α-MSH对EGTA性发热效应及脑腹中隔AVP含量的影响
作者：胡巢凤 王彦平 李楚杰
单位：胡巢凤 暨南大学医学院；王彦平 病理生理教研室；李楚杰 发热研究室(广州510632)
关键词：发热；α-MSH；精氨酸升压素
中国病理生理杂志990512 摘 要 目的和方法：观察脑腹中隔精氨酸加压素(AVP) 在α-黑素细胞刺激素(α-MSH)解热机制中的作用；用放射免疫法测定AVP含量。结果：EGTA引起明显的发热反应(P<0.01),同时降低脑腹中隔AVP含量(P<0.05)。α-MSH可抑制EGTA性发热反应(P<0.01),并增加脑腹中隔AVP含量(P<0.05)；而对正常家兔体温及脑腹中隔AVP含量无影响(P>0.05)。结论：α-MSH对EGTA的解热作用可能部分是通过增加脑腹中隔AVP的释放而实现的。在限制发热的过程中，内生解热物α-MSH与AVP可能具有协同作用。
, http://www.100md.com The effect of α-MSH on EGTA-induced
fever and AVP content in the VSA
HU Chao-Feng, WANG Yan-Ping, LI Chu-Jie
Department of Pathophysiology, Research Institute of Fever, Medical College of Jinan University, Guangzhou (510632)
Abstract AIM: To evaluate whether the antipyretic action of α-MSH is related to arginine vasopressin (AVP) in the ventral septal area (VSA). METHOD: Radioimmunoassay was used to measure the AVP content. RESULTS: Infusion of EGTA evoked an increase in colonic temperature (P<0.01), while the content of AVP decreased (P<0.05). Intracerebroventricular perfusion of α-MSH could markedly attenuated febrile response (P<0.01) and reversed the decrease of AVP content in the VSA by EGTA (P<0.05). α-MSH did not alter normal temperature and AVP content in the VSA (P>0.05). CONCLUSION: AVP in the VSA may play a partial role in α-MSH antipyretic action and it may cooperate with α-MSH in suppressing fever.
, 百拇医药
MeSH Fever; Alpha-MSH; Argipressin
α-黑素细胞刺激素(α-melanocyte stimulating hormone,α-MSH)是一种具有明显解热作用的13肽垂体激素，将其从不同途经注入体内均有降温作用[1，2]。近年来，精氨酸加压素(anginine vasopressin,AVP)也是备受重视的内生解热性神经递质[3，4]。AVP在α-MSH限制内毒素发热反应中发挥了重要作用[5]。我们已发现α-MSH可抑制Ca2+络合剂EGTA的发热效应,其解热作用可能与抑制中枢发热介质促皮质激素释放激素产生有关[6]。为进一步探讨α-MSH的解热机制与AVP之间的关系及内源性解热物质在发热中的作用，本实验观察α-MSH在限制EGTA发热的过程中对脑中隔AVP含量的影响。
材料和方法
, 百拇医药
一、试剂和仪器：
α-MSH为Sigma公司产品；EGTA：美国Feinbicoemica Heidelberg产品；AVP放免测定药盒，由第二军医大学神经生物学教研室提供。
WMS-Ⅲ型智能多路温度检测仪(上海医用仪表厂生产);LS6000IC型液体闪烁计数器，美国Beckman公司产品。
二、实验动物及侧脑室插管：
健康封闭群新西兰家兔30只，体重2.0～3.0 kg，雌雄不拘。侧脑室插管方法见前文[5]。单笼饲养，实验室温度保持在(22±2)℃。实验前，家兔置于兔架上，用模拟探头导管经肛门插入10 cm，每天3 h, 适应2 d。
三、实验分组及步骤：
, 百拇医药 灌注试剂用人工脑脊液(ACSF)稀释，并经侧脑室灌注，实验分4组。ACSF组： ACSF 0.25 mL；EGTA组：4mmol /L EGTA 0.2 mL及ACSF 0.05 mL；α-MSH+EGTA组：200 ng α-MSH 0.05 mL及4 mmol /L EGTA 0.2 mL；α-MSH组：200 ng α-MSH 0.05 mL与ACSF 0.2 mL。记录结肠温度1 h。迅速断头，处死动物，取出脑腹中隔组织，放入沸生理盐水中煮5 min。
四、脑腹中隔组织样本提取及AVP含量测定：
取出煮沸过的兔脑，称取脑腹中隔组织30 mg，置于玻璃匀浆器内，加入1 mol/L HCl, 充分匀浆，室温中放置100 min，加入1 mol/L NaOH 1 mL中和HCl。离心，取上清，置-20℃冰箱保存待测。用放射免疫法测AVP含量。
五、体温反应指标及数据处理：
