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编号:10271495
二尖瓣狭窄和射频消融后患者血小板膜糖蛋白Ⅳ及凝血酶敏感蛋白的分布
http://www.100md.com 《中国病理生理杂志》 1999年第7期
     作者:张彦周黄艳琴毛焕元 冯义柏 曹林生 毛奕

    单位:毛焕元 冯义柏 曹林生 毛 奕同济医科大学心血管病研究所(武汉 430022);张彦周河南医科大学第一附属医院心内科(郑州450052);黄艳琴 禹州市人民医院内科

    关键词:二尖瓣狭窄;血小板膜糖蛋白类;凝血酶

    中国病理生理杂志/990722 摘 要 目的:探讨二尖瓣狭窄患者及射频消融术后患者 血小板功能状态。方法:运用流式细胞术测定阵发性室上性心动过速(PSVT )患者(n=12)射频消融术(RFCA)前、后及二尖瓣狭窄(MS)患者(n=14)股动脉血小板 膜糖蛋白Ⅳ(GPⅣ)及凝血酶敏感蛋白(TSP)的分布。结果:MS患者及PSVT患 者RFCA后静息血小板膜GPⅣ分布明显多于PSVT患者RFCA前(P<0.05,<0.01);MS患者 静息血小板膜TSP分布显著多于PSVT患者RFCA前(P<0.05),而PSVT患者静息血小板膜T SP分布RFCA前后无显著差异(P>0.05);在凝血酶(0.1 U/mL,0.5 U/mL)激活时,MS患 者及PSVT患者RFCA后血小板膜GPⅣ及TSP分布均显著多于RFCA前(P<0.05,<0.01)。[ HTH〗结论:MS患者及PSVT患者RFCA后血小板的活性及反应性增加,血小板发生不 可逆聚集的危险性增高。
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    The distribution of membrane glycoprotein Ⅳ and thrombospondin in platelets of

    patients after radiofrequency catheter ablation and patients with mitral stenosis

    ZHANG Yan-Zhou, HUANG Yan-Qin, MAO Huan-Yan, FENG Yi-Bo, CAO Li n-Sheng, MAO Yi

    Institute of Cardiovascular Diseases, Tongji Medical University, Wuhan(43 0022)

    Abstract AIM:To investigate the function of platelets of pati e nts with paroxysmal supraventricular tachycardia(PSVT) after radiofrequency cath eter ablation (RFCA) and patients with mitral stenosis (MS). METHODS:The membrane glycoprotein Ⅳ(GPⅣ) and thrombospondin(TSP ) in plaletets of 12 patients with PSVT and 14 patients with MS were detected wit h the flow cytometric methods. RESULTS:The membrane GPⅣ in resti ng platelets of patients with MS and patients with PSVT after RFCA was higher th an that of patients with PSVT before RFCA (P<0.05,P<0.01); the membrane TS P i n resting platelets of patients with MS, but not patients with PSVT after RFCA, was more than that of patients with PSVT before RFCA(P<0.05); the membrane GPⅣ and TSP in platelets induced by thrombin of patients with MS and patients with PSVT after RFCA was more than that of patients with PSVT before RFCA (P <0.05,P<0.01). CONCLUSION:There was a higher platelet activ ity, reactivity and irreversible aggreability in patients with MS and patients w ith PSVT after RFCA.
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    MeSH Mitral valve stenosis; Platelet membrane glycoproteins; Thro mbin

    血小板膜表面糖蛋白Ⅳ(glycoproteinⅣ,GPⅣ)及凝血酶敏感蛋白(th rombospondin,TSP)分布增多是血小板活化的敏感标志[1,2],二者相互结合参 与血小板的不可逆稳定性聚集[3,4]。已证实二尖瓣狭窄患者及室上性心动过速 患者射频消融术后10 min内血小板活性增高[5,6],但这些患者血小板膜表面GP Ⅳ及TSP的分布状况,国内尚未见报道。基于此,本文进行了如下研究。

    材料与方法

    一、研究对象:

