呼吸道感染性疾病与单核细胞ADCC效应变化关系的研究
作者：黄 瑾 王秀丽 林树青
单位：白求恩医科大学第二临床学院呼吸内科(长春 130041)
关键词：
中国病理生理杂志990528
呼吸道感染是世界范围内发病率最高，与人民健康紧密相关的疾病，许多变态反应参与的疾病与呼吸道感染关系密切，而病原微生物感染呼吸道后引起免疫功能发生变化较早的是单核/巨噬细胞，它除对病原体有非特异吞噬作用外，尚有特异性杀伤功能，即抗体依赖细胞介导的细胞毒(antibody dependent cell mediated cytotoxicity, ADCC)作用。本文通过了解呼吸道急、慢性感染不同阶段单核细胞ADCC效应变化，探讨单核/巨噬细胞ADCC效应在呼吸道感染性疾病中所发挥的作用。
方法
, 百拇医药
1.检测对象：急性上感病人55例，其中发热者44例(男21例，女23例，年龄20～61岁)；不伴发热者11例(男6例，女5例，年龄24～58岁)；慢性支气管炎急性发作期病人34例(男20例，女14例，年龄38～72岁)。上述病人均为我院门诊及住院病人。健康对照组40例，男28例，女12例，年龄28～65岁，为中心血站健康献血员及本院工作人员。
2.细胞株、试剂及动物：CTLL2细胞株为本室长期传代培养。rhIL-2为卫生部长春生物制品所产品。酶标羊抗兔IgG和LPS为北京军事医学科学院产品。兔抗CTLL2细胞抗血清为本实验室自制。CBWR/B兔为本校动物中心提供。
3.方法：参照文献制备兔抗CTLL2细胞抗血清，用CELL-ELISA方法测定免疫兔血清抗体特导性。无菌分离提取外周静脉血单核细胞作为效应细胞，CTLL2细胞作为靶细胞，按下述实验分组设计加样：(1)CTLL2细胞增殖标准对照组；(2)抗血清非特导毒性对照组；(3)单核细胞非特异杀伤对照组；(4)单核细胞ADCC效应实验组；(注：上述各组均加入rhIL-2 100 U/mL,测定单核细胞体外活化后ADCC效应用LPS浓度为300 μg/L，活化单核细胞时间为24 h)。分组加样后置37℃ CO2孵箱中培养72 h，用改良的MTT比色法检测结果。
, 百拇医药
4.实验结果计算与统计：CTLL2细胞增殖标准对照组细胞增殖数按直线回归方程式计算，确定A(OD)值与细胞数的相关性。单核细胞ADCC效应组增殖的CTLL2细胞数按下述公式计算：
AADCC＝At-(Ac-As)-(Ac-Am)
=At-(2Ac-As-Am)
AADCC：单核细胞ADCC效应组实际A(OD)值；
At：单核细胞ADCC效应组测得A(OD)值；
, http://www.100md.com
Ac：CTLL2细胞增殖标准对照组A(OD)值；
As：抗血清非特异毒性对照组A(OD)值；
Am：单核细胞非特异杀伤对照组A(OD)值。
将AADCC代入CTLL2细胞增殖直线方程中，计算出ADCC效应组CTLL2细胞增殖数，最后用细胞增殖标准对照组细胞数减去ADCC效应组细胞增殖数计算出ADCC效应组被杀伤细胞数。上述计算均利用自编计算机程序计算完成。数据用
表示，用t检验。
结果
1.各组病人及健康人单核细胞未受刺激前ADCC效应和非特异杀伤效应测定结果(表1)。结果显示：(1)有发热症状的急性上感病人单核细胞ADCC效应高于健康对照组(P<0.05)，而急性上感不伴发热病人组及慢支病人组低于健康对照组(P<0.01，P<0.05)；(2)急性上感病人无论有无发热症状单核细胞非特异杀伤效应均高于健康对照组(P<0.01)，而慢性支气管炎病人无明显变化。
, http://www.100md.com
表1 各组病人单核细胞ADCC及非特异杀伤
效应检测结果
Tab 1 The ADCC effect and unspecialized cytotoxicity of monocyte
in the patients (No. of cells killed×104,) Group
n
ADCC effect
unspecialized
cytotoxicity
, http://www.100md.com
Upper respiratory tract
infection with fever
23
1.71±0.94*
1.00±0.56**
Upper respiratory tract
infection without fever
11
0.39±0.21**
1.00±0.38**
, 百拇医药
Chronic bronchitis
22
0.72±0.61*
0.74±0.22
Control group
21
1.17±0.53
0.63±0.25
*P<0.05, **P<0.01, vs control
2.各组病人及健康人单核细胞体外经LPS活化后ADCC效应和非特异杀伤效应检测结果(表2)。表明：(1)慢支病人单核细胞受刺激后ADCC效应及非特异杀伤效应均明显增强(P<0.05)；(2)有发热症状的急性上感病人单核细胞受刺激后ADCC效应增强不明显，而非特异杀伤作用明显增强(P<0.01)。
