急性低氧合油酸性大鼠肺损伤模型的复制及已酮可可碱的治疗作用*
作者：崔社怀 郭先健
单位：崔社怀 第三军医大学西南医院呼吸科(重庆400038)；郭先健 第三军医大学新桥医院呼吸病研究所
关键词：
急性低氧合油酸性大鼠肺损伤模型的复制 及已酮可可碱的治疗作用
急性低氧状态下的急性肺损伤发病率高，病情严重，其机理尚不清楚。本研究旨在建立急性低氧状态下急性肺损伤动物模型，籍以探讨急性低氧条件下，急性肺损伤的病理生理特征及其机理。
方 法
分别参照周照年和朱运奎等方法并加以改进复制急性低氧动物模型，在此基础上按Dickey的方法略加改动，复制大鼠油酸急性肺损伤模型。实验用雄性Wistar大鼠，体重250±30g。步骤：每次3～4只大鼠放入小动物低压仓内，自由饮水、匀速减压至模型海拔6000m高度(PB 47.3 kPa)，减压12h。然后用3%戊巴比妥钠腹腔注射麻醉，行气管切开、插管、颈总动脉和颈外静脉插管。术毕大鼠吸入9.78% O2混合气体，使其低氧条件与减压仓内相同。30min后开始实验。抽对照血气后，立即从上腔静脉注入油酸，剂量为10～15μL/100 g体重，15min注完。对照组注入等量的生理盐水。
, 百拇医药
实验分为(1)对照组：10只。实验条件和手术过程同上，上腔静脉注入生理盐水，剂量为10～15μL/100 g。(2)油酸组(oleic acid, OA)：40只，上腔静脉注入油酸10～15μL/100g，观察时间为1h、2h、3h、4h.每一时相点处死10只动物。留样品备测。(3)油酸+己酮可可碱(OA+PTX)组：40只，动物注入油酸后，立即给予己酮可可碱(上海十六制药厂，含量98.77%)，首剂为2mg/100g，维持剂量为1 mg·100 g-1·h-1，观察时间和样品的留取同油酸组。
血气分析：大鼠麻醉后，妥善固定，吸入9.78% O2混合气体30min后，在隔绝空气条件下抽取肝素抗凝血，以IL 1303(美国产)血气分析仪测定PaO2。
肺组织取材和病理检查：在设计的时点放血活杀动物，每组取6只大鼠，固定取右下肺膈叶，质量分数为10%福尔马林固定，常规石蜡包埋切片，HE染色，光学显微镜检查其病理变化。肺组织湿/干重比测定：将双肺取下，除去脂肪、肺外大血管和气管后，用滤纸吸干肺表面血迹，称湿重，90℃ 72h烤干后立即称干重并计算湿/干重比。采用本校统计学教研室Scheffe程序包，对实验数据进行方差分析。
, 百拇医药
结 果
由上腔静脉注入油酸10μL/100g后，立即出现呼吸加快，频率达130次/min，呼吸窘迫，口唇发绀，与注油酸前比，呼吸频率增加非常显著(P<0.01)。
Group
n
0h
1h
2h
3h
4h
OA
40
6.56±1.15
, 百拇医药
5.49±0.55*
5.42±0.5*
5.38±0.67*
5.66±0.51*
OA+PTX
40
6.25±0.51
5.06±0.34*
5.14±0.14*
5.18±0.11*
, 百拇医药
5.43±0.77*
Contorl
10
6.56±0.94
6.63±0.86
6.59±0.24
6.71±0.76
6.63±0.18
*P<0.05,vs control group;OA:oleic acid;PTX:pentoxifyline 表2 三组大鼠肺湿/干比值变化
Tab 2 The changes of wet /dry ratio of lung in oleic acid induced lung injury in rats(
+s)
, 百拇医药
Group
n
0h
1h
2h
3h
4h
OA
15
2.36±0.22
2.89±0.21
2.93±0.24
4.16±0.23*
, 百拇医药
5.48±0.30*
OA+PTX
15
2.40±0.19
2.55±0.20
3.67±0.20
3.77±0.22*
4.50±0.28*
Contorl
6
2.82±0.23
, http://www.100md.com
2.33±0.21
2.40±0.18
2.38±0.22
2.42±0.16
*P<0.05，**P<0.01, vs control group