, 百拇医药
体温反应指标用1 h体温反应指数(TRI1)。所有数据用
表示；用t检验判断均数差异显著性。
结果
一、α-MSH对EGTA性发热的解热作用：
如图1所示：侧脑室灌注EGTA引起家兔体温明显升高，其TRI1显著高于对照组(P<0.01)；若先给予α-MSH再灌注EGTA，则TRI1明显低于EGTA组(P<0.01)；而α-MSH对正常体温无影响(P>0.05)。
, 百拇医药
Fig 1 Comparison of the thermal response index(TRI1) among different groups
ΔP<0.01, vs ACSF group; *P<0.01, vs EGTA group
图1 各组间体温反应指数的比较
二、α-MSH对EGTA性发热时脑腹中隔AVP含量的影响：
从表1可见：EGTA组脑腹中隔AVP含量显著低于对照组(P<0.05)；若先灌注α-MSH，，再给予EGTA，脑腹中隔AVP含量明显高于EGTA组(P<0.05)；单独给予α-MSH脑腹中隔AVP含量无显著变化(P>0.05)。
表1 α-MSH对脑腹中隔AVP含量的影响
, http://www.100md.com
Tab 1 Effect of α-MSH on AVP concent in ventral septal area ()
Group
n
AVP (pg/mg)
ACSF
6
6.93±3.98
EGTA
7
, http://www.100md.com
3.17±0.69Δ
α-MSH+EGTA
8
5.41±2.59*
α-MSH
9
6.04±4.81
*P<0.05, vs EGTA group; ΔP<0.05, vs ACSF group
讨论
已知AVP是体温负调节物之一，其作用部位在脑腹中隔(ventral septal area, VSA)及中杏仁核(medial amygdaloid nucleus, MAN)。α-MSH经不同的途径注入动物体内(包括脑室、静脉、VSA、POAH甚至胃内)均能削弱EP性发热，但效应最强的作用部位仍是VSA[1]。在发热时体温的负调节中，α-MSH与AVP之间的关系至今尚不清楚。本实验观察到侧脑室灌注EGTA引起体温升高的同时，脑腹中隔AVP含量明显降低；而事先灌注α-MSH 再给予EGTA，则不但能降低升高的体温，而且能增加脑腹中隔AVP含量。根据Cooper等的研究，脑中隔AVP释放与静脉注射内毒素引起的体温变化呈负相关，即体温上升期AVP释放相对减少，体温下降期AVP释放相对增多[7]。因此，我们认为，α-MSH可能部分通过促进脑腹中隔AVP的释放而发挥解热作用。
, 百拇医药
发热时的体温调节有异于正常的体温调节，致热原不仅启动升温机制(由中枢发热介质介导)，通过视前区-前下丘脑(preoptic anterior hypothalamus, POAH)发放升温信息传递至效应器，引起产热增多和散热减少，致中心体温上升；同时也启动限制体温上升的机制, 通过内生解热物(神经肽)作用于脑腹中隔区和中杏仁核等相关中枢，发放限制体温上升的信息或其它效应而抑制体温升高。本实验的结果说明，在发热体温的负调节中，α-MSH与AVP具有协同作用；α-MSH的增多可能是引起AVP释放的因素之一。
参考文献
1 Lipton JM, Catania A. α-MSH peptide modulate fever and inflammation. In: Bartfai T, Ottoson. eds. “Neuroimmunology of fever".New York: Pergamon Press,1992.123～136.
, http://www.100md.com
2 Huang QH, Entwistle ML, Alvaro JD,et al.Antipyretic role of endogenous melanocortins mediated by central melanocortin receptors during endotoxin- induced fever. J Neurosci, 1997, 17(9): 3343.
3 Pittman OJ, Wilkinson MF. Central arginine vasopressin and endogenous antipyretsis. Can J Physiol Pharmacol, 1992,70:786.
4 Eliason HL, Fewell JE. AVP mediates the attenuated febrile response to administration of PGE1 in rats near term of pyregnancy. Am J Physiol,1998, 275(3 pt 2):R691.
, 百拇医药
5 王华东，胡巢凤，王彦平，等. α-MSH对家兔ET性发热反应及脑腹中隔区AVP含量的影响.中国病理生理杂志，1998, 14(2):130.
6 胡巢凤，王彦平，王华东， 等.α-MSH对EGTA发热的作用. 中国病理生理杂志，1999,15(4)：299.
7 Cooper KE, Kasting, Lederis K, et al. Evidence supporting a role for endogenous vasopressin in natural suppression of fever in the sheep. J Physiol, 1979, 295:33.
