ETB受体激活对猪冠状动脉阻力血管内径的影响
作者：
单位：张立克 首都医科大学病理生理学教研室 (北京 100054)；Sandeep Dube John M Canty Jr美国纽约州立布法罗大学 (布法罗 NY14214)
关键词：内皮缩血管肽类；冠状血管；血管阻力
ETB受体激活对猪冠状动脉阻力血管内径的影响 摘 要 目的：观察ETB受体激活对猪冠状动脉阻力血管有何影响。方法：采用电视显微镜观察离体猪冠状动脉阻力血管内径。实验分为3组。各组分别在对照观察、内皮破坏或10-5mol/L L-N-硝基精氨酸甲酯(L-N-nitro-argining methyL ester,L-NAME)处理后，给予内皮素B受体(endothelin-B receptor,ETB)激活剂sarafotoxin 6c(SF6c),记录浓度-反应曲线。结果：给予SF6c后，对照组血管呈现浓度依赖性轻度舒张及轻度收缩反应：内皮破坏组及一氧化氮合成酶抑制组仅表现为浓度依赖性收缩反应。结论：ETB受体激活可对冠状动脉阻力血管产生收缩舒张双重作用；其中舒张作用依赖内皮存在和一氧化氮的产生。
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Endothelin-B receptor stimulation in porcine coronary resistance arteries
ZHANG Li-Ke, Sandeep Dube*,John M Canty Jr*
Department of Pathophysiology,Capital University of Medical Sciences, Beijing(100054)
University at Buffalo, Buffalo (NY 14214)
Abstract AIM：To Study the relative role of ETB receptor stimulation in porcine coronary resistance arteries.METHODS：Isolated porcine coronary resistance arteries were studied using in vitro videomicroscopy. Dose-response curves to the ETB agonist sarafotoxin 6c (SF6c) were determined under control conditions,after endothelial denudation or after 10-5 mol/L L-NAME.RESULTS：In control vessels,SF6c caused a weak vasodilation that followed a constriction. After endothelial denudation or blocking NO synthase with L-NAME, however, the vasodilation effects of SF6c did not appear except the dose-dependent constriction.CONCLUSION：The weak vasodilation and vasoconstriction can be induced by endothelin-B receptor stimulation in coronary resistance vessels, and the effect of relaxation of coronary resistance arteries due to ETB receptor stimulation is dependent on endothelium and mediated by NO.
, 百拇医药
MeSH Endothelins; Coronary vessels; Vascular resistance
内皮素(endothelin,ET)是一种重要的血管活性多肽，它通过内皮素受体发挥作用。目前已知内皮素至少有两种受体，ETA和ETB受体。过去一直认为ETB受体激活主要引起内皮依赖性血管舒张。然而近期有人报道ETB受体也参于某某些血管的收缩。目前已知，冠状动脉上也存在ETB受体[1]，Bax等[2]和Teerlink等[3]分别报道高浓度ETB受体激动剂可引起冠状动脉大血管的收缩。但对冠状动脉阻力血管作用如何，尚不清楚。本工作给予猪冠状动脉阻力血管(<200μm)以ETB受体 激动剂sarafotoxin 6c (SF6c)，观察ETB受体在冠状动脉阻力血管中的作用。
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材料与方法
动物采用24只10 kg左右约克夏猪，性别不拘。戊巴比妥纳(15 mg/kg iv)麻醉，在人工呼吸情况下，开胸取出心脏，迅速置4℃冷生理盐水中。按照Duling[4]等的方法，自冠脉前降支远端游离出微血管，固定在微血管灌流装置上。使用HEPES缓冲液灌流，在恒温(37℃)、恒压(6.6 kPa)条件下，使用电视显微镜及分析系统测量微血管内径。微血管内径大小有数字显示，并用八道生理记录仪记录。
微血管置37℃环境1 h并自行收缩后，分为3组：(1)对照组(CON组，n=8);(2)内皮破坏组(DE组，n=8，采用空气与生理盐水交替注射的方法破坏内皮)；(3)一氧化氮合成酶抑制组(L-NAME组，n=8,给予10-5mol/L L-NAME)。上述处理后，记录SF6c浓度-反应曲线(10-13～10-9mol/L)。给予缓激肽(bradykinin,BK 10-7mol/L)以判断内皮功能状况：给予无钙缓冲液和硝普钠(sodium nitroprusside,SNP 10-4 mol/L)使血管充分舒张。本实验所使用药品均购自Sigma公司。
