抗胸腺细胞血清法诱发大鼠系膜增殖性肾炎模型河北医科大学基础医学研究所(石家庄 050017)
作者：刘静芳 温进坤 严霞 段惠军
单位：
关键词：
中国病理生理杂志990328 为了研究系膜增殖性肾炎的发病机理，国内外学者已建立了由抗Thy-1抗体诱发的大鼠系膜增殖性肾炎模型[1，2]。但是，该类模型均以系膜溶解为主要病理改变，肾小球系膜细胞(mesangium cell,MC)增殖较轻，而且是一个“自限性的增殖模型”。另外，抗Thy-1抗体价格昂贵，自制该抗体难度很大，也限制了该模型的应用。本文详细报道了用自制抗大鼠胸腺细胞血清(ATS)诱发系膜增殖性肾炎模型的方法。该模型在组织形态学上与临床上该疾病的病理改变过程一致，适合于该疾病的实验观察及治疗试验方面的研究。
材料与方法
(一)材料：雄性健康的SD大鼠，体重300 g左右，4～6周龄；雄性健康的青紫兰兔，体重2.5 kg左右。均购于河北省实验动物中心。琼脂糖凝胶系Serva公司产品，福氏完全佐剂由河北医科大学吕占军教授提供，尿肌酐及尿旦白试剂盒购于石家庄化学试剂公司，其它试剂均为国产及进口分析纯。
, 百拇医药
(二)大鼠胸腺细胞免疫抗原液的制备：常规摘取大鼠胸腺，去除其表面的淋巴结和血管后，置200目不锈钢网筛上，用解剖针轻轻划破胸腺游离出胸腺细
河北省自然科学基金资助
胞，并随时用PBS冲洗，收集胸腺细胞悬液，经1 000 r/min，离心10 min后得胸腺细胞沉淀块，重新用PBS悬浮至1×108～2×108个细胞/mL。然后，按1∶2(v/v)比例混合胸腺细胞悬液和福氏完全佐剂，充分混匀制成大鼠胸腺细胞免疫抗原液。
2.抗大鼠胸腺细胞血清制备：将含有5×107个胸腺细胞的福氏完全佐剂背部皮下多点注射于青紫兰兔，2～3周后，耳缘静脉注射1×107个胸腺细胞，7 d后收集兔血清。用免疫扩散法和红细胞凝集试验测抗胸腺细胞血清效价分别为1∶32和1∶120。抗胸腺细胞血清(ATS)于56℃，30 min灭活后，分别用同个体大鼠红细胞和肝细胞膜吸附以去除非特异性抗体。红细胞吸附实验：按1∶1(v/v)比例混合红细胞和ATS，4℃吸附30 min后离心(1 000r/min,30 min)1次。然后，按1∶10(v/v)比例混合红细胞和ATS，同上述吸附离心，并重复此过程至红细胞不凝集。肝细胞膜吸附实验：按1∶10(v/v)比例混合肝细胞膜和ATS，37℃，吸附30 min后离心，重复吸附1～2次即可。分装所得ATS，-20℃保存备用。
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(三)系膜增殖性肾炎模型的制备：将SD大鼠随机分为两组，即模型组和对照组。模型组一次性尾静脉注射ATS 2mL，对照组注射2 mLPBS。于注射后3 h，24 h及3 d～3个月不等时间取肾脏作常规切片，PAS染色，光镜检查。每天检测尿肌酐和尿蛋白。
(四)尿肌酐和尿蛋白测定：尿肌酐测定：采用二乙酰-肟法，按试剂盒说明书进行。尿蛋白测定：采用考马斯亮兰染料结合方法，牛血清白蛋白作为标准蛋白。
结果与讨论
注射ATS 3 h后，MC核固缩，伴有碎裂和少量白细胞浸润。24 h后部分MC消失，系膜溶解，少量白细胞浸润。从第3 d开始MC增殖，肾小球扩大。第5 d MC明显增殖，系膜基质增多。第6～10周仍以MC显著增殖，系膜基质明显增多为主要病变。10周之后，MC增殖程度逐渐减弱；系膜基质增多，有局灶性肾小球硬化。注射ATS 24 h后出现尿蛋白，5～7d达到高峰之后，逐渐下降，第3周后减少至正常水平。尿肌酐无明显变化。
, 百拇医药
本文阐述的ATS制备方法简便，用ATS诱发系膜增生殖性肾炎模型成功率高，可达100%。ATS诱发的大鼠实验模型以MC增殖和系膜基质增多为主要病理改变。而且病变过程持久，一般于给药后第10周仍有显著的MC增殖及系膜基质增多，并伴有局灶性肾小球硬化。该模型在组织形态上接近临床系膜增殖性肾炎的病理改变过程。本文为深入研究系膜增殖性肾炎发病机理及治疗试验提供了良好的实验模型。
参考文献
1 刘志虹，黎磊石，杨俊伟等.抗Thy-1抗体与炎症因子诱发的系膜增殖性肾炎模型.中华肾脏病杂志，1993， 91：96.
2 Yamanaka N, Ishizaki M. Anti-thymocyte antibody induced mesangiolytic nephritis. In: Hatano M.ed. Nephrology. Tokyo：Springer-Verlag, 1991.1004.