(1998年9月19日收稿，1999年1月20日修回), 百拇医药
单位：胡巢凤 暨南大学医学院；王彦平 病理生理教研室；李楚杰 发热研究室(广州510632)
关键词：发热；α-MSH；精氨酸升压素
中国病理生理杂志990512 摘 要 目的和方法：观察脑腹中隔精氨酸加压素(AVP) 在α-黑素细胞刺激素(α-MSH)解热机制中的作用；用放射免疫法测定AVP含量。结果：EGTA引起明显的发热反应(P<0.01),同时降低脑腹中隔AVP含量(P<0.05)。α-MSH可抑制EGTA性发热反应(P<0.01),并增加脑腹中隔AVP含量(P<0.05)；而对正常家兔体温及脑腹中隔AVP含量无影响(P>0.05)。结论：α-MSH对EGTA的解热作用可能部分是通过增加脑腹中隔AVP的释放而实现的。在限制发热的过程中，内生解热物α-MSH与AVP可能具有协同作用。
, http://www.100md.com The effect of α-MSH on EGTA-induced
fever and AVP content in the VSA
HU Chao-Feng, WANG Yan-Ping, LI Chu-Jie
Department of Pathophysiology, Research Institute of Fever, Medical College of Jinan University, Guangzhou (510632)
Abstract AIM: To evaluate whether the antipyretic action of α-MSH is related to arginine vasopressin (AVP) in the ventral septal area (VSA). METHOD: Radioimmunoassay was used to measure the AVP content. RESULTS: Infusion of EGTA evoked an increase in colonic temperature (P<0.01), while the content of AVP decreased (P<0.05). Intracerebroventricular perfusion of α-MSH could markedly attenuated febrile response (P<0.01) and reversed the decrease of AVP content in the VSA by EGTA (P<0.05). α-MSH did not alter normal temperature and AVP content in the VSA (P>0.05). CONCLUSION: AVP in the VSA may play a partial role in α-MSH antipyretic action and it may cooperate with α-MSH in suppressing fever.
, 百拇医药
MeSH Fever; Alpha-MSH; Argipressin
α-黑素细胞刺激素(α-melanocyte stimulating hormone,α-MSH)是一种具有明显解热作用的13肽垂体激素，将其从不同途经注入体内均有降温作用[1，2]。近年来，精氨酸加压素(anginine vasopressin,AVP)也是备受重视的内生解热性神经递质[3，4]。AVP在α-MSH限制内毒素发热反应中发挥了重要作用[5]。我们已发现α-MSH可抑制Ca2+络合剂EGTA的发热效应,其解热作用可能与抑制中枢发热介质促皮质激素释放激素产生有关[6]。为进一步探讨α-MSH的解热机制与AVP之间的关系及内源性解热物质在发热中的作用，本实验观察α-MSH在限制EGTA发热的过程中对脑中隔AVP含量的影响。
材料和方法
, 百拇医药
一、试剂和仪器：
α-MSH为Sigma公司产品；EGTA：美国Feinbicoemica Heidelberg产品；AVP放免测定药盒，由第二军医大学神经生物学教研室提供。
WMS-Ⅲ型智能多路温度检测仪(上海医用仪表厂生产);LS6000IC型液体闪烁计数器，美国Beckman公司产品。
二、实验动物及侧脑室插管：
健康封闭群新西兰家兔30只，体重2.0～3.0 kg，雌雄不拘。侧脑室插管方法见前文[5]。单笼饲养，实验室温度保持在(22±2)℃。实验前，家兔置于兔架上，用模拟探头导管经肛门插入10 cm，每天3 h, 适应2 d。
三、实验分组及步骤：
, 百拇医药 灌注试剂用人工脑脊液(ACSF)稀释，并经侧脑室灌注，实验分4组。ACSF组： ACSF 0.25 mL；EGTA组：4mmol /L EGTA 0.2 mL及ACSF 0.05 mL；α-MSH+EGTA组：200 ng α-MSH 0.05 mL及4 mmol /L EGTA 0.2 mL；α-MSH组：200 ng α-MSH 0.05 mL与ACSF 0.2 mL。记录结肠温度1 h。迅速断头，处死动物，取出脑腹中隔组织，放入沸生理盐水中煮5 min。
四、脑腹中隔组织样本提取及AVP含量测定：
取出煮沸过的兔脑，称取脑腹中隔组织30 mg，置于玻璃匀浆器内，加入1 mol/L HCl, 充分匀浆，室温中放置100 min，加入1 mol/L NaOH 1 mL中和HCl。离心，取上清，置-20℃冰箱保存待测。用放射免疫法测AVP含量。
五、体温反应指标及数据处理：
, 百拇医药
体温反应指标用1 h体温反应指数(TRI1)。所有数据用