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微血管对SF6c的反应采用血管内径舒张%表示：
血管内径舒张%=(D-DI)/(DSNP-DI)×100%
(D：给予不同浓度SF6c后血管内径：DI：给予SF6c前血管内径；DSNP：给予SNP后血管内径。)
数据用均数±标准差(
±s)表示；用t检验判断均数差异的显著性。
结果
冠状动脉阻力血管置37℃环境1 h后自行收缩，内径从(185±8)μm到(124±5)μm。
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给予缓激肽后血管变化见图1，内皮破坏组无明显反应，表明内皮已破坏。SF6c浓度-反应曲线见图2，对照组在SF6c浓度为10-13 mol/L至10-11mol/L时，呈现轻度舒张反应，随之收缩。内皮破坏组未出现上述舒张反应，仅见轻度收缩，在SF6c浓度为10-11 mol/L时血管内径舒张%明显低于对照组(-3.1±5.2)% vs(13.4±6.5)%，P<0.05。而一氧化氮合成酶抑制组于SF6c浓度为10-11 mol/L起，出现明显收缩，在SF6c浓度为10-11 mol/L至10-9 mol/L血管内径舒张%也明显低于对照组(P<0.05)。
讨论
自从ETB受体被确定后，人们一直认为它存在于内皮细胞上，它的激活引起血管内皮依赖性舒张。但近年工作证实，在某些血管平滑肌(例如：兔隐静脉，肺动脉等处)也存在ETB受体，其作用是介导这些血管的收缩[5]。在冠状动脉微血管上ETB受体有何作用尚不清楚。
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Sarafotoxin 6c是公认的ETB受体激活剂[5]。本实验给冠状动脉微血管以sarafotoxin 6c,引起轻度的剂量依赖性舒张，随之(在10-11 mol/L时)轻度收缩。指出在冠状动脉微血管上也存在着ETB受体。ETB受体激活，对冠状动脉微血管有收缩舒张双重作用。
Fig 1 Reaction of coronary resistance arteries to BK (
±s n=8) **P<0.01，vs control 图1 冠脉阻力血管对缓激肽的反应
, 百拇医药
Fig 2 Reaction of coronary resistance arteries to SF6c (
±s n=8) *P<0.05，vs control 图2 冠脉阻力血管对SF6c的反应
给予内皮破坏的冠状动脉微血管sarafotoxin 6c，舒血管作用消失，仅存收缩反应。表明sarafotoxin 6c引起的舒张冠状动脉微血管作用是内皮依赖性的。这提示冠状动脉微血管内皮细胞上存在ETB受体，参与舒张冠状动脉微血管作用。而sarafotoxin 6c所致的收缩冠状动脉微血管作用与内皮无关，提示冠状动脉微血管平滑肌上可能存在与收缩冠状动脉微血管有关的ETB受体。
有人指出，ETB受体激活引起的血管内皮依赖性舒张与NO的释放有关[6]。本实验采用L-NAME抑制NOS后，srafotoxin 6c引起的舒张冠状动脉微血管作用消失，只表现出剂量依赖性缩血管作用。这指出在冠状动脉微血管上，sarafotoxin 6c引起的舒张作用，也与NO有关，而收缩冠状动脉微血管作用则不依赖NO的存在。
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参考文献
1 Wang QD,Li XS, Pernow J. Characterization of ET-1 induced vascular effects in the rat heart by using endothelin receptor antagonists.Eur J Pharmacol,1994,271: 25.
2 Bax WA, Aghai Z,Van Tricht CLJ, et al.Different endothelin receptors involved in ET-l and sarafotoxin s6b induced contractions of the human isolated coronary artery.Br J Pharmacol,1994,113: 1471.
3 Teerlink JR,Breu V, Sprecher U, et al. Portent vasoconstriction mediated by endothelin ETB receptor in canine coronary arteries.Circ Res,1994,74: 105.
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4 Duling BR,Gove RW, Dacey RG, et al. Methods for isolation,cannulation ,and in vitro study of single microvessels.Am J Physiol,1981,241:H108.
5 Rubanyi GM,Polokoff MA. Endothelins:molecular biology,biochemistry, pharmacology, physiology,and pathophysiology.Pharmacol Rev,1994,46:325.
6 Moreland S,McMullen DM,Delaney CL,et al.Venous smooth muscle contains vasoconstrictor ETB-like receptor.Biochem Biophys Res Commun,1992,184:100.