    (一)阵发性室上性心动过速(paroxysmal supraven-tricular tachycardia, PSVT)患者12 例,年龄23~52(平均40.1±7.8)岁,其中女性8例,男性4例。射频导管消融术(radiofre quency catheter ablation, RFCA)前为正常窦性心律,体格检查、心脏超声心动图及X线检 查示心脏结构无异常,心功能Ⅰ级。
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    (二)中重度二尖瓣狭窄(mitral stenosis,MS)患者14例,年龄27~51(平均38.2±7.4) 岁。其中女性9例,男性5例,合并房颤者8例。心脏超声示二尖瓣口面积0.6~1.4 cm2 ,心功能Ⅱ~Ⅲ级。

    所有受试者均无肝、肾、内分泌及血液系统疾患,近3周内未服用血小板抑制药物。

    二、主要试剂和仪器:

    抗血小板膜GPⅣ单克隆抗体(McAb)及TSP McAb,凝血酶,羊抗鼠荧光标志抗体(IgG-FITC)为 美国Sigma公司产品;小牛血清白蛋白(bovine serum albumin, BSA)由Amersham Dickinson 公司提供;多聚 甲醛为E.Merck产品;HL-500型射频消融仪由成都锦江通用电子仪器厂生产 ;TF Websfer消融导管及FACSort型流式细胞仪分别由美国Cordis及Becton Dickinson公司 制造。
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    三、方法:

    (一)射频消融术(RFCA):常规将多极导管分别放置在高右房、希氏束、冠状静脉窦及右室心 尖部,用后位法或下位法消融房室结双经路(5例)慢通道,将消融导管置于二尖瓣环下(左侧 旁道,4例)或三尖瓣环上(右侧旁道,3例)进行消融。放电功率20~30 W,放电时间10~150 s,放电次数2~6次。

    (二)血小板分离:分别从PSVT患者(RFCA前及消融成功即刻)及MS患者股动脉采血,与ACP抗 凝剂(枸橼酸钠71 mmol/L、枸橼酸三钠85 mmol/L、葡萄糖111 mmol/L, pH 6.5)以6∶1混匀 后,离心获取富含血小板血浆,加入50 ng/mL前列腺素E1,用PBS反复洗涤血小板3次,用 0.35% BSA-台氏缓冲液(临用前配制)悬浮并调至血小板数为1.5×1011/L,其中 单核细胞数<0.005%。

    (三)血小板激活及其膜GPⅣ、TSP的测定:静息血小板悬液分别加入生理盐水或凝血酶(0.1 U/mL,0.5 U/mL),置37℃ 30 min,用等体积1%多聚甲醛固定。然后,在静息血小板及活化 血小板悬液0.5 mL中加入100 μL特异单克隆抗体溶液(抗血小板膜GPⅣ McAb 8 μg/mL,抗 TSP McAb 3 μg/mL),阴性对照加鼠IgG,混匀后37℃温育30 min,用0.35% BAS-台氏液 洗涤(2 000 r/min 5 min)3次,加羊抗鼠荧光标志抗体50 μL(IgG-PITC 1∶300),避光4℃ 30 min,再用PBS洗涤2次。在流式细胞仪上分别测定GPⅣ、TSP阳性血小板百分率,用阳性 血小板百分率表示血小板膜表面GPⅣ、TSP分布状态。
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    (四)统计学处理:数据以±s表示,用t检验进行各均值比较,用直线相 关分析检验血小板膜GPⅣ与TSP的相关性。

    结 果

    一、静息状态下血小板膜GPⅣ及TSP分布:

    MS患者GPⅣ及TSP阳性血小板百分率均高于PSVT患者RFCA前(P<0.05,P<0.01);P SVT患 者GPⅣ阳性血小板百分率RFCA后高于RFCA前(P<0.05),TSP阳性血小板百分率RF CA前、后无显著差别(P>0.05)(表1,表2)。

    表1 血小板膜GPⅣ的分布

    Tab 1 The distribution of membrane GPⅣ in platelets(±s,%)
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    Resting

    Activated by thrombin

    0.1 U/mL

    0.5 U/mL

    Patients with PSVT before RFCA

    23.36±6.64

    44.40±8.69

    67.3 5±12.36

    (n=12)

    Patients with PSVT after RFCA

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    59.33±11.27**

    79.8 1±11.07**

    (n=12)

    Patients with MS

    36.87±6.95**

    63.85±14.23**

    76.72±14.66**

    (n=14)