1997年7月9日收稿，1997年12月24日修回, 百拇医药
单位：
关键词：
中国病理生理杂志990328 为了研究系膜增殖性肾炎的发病机理，国内外学者已建立了由抗Thy-1抗体诱发的大鼠系膜增殖性肾炎模型[1，2]。但是，该类模型均以系膜溶解为主要病理改变，肾小球系膜细胞(mesangium cell,MC)增殖较轻，而且是一个“自限性的增殖模型”。另外，抗Thy-1抗体价格昂贵，自制该抗体难度很大，也限制了该模型的应用。本文详细报道了用自制抗大鼠胸腺细胞血清(ATS)诱发系膜增殖性肾炎模型的方法。该模型在组织形态学上与临床上该疾病的病理改变过程一致，适合于该疾病的实验观察及治疗试验方面的研究。
材料与方法
(一)材料：雄性健康的SD大鼠，体重300 g左右，4～6周龄；雄性健康的青紫兰兔，体重2.5 kg左右。均购于河北省实验动物中心。琼脂糖凝胶系Serva公司产品，福氏完全佐剂由河北医科大学吕占军教授提供，尿肌酐及尿旦白试剂盒购于石家庄化学试剂公司，其它试剂均为国产及进口分析纯。
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(二)大鼠胸腺细胞免疫抗原液的制备：常规摘取大鼠胸腺，去除其表面的淋巴结和血管后，置200目不锈钢网筛上，用解剖针轻轻划破胸腺游离出胸腺细
河北省自然科学基金资助
胞，并随时用PBS冲洗，收集胸腺细胞悬液，经1 000 r/min，离心10 min后得胸腺细胞沉淀块，重新用PBS悬浮至1×108～2×108个细胞/mL。然后，按1∶2(v/v)比例混合胸腺细胞悬液和福氏完全佐剂，充分混匀制成大鼠胸腺细胞免疫抗原液。
2.抗大鼠胸腺细胞血清制备：将含有5×107个胸腺细胞的福氏完全佐剂背部皮下多点注射于青紫兰兔，2～3周后，耳缘静脉注射1×107个胸腺细胞，7 d后收集兔血清。用免疫扩散法和红细胞凝集试验测抗胸腺细胞血清效价分别为1∶32和1∶120。抗胸腺细胞血清(ATS)于56℃，30 min灭活后，分别用同个体大鼠红细胞和肝细胞膜吸附以去除非特异性抗体。红细胞吸附实验：按1∶1(v/v)比例混合红细胞和ATS，4℃吸附30 min后离心(1 000r/min,30 min)1次。然后，按1∶10(v/v)比例混合红细胞和ATS，同上述吸附离心，并重复此过程至红细胞不凝集。肝细胞膜吸附实验：按1∶10(v/v)比例混合肝细胞膜和ATS，37℃，吸附30 min后离心，重复吸附1～2次即可。分装所得ATS，-20℃保存备用。
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(三)系膜增殖性肾炎模型的制备：将SD大鼠随机分为两组，即模型组和对照组。模型组一次性尾静脉注射ATS 2mL，对照组注射2 mLPBS。于注射后3 h，24 h及3 d～3个月不等时间取肾脏作常规切片，PAS染色，光镜检查。每天检测尿肌酐和尿蛋白。
(四)尿肌酐和尿蛋白测定：尿肌酐测定：采用二乙酰-肟法，按试剂盒说明书进行。尿蛋白测定：采用考马斯亮兰染料结合方法，牛血清白蛋白作为标准蛋白。
结果与讨论
注射ATS 3 h后，MC核固缩，伴有碎裂和少量白细胞浸润。24 h后部分MC消失，系膜溶解，少量白细胞浸润。从第3 d开始MC增殖，肾小球扩大。第5 d MC明显增殖，系膜基质增多。第6～10周仍以MC显著增殖，系膜基质明显增多为主要病变。10周之后，MC增殖程度逐渐减弱；系膜基质增多，有局灶性肾小球硬化。注射ATS 24 h后出现尿蛋白，5～7d达到高峰之后，逐渐下降，第3周后减少至正常水平。尿肌酐无明显变化。
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本文阐述的ATS制备方法简便，用ATS诱发系膜增生殖性肾炎模型成功率高，可达100%。ATS诱发的大鼠实验模型以MC增殖和系膜基质增多为主要病理改变。而且病变过程持久，一般于给药后第10周仍有显著的MC增殖及系膜基质增多，并伴有局灶性肾小球硬化。该模型在组织形态上接近临床系膜增殖性肾炎的病理改变过程。本文为深入研究系膜增殖性肾炎发病机理及治疗试验提供了良好的实验模型。
参考文献
1 刘志虹，黎磊石，杨俊伟等.抗Thy-1抗体与炎症因子诱发的系膜增殖性肾炎模型.中华肾脏病杂志，1993， 91：96.
2 Yamanaka N, Ishizaki M. Anti-thymocyte antibody induced mesangiolytic nephritis. In: Hatano M.ed. Nephrology. Tokyo：Springer-Verlag, 1991.1004.
1997年7月9日收稿，1997年12月24日修回, 百拇医药