肺水含量(温/干比)油酸组、油酸+已酮可可碱组肺水含量增加显著大于对照组，随时间的处长而加重(P<0.01)(表2)。油酸+已酮可可碱组肺水含量显著低于油酸组(P<0.05)。说明已酮可可碱可减轻急性低氧油酸肺损伤的肺水肿。血气分析结果表明，油酸组伤后各时点PaO2与伤前比均显著降低(P<0.05),3h达最低值,此后稍有回升,但始终未恢复到对照水平.油酸+已酮可可碱组PaO2无明显改善,与伤前比仍显著降低,并低于对照组([P<0.05)。各组PaO2伤前和伤后以及组间比较均无显著性差异,(P<0.05)。病理检查结果青蛙,大体充血、水肿，肺表面见较多渗出，散在较多暗红色斑片，伴有多量点片血。肺剖面见较多粉红色泡沫状液体，镜检可见，注入油酸后1~4肺泡腔含有大量水肿液，肺泡隔增宽，血管周围水肿套形成，中性白细胞浸润。油酸+已酮可可碱组病理变化较油酸组轻。
, 百拇医药
讨 论
结果提示把小动物入入减丈夫仓进行减压，能反映高海拔急生低氧状况。在此基础上，从插管的上腔静脉直接注入油酸，达到剂量准确，反应迅速，又防止了油酸注射中的外漏，使模型复制成功率达100%。从血气分析、病理改变、肺水含量等结果表明，急性低氧油酸急生肺损伤模型病情严重，病理改变明显，肺水含量增加，接近于临床急性肺损伤的改变。
尽管用油酸复制急性肺损伤模型并非十分理想，但油酸所致的肺部病理生理改变，及其损伤后的急生反应过程与临床颇为相似。因高原急性肺损伤特点之一是低氧所致的肺损伤呈现为高压力和高通透性非心源性肺水肿，这正是本实验的目的所在。
油酸急性肺损伤模型复制的关键是，准确注入一定量的油酸，因綦主入量很小，不易准确挖掘注入量。为此，国内外一些研究者采用盐水、白蛋白、已酮等使油酸乳化或分次给予。但这些措施影响了油酸急性肺损伤模型的病变程度。故我们通过颈外静脉插管的办法，准确注入油酸。结果青蛙，大鼠注入油酸后，呼吸加快非常显著，窘迫，口唇发绀，严重者口鼻有粉红色泡沫液体溢出。血气示PaO2显著降低，最低达4.32kPa。病理检查所见与文献报道的实验急性肺损伤模型基本相符。
采用已酮可可碱对急性低氧油酸肺损伤进行治疗，减轻血管外肺含水量和肺水肿，减少炎细胞浸润。表明已酮可可碱对急性低氧油酸肺损伤有较好的治疗作用。
*国家自然科学基金资助(编号 39670336)
收稿日期：1997年6月6日
修稿日期：1998年3月3日, http://www.100md.com
单位：崔社怀 第三军医大学西南医院呼吸科(重庆400038)；郭先健 第三军医大学新桥医院呼吸病研究所
关键词：
急性低氧合油酸性大鼠肺损伤模型的复制 及已酮可可碱的治疗作用
急性低氧状态下的急性肺损伤发病率高，病情严重，其机理尚不清楚。本研究旨在建立急性低氧状态下急性肺损伤动物模型，籍以探讨急性低氧条件下，急性肺损伤的病理生理特征及其机理。
方 法
分别参照周照年和朱运奎等方法并加以改进复制急性低氧动物模型，在此基础上按Dickey的方法略加改动，复制大鼠油酸急性肺损伤模型。实验用雄性Wistar大鼠，体重250±30g。步骤：每次3～4只大鼠放入小动物低压仓内，自由饮水、匀速减压至模型海拔6000m高度(PB 47.3 kPa)，减压12h。然后用3%戊巴比妥钠腹腔注射麻醉，行气管切开、插管、颈总动脉和颈外静脉插管。术毕大鼠吸入9.78% O2混合气体，使其低氧条件与减压仓内相同。30min后开始实验。抽对照血气后，立即从上腔静脉注入油酸，剂量为10～15μL/100 g体重，15min注完。对照组注入等量的生理盐水。
, 百拇医药
实验分为(1)对照组：10只。实验条件和手术过程同上，上腔静脉注入生理盐水，剂量为10～15μL/100 g。(2)油酸组(oleic acid, OA)：40只，上腔静脉注入油酸10～15μL/100g，观察时间为1h、2h、3h、4h.每一时相点处死10只动物。留样品备测。(3)油酸+己酮可可碱(OA+PTX)组：40只，动物注入油酸后，立即给予己酮可可碱(上海十六制药厂，含量98.77%)，首剂为2mg/100g，维持剂量为1 mg·100 g-1·h-1，观察时间和样品的留取同油酸组。
血气分析：大鼠麻醉后，妥善固定，吸入9.78% O2混合气体30min后，在隔绝空气条件下抽取肝素抗凝血，以IL 1303(美国产)血气分析仪测定PaO2。
肺组织取材和病理检查：在设计的时点放血活杀动物，每组取6只大鼠，固定取右下肺膈叶，质量分数为10%福尔马林固定，常规石蜡包埋切片，HE染色，光学显微镜检查其病理变化。肺组织湿/干重比测定：将双肺取下，除去脂肪、肺外大血管和气管后，用滤纸吸干肺表面血迹，称湿重，90℃ 72h烤干后立即称干重并计算湿/干重比。采用本校统计学教研室Scheffe程序包，对实验数据进行方差分析。
, 百拇医药
结 果