1998年6月1日收稿，1998年11月11日修回, 百拇医药
单位：张立克 首都医科大学病理生理学教研室 (北京 100054)；Sandeep Dube John M Canty Jr美国纽约州立布法罗大学 (布法罗 NY14214)
关键词：内皮缩血管肽类；冠状血管；血管阻力
ETB受体激活对猪冠状动脉阻力血管内径的影响 摘 要 目的：观察ETB受体激活对猪冠状动脉阻力血管有何影响。方法：采用电视显微镜观察离体猪冠状动脉阻力血管内径。实验分为3组。各组分别在对照观察、内皮破坏或10-5mol/L L-N-硝基精氨酸甲酯(L-N-nitro-argining methyL ester,L-NAME)处理后，给予内皮素B受体(endothelin-B receptor,ETB)激活剂sarafotoxin 6c(SF6c),记录浓度-反应曲线。结果：给予SF6c后，对照组血管呈现浓度依赖性轻度舒张及轻度收缩反应：内皮破坏组及一氧化氮合成酶抑制组仅表现为浓度依赖性收缩反应。结论：ETB受体激活可对冠状动脉阻力血管产生收缩舒张双重作用；其中舒张作用依赖内皮存在和一氧化氮的产生。
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Endothelin-B receptor stimulation in porcine coronary resistance arteries
ZHANG Li-Ke, Sandeep Dube*,John M Canty Jr*
Department of Pathophysiology,Capital University of Medical Sciences, Beijing(100054)
University at Buffalo, Buffalo (NY 14214)
Abstract AIM：To Study the relative role of ETB receptor stimulation in porcine coronary resistance arteries.METHODS：Isolated porcine coronary resistance arteries were studied using in vitro videomicroscopy. Dose-response curves to the ETB agonist sarafotoxin 6c (SF6c) were determined under control conditions,after endothelial denudation or after 10-5 mol/L L-NAME.RESULTS：In control vessels,SF6c caused a weak vasodilation that followed a constriction. After endothelial denudation or blocking NO synthase with L-NAME, however, the vasodilation effects of SF6c did not appear except the dose-dependent constriction.CONCLUSION：The weak vasodilation and vasoconstriction can be induced by endothelin-B receptor stimulation in coronary resistance vessels, and the effect of relaxation of coronary resistance arteries due to ETB receptor stimulation is dependent on endothelium and mediated by NO.
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MeSH Endothelins; Coronary vessels; Vascular resistance
内皮素(endothelin,ET)是一种重要的血管活性多肽，它通过内皮素受体发挥作用。目前已知内皮素至少有两种受体，ETA和ETB受体。过去一直认为ETB受体激活主要引起内皮依赖性血管舒张。然而近期有人报道ETB受体也参于某某些血管的收缩。目前已知，冠状动脉上也存在ETB受体[1]，Bax等[2]和Teerlink等[3]分别报道高浓度ETB受体激动剂可引起冠状动脉大血管的收缩。但对冠状动脉阻力血管作用如何，尚不清楚。本工作给予猪冠状动脉阻力血管(<200μm)以ETB受体 激动剂sarafotoxin 6c (SF6c)，观察ETB受体在冠状动脉阻力血管中的作用。
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材料与方法
动物采用24只10 kg左右约克夏猪，性别不拘。戊巴比妥纳(15 mg/kg iv)麻醉，在人工呼吸情况下，开胸取出心脏，迅速置4℃冷生理盐水中。按照Duling[4]等的方法，自冠脉前降支远端游离出微血管，固定在微血管灌流装置上。使用HEPES缓冲液灌流，在恒温(37℃)、恒压(6.6 kPa)条件下，使用电视显微镜及分析系统测量微血管内径。微血管内径大小有数字显示，并用八道生理记录仪记录。
微血管置37℃环境1 h并自行收缩后，分为3组：(1)对照组(CON组，n=8);(2)内皮破坏组(DE组，n=8，采用空气与生理盐水交替注射的方法破坏内皮)；(3)一氧化氮合成酶抑制组(L-NAME组，n=8,给予10-5mol/L L-NAME)。上述处理后，记录SF6c浓度-反应曲线(10-13～10-9mol/L)。给予缓激肽(bradykinin,BK 10-7mol/L)以判断内皮功能状况：给予无钙缓冲液和硝普钠(sodium nitroprusside,SNP 10-4 mol/L)使血管充分舒张。本实验所使用药品均购自Sigma公司。