    P<0.05,**P<0.01,vs patients with PSVT before RFCA
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    表2 血小板膜TSP的分布

    Tab 2 The distribution of membrane TSP in platelets (±s,%)

    Resting

    Activated by thrombin

    0.1 U/mL

    0.5 U/mL

    Patients with PSVT before RFCA

    14.73±5.29

    29.63±5.94
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    53.8 3±11.20

    (n=12)

    Patients with PSVT after RFCA

    18.21±5.22

    47.05±15.16

    66.8 9±10.04

    (n=12)

    Patients with MS

    23.85±4.86

    48.19±13.01
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    70.42±12.98 

    (n=14)

    *P<0.05,**P<0.01, vs patients with PSVT before RFCA

    二、激活状态下血小板膜GPⅣ的分布:

    凝血酶诱导时,MS患者及PSVT患者RFCA后GPⅣ阳性血小板百分率明显高于PSVT患者RFCA前( P<0.05,P<0.01)(表1)。

    三、激活状态下血小板: 膜TSP的分布:

    MS患者及PSVT患者RFCA后凝血酶激活时TSP阳性血小板百分率明显高于PSVT患者RFCA前(P 均<0.01)(表2)。
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    四、血小板膜GPⅣ及TSP的关系:

    静息血小板PSVT患者RFCA前、后及MS患者GPⅣ阳性血小板百分率与TSP阳性血小板百分率均 呈正相关(r=0.586, 0.712, 0.604; P<0.05,P<0.01)(表3)。

    激活血小板:PSVT患者RFCA前、后及MS患者GPⅣ阳性血小板百分率与TSP阳性血小板百分率 呈显著正相关(r=0.521, 0.576, 0.584; P<0.01)(表3)

    表3 血小板膜GPⅣ与TSP的相关性

    Tab 3 Correlation of the membrane GPⅣ with the

    membrane TSP in platelets (r) Activated
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    platelets

    Patients with

    PSVT before

    RFCA

    Patients with

    PSVT after

    RFCA

    Pat ients

    with MS

    Resting platelets

    0.586*
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    0.712**

    0.604**

    0.521**

    0.576**

    0.584**

    *P<0.05,**P<0.01; Activated platelets:Platelets induced by thrombin (0.1 U/mL, 0.5 U/mL)

    讨 论

    在正常静息状态下,血小板膜表面GPⅣ分布较少,当血小板活化后,大量α-颗粒中GPⅣ移 至 血小板膜表面[3]。绝大多数TSP在正常生理条件下存在于血小板内α-颗粒中,某 些病理条件或诱聚剂激活血小板时,α-颗粒内TSP释放在血小板膜上。血小板膜GPⅣ再分布 增多及血小板内TSP释放是血小板激活的标志[1,2],活化血小板的TSP-GPⅣ-GP Ⅱb/Ⅲa-纤维蛋白原多聚复合物的形成标志着血小板间发生不可逆聚集。凝血 酶是动脉血栓形成中激活血小板的重要物质,是符合生理特性的血小板诱聚剂。
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    反复风湿活动导致的心内膜或血管内皮损伤、狭窄二尖瓣口或心律失常引起的血流紊乱可能 是MS患者血小板激活[5]的重要原因。RFCA后患者系统血栓栓塞发生率为0.5%~2 %,心腔内血栓形成发生率则更高。RFCA过程中,放电引起的局部温度增高、心内膜损伤、 血中儿茶酚胺水平增高以及心律失常或起搏心脏引起的房室收缩不同步等因素可使血小板活 性 增高[6~8]。本实验显示MS患者和PSVT患者RFCA后血小板活性及反应性明显高于P SVT患者RFCA前。鉴于PSVT患者RFCA前均为正常窦性心律,无其他心脏疾患,故认为MS患 者及PSVT患者RFCA后血小板的活性及反应性可能较正常人为高,即血小板发生不可逆聚集的 危险性增高。

    血小板在聚集过程中,血小板膜GPⅣ再分布增多,为α-颗粒内释放的TSP提供有效的结合场 所[9]。本文结果表明,MS患者及PSVT患者RFCA前、后血小板膜GPⅣ与TSP分布呈 正相关,可见在这些患者中,二者的变化是同向的。
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    参考文献

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    (1997年11月3日收稿,1998年3月3日修回), 百拇医药