)。SHRs组比SHR组稍高,但差异无显著性。
2.3 肺组织胶原含量的变化 结果发现，SHR组肺胶原含量明显高于WKY组和SHRs 组(均P<0.01)，SHRs组显著高于WKY组(P<0.01)，见附表。
3 讨论
高血压左心室肥厚心肌间质纤维化已引起人们的广泛重视。高血压时心肌细胞间质胶原支架增生，心肌纤维化，同时伴有心肌组织醛固酮含量增加[4]。但是否同时存在肺纤维化及与肺组织醛固酮的关系，尚未见这方面的报道。本实验发现自发性高血压大鼠(SHR)肺组织醛固酮、胶原含量增加，肺纤维化。提示临床上在治疗高血压心肌纤维化的同时需注意肺纤维化的防治。
, 百拇医药
肾素-血管紧张素-醛固酮系统(renin-angioten-
sin-aldosterone system，RAAS)参与高血压病的发生与发展，肺组织局部也存在着RAAS。肺内含有丰富的血管紧张素转换酶，可局部产生血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ，AngⅡ),AngⅡ使醛固酮分泌增加。醛固酮通过胞质Ⅰ型类皮质激素受体使成纤维细胞合成胶原增加[5]，从而使肺胶原含量增加，肺纤维化。
安体舒通(Antisterone，药用名螺内酯Spirono-lactone)的化学结构与醛固酮相似，可能与醛固酮相互竞争与Ⅰ型类皮质激素受体结合，从而抑制成纤维细胞合成胶原。本实验结果证明，经安体舒通处理后的SHR(SHRs 组)肺胶原含量明显低于未予安体舒通处理的SHR(SHR组)，表明安体舒通确实有抑制肺胶原合成(本实验抑制率22.2%)、抗肺纤维化的作用，从而也进一步说明肺纤维化与肺组织醛固酮含量升高有关。
, http://www.100md.com
安体舒通系人工合成的慢速低效保钾利尿药，其来源丰富，价格低廉，副作用少，可直接口服，除了有降血压、抗心肌纤维化的明显作用外，我们的研究还发现其有抗肺纤维化的作用，建议临床上进一步使用与研究。本实验还提示，找寻与醛固酮结构类似的物质，将是筛选防治肺纤维化药物的方向之一，有关实验正在进行中。
作者简介：陈秀芳(1972-)，女，浙江永嘉人，助教，医学士(正在攻读在职硕士学位)，1998年赴浙大生命科学学院进修。
参考文献
[1] 胡晓晟，吕俊升，黄蓉蓉.卡托普利对自发性高血压大鼠心肌纤维化的影响 [J].实用心脑肺血管病杂志，1997,5(2):1-2.
[2] Lowry OH, Rosebrough NJ, Farr AL, et al. Protein measurement with the folin phenol reagent [J]. J Biol Chem, 1951, 193:265-275.
, 百拇医药
[3] BergmanⅠ, Loxley R. Two improved and simplified methods for the spectrophotometric determination of hydroxyproline [J]. Anal Chem, 1963, 35:1961-1965.
[4] 杜宏，李俭春，李辉.自发性高血压大鼠心肌胶原增生与心肌局部血管紧张素Ⅱ及醛固酮[J].高血压杂志，1997,5(1):18-19.
[5] Brilla CG, Zhou G, Matsubara L, et al. Collagen metabolism in cultured adult rat cardiac fibroblasts: response to angiotensin Ⅱ and aldosterone [J]. J Mol Cell Cardial, 1994, 26(7):809.