, 百拇医药
表2 各组病人单核细胞体外经LPS刺激后ADCC及非特异
杀伤效应检测结果
Tab 2. The ADCC effect and unspecialized cytotoxicity of monocyte
stimulatad in vitro by LPS in the patients (No. of
cells killed×104,) Group
n
ADCC effect
unspecialized
, http://www.100md.com
cytotoxicity
Upper respiratory tract
infection with fever
21
1.74±0.90
1.23±0.26**
Chronic bronchitis
12
1.82±0.68*
1.25±0.46*
, 百拇医药
Control group
19
1.27±0.70
0.90±0.34
*P<0.05，**P<0.01，vs control
讨论
单核/巨噬细胞具有重要抗感染免疫功能，活化后不仅通过抗原提呈作用引起其它免疫效应细胞发挥特异性免疫或变态反应，而且其ADCC效应直接影响或参与病变局部组织炎症反应。各种激活及趋化因子使血液内单核细胞功能状态发生变化，利于其到病变局部发挥作用。本研究发现无发热的上感病人及慢支病人单核细胞未受刺激时ADCC效应减弱，提示病原微生物感染可能导致单核细胞ADCC效应减弱。国外文献报道某些病毒，细菌或其代谢产物可导致单核/巨噬细胞的激活受阻或功能异常。而发热病人ADCC效应增强可能与某些病原微生物感染后机体释放致热原有关，致热原如IL-1活性增高通过直接或间接作用使单核细胞功能发生变化。单核细胞体外经LPS刺激后表现出的ADCC效应，在一定程度上反映出单核细胞活化后的功能状态。实验结果表明慢支病人单核细胞受刺激后ADCC效应明显高于健康对照组，而有发热的急性上感病人组增高不明显，说明慢支病人单核细胞ADCC效应在一定条件下可表现出过强状态，其结果可能与病变局部炎症反应迁延有关。
研究发现急性上感病人无论有无发热其单核细胞非特异杀伤效应增强，而慢支病人无明显变化，此结果能否说明急性上感后引发的机体免疫功能异常变化与单核细胞非特异杀伤功能增强有关还有待于进一步研究。
(1998年2月25日收稿，1998年12月4日修回), 百拇医药
单位：白求恩医科大学第二临床学院呼吸内科(长春 130041)
关键词：
中国病理生理杂志990528
呼吸道感染是世界范围内发病率最高，与人民健康紧密相关的疾病，许多变态反应参与的疾病与呼吸道感染关系密切，而病原微生物感染呼吸道后引起免疫功能发生变化较早的是单核/巨噬细胞，它除对病原体有非特异吞噬作用外，尚有特异性杀伤功能，即抗体依赖细胞介导的细胞毒(antibody dependent cell mediated cytotoxicity, ADCC)作用。本文通过了解呼吸道急、慢性感染不同阶段单核细胞ADCC效应变化，探讨单核/巨噬细胞ADCC效应在呼吸道感染性疾病中所发挥的作用。
方法
, 百拇医药
1.检测对象：急性上感病人55例，其中发热者44例(男21例，女23例，年龄20～61岁)；不伴发热者11例(男6例，女5例，年龄24～58岁)；慢性支气管炎急性发作期病人34例(男20例，女14例，年龄38～72岁)。上述病人均为我院门诊及住院病人。健康对照组40例，男28例，女12例，年龄28～65岁，为中心血站健康献血员及本院工作人员。
2.细胞株、试剂及动物：CTLL2细胞株为本室长期传代培养。rhIL-2为卫生部长春生物制品所产品。酶标羊抗兔IgG和LPS为北京军事医学科学院产品。兔抗CTLL2细胞抗血清为本实验室自制。CBWR/B兔为本校动物中心提供。
3.方法：参照文献制备兔抗CTLL2细胞抗血清，用CELL-ELISA方法测定免疫兔血清抗体特导性。无菌分离提取外周静脉血单核细胞作为效应细胞，CTLL2细胞作为靶细胞，按下述实验分组设计加样：(1)CTLL2细胞增殖标准对照组；(2)抗血清非特导毒性对照组；(3)单核细胞非特异杀伤对照组；(4)单核细胞ADCC效应实验组；(注：上述各组均加入rhIL-2 100 U/mL,测定单核细胞体外活化后ADCC效应用LPS浓度为300 μg/L，活化单核细胞时间为24 h)。分组加样后置37℃ CO2孵箱中培养72 h，用改良的MTT比色法检测结果。
, 百拇医药
4.实验结果计算与统计：CTLL2细胞增殖标准对照组细胞增殖数按直线回归方程式计算，确定A(OD)值与细胞数的相关性。单核细胞ADCC效应组增殖的CTLL2细胞数按下述公式计算：
AADCC＝At-(Ac-As)-(Ac-Am)
=At-(2Ac-As-Am)
AADCC：单核细胞ADCC效应组实际A(OD)值；