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微血管对SF6c的反应采用血管内径舒张%表示：
血管内径舒张%=(D-DI)/(DSNP-DI)×100%
(D：给予不同浓度SF6c后血管内径：DI：给予SF6c前血管内径；DSNP：给予SNP后血管内径。)
数据用均数±标准差(
±s)表示；用t检验判断均数差异的显著性。结果
冠状动脉阻力血管置37℃环境1 h后自行收缩，内径从(185±8)μm到(124±5)μm。
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给予缓激肽后血管变化见图1，内皮破坏组无明显反应，表明内皮已破坏。SF6c浓度-反应曲线见图2，对照组在SF6c浓度为10-13 mol/L至10-11mol/L时，呈现轻度舒张反应，随之收缩。内皮破坏组未出现上述舒张反应，仅见轻度收缩，在SF6c浓度为10-11 mol/L时血管内径舒张%明显低于对照组(-3.1±5.2)% vs(13.4±6.5)%，P<0.05。而一氧化氮合成酶抑制组于SF6c浓度为10-11 mol/L起，出现明显收缩，在SF6c浓度为10-11 mol/L至10-9 mol/L血管内径舒张%也明显低于对照组(P<0.05)。
讨论
自从ETB受体被确定后，人们一直认为它存在于内皮细胞上，它的激活引起血管内皮依赖性舒张。但近年工作证实，在某些血管平滑肌(例如：兔隐静脉，肺动脉等处)也存在ETB受体，其作用是介导这些血管的收缩[5]。在冠状动脉微血管上ETB受体有何作用尚不清楚。
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Sarafotoxin 6c是公认的ETB受体激活剂[5]。本实验给冠状动脉微血管以sarafotoxin 6c,引起轻度的剂量依赖性舒张，随之(在10-11 mol/L时)轻度收缩。指出在冠状动脉微血管上也存在着ETB受体。ETB受体激活，对冠状动脉微血管有收缩舒张双重作用。
Fig 1 Reaction of coronary resistance arteries to BK (
±s n=8) **P<0.01，vs control 图1 冠脉阻力血管对缓激肽的反应, 百拇医药
Fig 2 Reaction of coronary resistance arteries to SF6c (
±s n=8) *P<0.05，vs control 图2 冠脉阻力血管对SF6c的反应给予内皮破坏的冠状动脉微血管sarafotoxin 6c，舒血管作用消失，仅存收缩反应。表明sarafotoxin 6c引起的舒张冠状动脉微血管作用是内皮依赖性的。这提示冠状动脉微血管内皮细胞上存在ETB受体，参与舒张冠状动脉微血管作用。而sarafotoxin 6c所致的收缩冠状动脉微血管作用与内皮无关，提示冠状动脉微血管平滑肌上可能存在与收缩冠状动脉微血管有关的ETB受体。
有人指出，ETB受体激活引起的血管内皮依赖性舒张与NO的释放有关[6]。本实验采用L-NAME抑制NOS后，srafotoxin 6c引起的舒张冠状动脉微血管作用消失，只表现出剂量依赖性缩血管作用。这指出在冠状动脉微血管上，sarafotoxin 6c引起的舒张作用，也与NO有关，而收缩冠状动脉微血管作用则不依赖NO的存在。
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参考文献
1 Wang QD,Li XS, Pernow J. Characterization of ET-1 induced vascular effects in the rat heart by using endothelin receptor antagonists.Eur J Pharmacol,1994,271: 25.
2 Bax WA, Aghai Z,Van Tricht CLJ, et al.Different endothelin receptors involved in ET-l and sarafotoxin s6b induced contractions of the human isolated coronary artery.Br J Pharmacol,1994,113: 1471.
3 Teerlink JR,Breu V, Sprecher U, et al. Portent vasoconstriction mediated by endothelin ETB receptor in canine coronary arteries.Circ Res,1994,74: 105.
, http://www.100md.com
4 Duling BR,Gove RW, Dacey RG, et al. Methods for isolation,cannulation ,and in vitro study of single microvessels.Am J Physiol,1981,241:H108.
5 Rubanyi GM,Polokoff MA. Endothelins:molecular biology,biochemistry, pharmacology, physiology,and pathophysiology.Pharmacol Rev,1994,46:325.
6 Moreland S,McMullen DM,Delaney CL,et al.Venous smooth muscle contains vasoconstrictor ETB-like receptor.Biochem Biophys Res Commun,1992,184:100.
1998年6月1日收稿，1998年11月11日修回, 百拇医药