收稿日期：1999-11-05
修回日期：1999-12-21, 百拇医药
单位：(温州医学院 肺心病研究室，浙江 温州 325027)
关键词：自发性高血压；大鼠；醛固酮；胶原；安体舒通
温州医学院学报000205
[摘 要] 目的:观察自发性高血压大鼠(SHR)肺胶原的变化及安体舒通的作用，探讨醛固酮在肺胶原代谢中的意义。 方法:用放射免疫法测定血浆与肺组织的醛固酮含量，肺组织的胶原采用改良的Bergman法测羟脯氨酸含量。 结果:SHR肺组织胶原含量明显增加，安体舒通可显著抑制 SHR胶原的增加程度。结论:醛固酮与SHR肺纤维化有关，安体舒通有抑制纤维化程度的作用。
[中图分类号] R333.6 [文献标识码] A [文章编号] 1000-2138(2000)02-0102-02
, 百拇医药
The inhibition of spironolactone on the collagen biosynthesis of lung tissues in spontaneously hypertensive rats
CHEN Xiu-fang GONG Yong-sheng YAN Zhe
(Department of Biochemistry, Wenzhou Medical College,Wenzhou(325027))
Abstract： Objective：To investigate the changes of collagen of lung tissues in spontaneously hypertensive rats(SHR) and the effects of spironolactone,and to explore the significance of aldosterone in collagen metabolism of lung tissues in SHR.Methods：Aldosterone level in plasma and lung tissues were determined by radioimmunoassay. Collagen contents of lung tissues were measured by determining of hydroxy proline concentration with improved Bergman method.Results：Collagen contents of lung tissues in SHR increased significantly. Spironolactone could remarkably inhibit the increase of collagen conents in lung tissues.Conclusion：Aldosterone may be closely related to the pathogenesis of pulmonary fibrosis in SHR. Spironolactone could inhibit the degree of pulmonary fibrosis.
, 百拇医药
Key words： spontaneously hypertensive; rats; aldosterone; collagen; spironolactone
动物实验和临床均表明高血压性左心室肥厚时，心肌有明显间质纤维化，并与血浆、心肌醛固酮含量增高有关[1]。但高血压时是否存在肺纤维化，以及与醛固酮的关系，尚未见文献报道。本实验以肺组织醛固酮、胶原含量的变化为指标研究了安体舒通对自发性高血压大鼠(SHR)的抗纤维化作用，探讨醛固酮与肺纤维化的关系。
1 材料和方法
1.1 动物与分组 雄性SHR 25只及同源Wistar-Kyoto 大鼠(WKY)10只，体重均为200～260g。其中SHR 随机分为二组：①不用药组(SHR组)，共12只；②用安体舒通组(SHRs组)，共13只，每天予以100mg/kg 体重的安体舒通(杭州民生药厂生产)灌胃，连续8周。同源Wistar-kyoto大鼠(WKY)作为正常对照组(WKY组)。SHR组和WKY 组每天喂以等量的生理盐水。
, 百拇医药
1.2 标本采集 大鼠用0.3%戊巴比妥钠(30mg/kg体重)腹腔麻醉后，左颈动脉插管，多道生理记录仪记录颈动脉收缩压。放血，处死动物，取颈动脉血和左肺下叶组织待测。
1.3 血浆、肺组织醛固酮含量测定 取待测肺组织，按每克组织加生理盐水5ml制备匀浆，12000r/min离心20min，取上清液。采用放射免疫分析法(FJ2008c自动γ免疫计数器)测定醛固酮含量，测试盒由北京北方免疫试剂研究所提供，按测试说明书操作。测试结果血浆醛固酮含量以pg/ml表示，肺组织醛固酮含量以pg/(mg.prot)表示，蛋白定量按Lowry法[2]。
1.4 肺组织胶原含量测定 将肺组织用生理盐水洗涤后，用滤纸吸干，称重，剪碎，以6N HCl为介质研成匀浆，置110℃烤箱烘烤24h，再放入70℃水浴中蒸干，然后加1ml蒸馏水复溶，过滤，滤液即为羟脯氨酸提取液。采用改良的Bergman法[3] 测羟脯氨酸浓度，再乘以7.46换算成胶原含量，结果以每克组织胶原含量[mg/(g.tissue)]表示。