由上腔静脉注入油酸10μL/100g后，立即出现呼吸加快，频率达130次/min，呼吸窘迫，口唇发绀，与注油酸前比，呼吸频率增加非常显著(P<0.01)。
Group
n
0h
1h
2h
3h
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OA
40
6.56±1.15
, 百拇医药
5.49±0.55*
5.42±0.5*
5.38±0.67*
5.66±0.51*
OA+PTX
40
6.25±0.51
5.06±0.34*
5.14±0.14*
5.18±0.11*
, 百拇医药
5.43±0.77*
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6.56±0.94
6.63±0.86
6.59±0.24
6.71±0.76
6.63±0.18
*P<0.05,vs control group;OA:oleic acid;PTX:pentoxifyline 表2 三组大鼠肺湿/干比值变化
Tab 2 The changes of wet /dry ratio of lung in oleic acid induced lung injury in rats(
+s), 百拇医药
Group
n
0h
1h
2h
3h
4h
OA
15
2.36±0.22
2.89±0.21
2.93±0.24
4.16±0.23*
, 百拇医药
5.48±0.30*
OA+PTX
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2.40±0.19
2.55±0.20
3.67±0.20
3.77±0.22*
4.50±0.28*
Contorl
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2.82±0.23
, http://www.100md.com
2.33±0.21
2.40±0.18
2.38±0.22
2.42±0.16
*P<0.05，**P<0.01, vs control group
肺水含量(温/干比)油酸组、油酸+已酮可可碱组肺水含量增加显著大于对照组，随时间的处长而加重(P<0.01)(表2)。油酸+已酮可可碱组肺水含量显著低于油酸组(P<0.05)。说明已酮可可碱可减轻急性低氧油酸肺损伤的肺水肿。血气分析结果表明，油酸组伤后各时点PaO2与伤前比均显著降低(P<0.05),3h达最低值,此后稍有回升,但始终未恢复到对照水平.油酸+已酮可可碱组PaO2无明显改善,与伤前比仍显著降低,并低于对照组([P<0.05)。各组PaO2伤前和伤后以及组间比较均无显著性差异,(P<0.05)。病理检查结果青蛙,大体充血、水肿，肺表面见较多渗出，散在较多暗红色斑片，伴有多量点片血。肺剖面见较多粉红色泡沫状液体，镜检可见，注入油酸后1~4肺泡腔含有大量水肿液，肺泡隔增宽，血管周围水肿套形成，中性白细胞浸润。油酸+已酮可可碱组病理变化较油酸组轻。
, 百拇医药
讨 论
结果提示把小动物入入减丈夫仓进行减压，能反映高海拔急生低氧状况。在此基础上，从插管的上腔静脉直接注入油酸，达到剂量准确，反应迅速，又防止了油酸注射中的外漏，使模型复制成功率达100%。从血气分析、病理改变、肺水含量等结果表明，急性低氧油酸急生肺损伤模型病情严重，病理改变明显，肺水含量增加，接近于临床急性肺损伤的改变。
尽管用油酸复制急性肺损伤模型并非十分理想，但油酸所致的肺部病理生理改变，及其损伤后的急生反应过程与临床颇为相似。因高原急性肺损伤特点之一是低氧所致的肺损伤呈现为高压力和高通透性非心源性肺水肿，这正是本实验的目的所在。
油酸急性肺损伤模型复制的关键是，准确注入一定量的油酸，因綦主入量很小，不易准确挖掘注入量。为此，国内外一些研究者采用盐水、白蛋白、已酮等使油酸乳化或分次给予。但这些措施影响了油酸急性肺损伤模型的病变程度。故我们通过颈外静脉插管的办法，准确注入油酸。结果青蛙，大鼠注入油酸后，呼吸加快非常显著，窘迫，口唇发绀，严重者口鼻有粉红色泡沫液体溢出。血气示PaO2显著降低，最低达4.32kPa。病理检查所见与文献报道的实验急性肺损伤模型基本相符。
采用已酮可可碱对急性低氧油酸肺损伤进行治疗，减轻血管外肺含水量和肺水肿，减少炎细胞浸润。表明已酮可可碱对急性低氧油酸肺损伤有较好的治疗作用。
*国家自然科学基金资助(编号 39670336)
收稿日期：1997年6月6日
修稿日期：1998年3月3日, http://www.100md.com