表示；用t检验判断均数差异显著性。结果
一、α-MSH对EGTA性发热的解热作用：
如图1所示：侧脑室灌注EGTA引起家兔体温明显升高，其TRI1显著高于对照组(P<0.01)；若先给予α-MSH再灌注EGTA，则TRI1明显低于EGTA组(P<0.01)；而α-MSH对正常体温无影响(P>0.05)。
, 百拇医药
Fig 1 Comparison of the thermal response index(TRI1) among different groups
ΔP<0.01, vs ACSF group; *P<0.01, vs EGTA group
图1 各组间体温反应指数的比较
二、α-MSH对EGTA性发热时脑腹中隔AVP含量的影响：
从表1可见：EGTA组脑腹中隔AVP含量显著低于对照组(P<0.05)；若先灌注α-MSH，，再给予EGTA，脑腹中隔AVP含量明显高于EGTA组(P<0.05)；单独给予α-MSH脑腹中隔AVP含量无显著变化(P>0.05)。
表1 α-MSH对脑腹中隔AVP含量的影响
, http://www.100md.com
Tab 1 Effect of α-MSH on AVP concent in ventral septal area (
)Group
n
AVP (pg/mg)
ACSF
6
6.93±3.98
EGTA
7
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3.17±0.69Δ
α-MSH+EGTA
8
5.41±2.59*
α-MSH
9
6.04±4.81
*P<0.05, vs EGTA group; ΔP<0.05, vs ACSF group
讨论
已知AVP是体温负调节物之一，其作用部位在脑腹中隔(ventral septal area, VSA)及中杏仁核(medial amygdaloid nucleus, MAN)。α-MSH经不同的途径注入动物体内(包括脑室、静脉、VSA、POAH甚至胃内)均能削弱EP性发热，但效应最强的作用部位仍是VSA[1]。在发热时体温的负调节中，α-MSH与AVP之间的关系至今尚不清楚。本实验观察到侧脑室灌注EGTA引起体温升高的同时，脑腹中隔AVP含量明显降低；而事先灌注α-MSH 再给予EGTA，则不但能降低升高的体温，而且能增加脑腹中隔AVP含量。根据Cooper等的研究，脑中隔AVP释放与静脉注射内毒素引起的体温变化呈负相关，即体温上升期AVP释放相对减少，体温下降期AVP释放相对增多[7]。因此，我们认为，α-MSH可能部分通过促进脑腹中隔AVP的释放而发挥解热作用。
, 百拇医药
发热时的体温调节有异于正常的体温调节，致热原不仅启动升温机制(由中枢发热介质介导)，通过视前区-前下丘脑(preoptic anterior hypothalamus, POAH)发放升温信息传递至效应器，引起产热增多和散热减少，致中心体温上升；同时也启动限制体温上升的机制, 通过内生解热物(神经肽)作用于脑腹中隔区和中杏仁核等相关中枢，发放限制体温上升的信息或其它效应而抑制体温升高。本实验的结果说明，在发热体温的负调节中，α-MSH与AVP具有协同作用；α-MSH的增多可能是引起AVP释放的因素之一。
参考文献
1 Lipton JM, Catania A. α-MSH peptide modulate fever and inflammation. In: Bartfai T, Ottoson. eds. “Neuroimmunology of fever".New York: Pergamon Press,1992.123～136.
, http://www.100md.com
2 Huang QH, Entwistle ML, Alvaro JD,et al.Antipyretic role of endogenous melanocortins mediated by central melanocortin receptors during endotoxin- induced fever. J Neurosci, 1997, 17(9): 3343.
3 Pittman OJ, Wilkinson MF. Central arginine vasopressin and endogenous antipyretsis. Can J Physiol Pharmacol, 1992,70:786.
4 Eliason HL, Fewell JE. AVP mediates the attenuated febrile response to administration of PGE1 in rats near term of pyregnancy. Am J Physiol,1998, 275(3 pt 2):R691.
, 百拇医药
5 王华东，胡巢凤，王彦平，等. α-MSH对家兔ET性发热反应及脑腹中隔区AVP含量的影响.中国病理生理杂志，1998, 14(2):130.
6 胡巢凤，王彦平，王华东， 等.α-MSH对EGTA发热的作用. 中国病理生理杂志，1999,15(4)：299.
7 Cooper KE, Kasting, Lederis K, et al. Evidence supporting a role for endogenous vasopressin in natural suppression of fever in the sheep. J Physiol, 1979, 295:33.
(1998年9月19日收稿，1999年1月20日修回), 百拇医药