, 百拇医药
1.5 统计学处理 数据以均数±标准差 (
±s)表示，采用ANOVA组间q 检验作差异显著性分析。2 结果
2.1 各组指标测定结果 见附表。
附表 各组实验结果比较(
±s) 组别n
血压(mmHg)
血浆醛固酮
(pg/ml)
肺组织醛固酮
, http://www.100md.com
[pg/(mg.prot)]
肺胶原
[mg/(g.tissue)]
WKY组
10
118±10
338±49
20.1±6.1
3.9±0.6
SHR组
12
193±18**
, 百拇医药
452±61**
31.3±7.9**
8.1±1.7**△△
SHRs组
13
181±17**
487±79**
33.2±7.3**
6.3±0.8**
与WKY组比较：**P<0.01；与SHRs组比较：△ △P<0.01
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2.2 血浆、肺组织醛固酮含量的变化 附表显示，自发性高血压大鼠(SHR组和SHRs组)血浆及肺组织醛固酮含量均明显高于正常对照组(WKY组)，差异有显著性意义(P<0.01)。SHRs组比SHR组稍高,但差异无显著性。
2.3 肺组织胶原含量的变化 结果发现，SHR组肺胶原含量明显高于WKY组和SHRs 组(均P<0.01)，SHRs组显著高于WKY组(P<0.01)，见附表。
3 讨论
高血压左心室肥厚心肌间质纤维化已引起人们的广泛重视。高血压时心肌细胞间质胶原支架增生，心肌纤维化，同时伴有心肌组织醛固酮含量增加[4]。但是否同时存在肺纤维化及与肺组织醛固酮的关系，尚未见这方面的报道。本实验发现自发性高血压大鼠(SHR)肺组织醛固酮、胶原含量增加，肺纤维化。提示临床上在治疗高血压心肌纤维化的同时需注意肺纤维化的防治。
, 百拇医药
肾素-血管紧张素-醛固酮系统(renin-angioten-
sin-aldosterone system，RAAS)参与高血压病的发生与发展，肺组织局部也存在着RAAS。肺内含有丰富的血管紧张素转换酶，可局部产生血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ，AngⅡ),AngⅡ使醛固酮分泌增加。醛固酮通过胞质Ⅰ型类皮质激素受体使成纤维细胞合成胶原增加[5]，从而使肺胶原含量增加，肺纤维化。
安体舒通(Antisterone，药用名螺内酯Spirono-lactone)的化学结构与醛固酮相似，可能与醛固酮相互竞争与Ⅰ型类皮质激素受体结合，从而抑制成纤维细胞合成胶原。本实验结果证明，经安体舒通处理后的SHR(SHRs 组)肺胶原含量明显低于未予安体舒通处理的SHR(SHR组)，表明安体舒通确实有抑制肺胶原合成(本实验抑制率22.2%)、抗肺纤维化的作用，从而也进一步说明肺纤维化与肺组织醛固酮含量升高有关。
, http://www.100md.com
安体舒通系人工合成的慢速低效保钾利尿药，其来源丰富，价格低廉，副作用少，可直接口服，除了有降血压、抗心肌纤维化的明显作用外，我们的研究还发现其有抗肺纤维化的作用，建议临床上进一步使用与研究。本实验还提示，找寻与醛固酮结构类似的物质，将是筛选防治肺纤维化药物的方向之一，有关实验正在进行中。
作者简介：陈秀芳(1972-)，女，浙江永嘉人，助教，医学士(正在攻读在职硕士学位)，1998年赴浙大生命科学学院进修。
参考文献
[1] 胡晓晟，吕俊升，黄蓉蓉.卡托普利对自发性高血压大鼠心肌纤维化的影响 [J].实用心脑肺血管病杂志，1997,5(2):1-2.
[2] Lowry OH, Rosebrough NJ, Farr AL, et al. Protein measurement with the folin phenol reagent [J]. J Biol Chem, 1951, 193:265-275.
, 百拇医药
[3] BergmanⅠ, Loxley R. Two improved and simplified methods for the spectrophotometric determination of hydroxyproline [J]. Anal Chem, 1963, 35:1961-1965.
[4] 杜宏，李俭春，李辉.自发性高血压大鼠心肌胶原增生与心肌局部血管紧张素Ⅱ及醛固酮[J].高血压杂志，1997,5(1):18-19.
[5] Brilla CG, Zhou G, Matsubara L, et al. Collagen metabolism in cultured adult rat cardiac fibroblasts: response to angiotensin Ⅱ and aldosterone [J]. J Mol Cell Cardial, 1994, 26(7):809.
收稿日期：1999-11-05
修回日期：1999-12-21, 百拇医药
参见：首页 > 医疗版 > 疾病专题 > 内分泌科 > 肾上腺疾病 > 原发性醛固酮增多症