At：单核细胞ADCC效应组测得A(OD)值；
, http://www.100md.com
Ac：CTLL2细胞增殖标准对照组A(OD)值；
As：抗血清非特异毒性对照组A(OD)值；
Am：单核细胞非特异杀伤对照组A(OD)值。
将AADCC代入CTLL2细胞增殖直线方程中，计算出ADCC效应组CTLL2细胞增殖数，最后用细胞增殖标准对照组细胞数减去ADCC效应组细胞增殖数计算出ADCC效应组被杀伤细胞数。上述计算均利用自编计算机程序计算完成。数据用
表示，用t检验。结果
1.各组病人及健康人单核细胞未受刺激前ADCC效应和非特异杀伤效应测定结果(表1)。结果显示：(1)有发热症状的急性上感病人单核细胞ADCC效应高于健康对照组(P<0.05)，而急性上感不伴发热病人组及慢支病人组低于健康对照组(P<0.01，P<0.05)；(2)急性上感病人无论有无发热症状单核细胞非特异杀伤效应均高于健康对照组(P<0.01)，而慢性支气管炎病人无明显变化。
, http://www.100md.com
表1 各组病人单核细胞ADCC及非特异杀伤
效应检测结果
Tab 1 The ADCC effect and unspecialized cytotoxicity of monocyte
in the patients (No. of cells killed×104,
) Groupn
ADCC effect
unspecialized
cytotoxicity
, http://www.100md.com
Upper respiratory tract
infection with fever
23
1.71±0.94*
1.00±0.56**
Upper respiratory tract
infection without fever
11
0.39±0.21**
1.00±0.38**
, 百拇医药
Chronic bronchitis
22
0.72±0.61*
0.74±0.22
Control group
21
1.17±0.53
0.63±0.25
*P<0.05, **P<0.01, vs control
2.各组病人及健康人单核细胞体外经LPS活化后ADCC效应和非特异杀伤效应检测结果(表2)。表明：(1)慢支病人单核细胞受刺激后ADCC效应及非特异杀伤效应均明显增强(P<0.05)；(2)有发热症状的急性上感病人单核细胞受刺激后ADCC效应增强不明显，而非特异杀伤作用明显增强(P<0.01)。
, 百拇医药
表2 各组病人单核细胞体外经LPS刺激后ADCC及非特异
杀伤效应检测结果
Tab 2. The ADCC effect and unspecialized cytotoxicity of monocyte
stimulatad in vitro by LPS in the patients (No. of
cells killed×104,
) Groupn
ADCC effect
unspecialized
, http://www.100md.com
cytotoxicity
Upper respiratory tract
infection with fever
21
1.74±0.90
1.23±0.26**
Chronic bronchitis
12
1.82±0.68*
1.25±0.46*
, 百拇医药
Control group
19
1.27±0.70
0.90±0.34
*P<0.05，**P<0.01，vs control
讨论
单核/巨噬细胞具有重要抗感染免疫功能，活化后不仅通过抗原提呈作用引起其它免疫效应细胞发挥特异性免疫或变态反应，而且其ADCC效应直接影响或参与病变局部组织炎症反应。各种激活及趋化因子使血液内单核细胞功能状态发生变化，利于其到病变局部发挥作用。本研究发现无发热的上感病人及慢支病人单核细胞未受刺激时ADCC效应减弱，提示病原微生物感染可能导致单核细胞ADCC效应减弱。国外文献报道某些病毒，细菌或其代谢产物可导致单核/巨噬细胞的激活受阻或功能异常。而发热病人ADCC效应增强可能与某些病原微生物感染后机体释放致热原有关，致热原如IL-1活性增高通过直接或间接作用使单核细胞功能发生变化。单核细胞体外经LPS刺激后表现出的ADCC效应，在一定程度上反映出单核细胞活化后的功能状态。实验结果表明慢支病人单核细胞受刺激后ADCC效应明显高于健康对照组，而有发热的急性上感病人组增高不明显，说明慢支病人单核细胞ADCC效应在一定条件下可表现出过强状态，其结果可能与病变局部炎症反应迁延有关。
研究发现急性上感病人无论有无发热其单核细胞非特异杀伤效应增强，而慢支病人无明显变化，此结果能否说明急性上感后引发的机体免疫功能异常变化与单核细胞非特异杀伤功能增强有关还有待于进一步研究。
(1998年2月25日收稿，1998年12月4日修回), 百拇医药