早孕妇女外周血和蜕膜组织中自然杀伤细胞亚群的变化
作者：侯 倩 王自能 曾耀英
单位：侯 倩 王自能暨南大学医学院妇产科(广州 510632)；曾耀英 暨南大学组织移植与免疫中心
关键词：蜕膜；杀伤细胞；天然；雌激素类；孕酮
早孕妇女外周血和蜕膜组织中自然杀伤细胞亚群的变化 摘要 目的和方法：用流式细胞仪检测正常 非孕及早孕妇女外周血和蜕膜自然杀伤细胞表面标记CD56和CD16分子，探讨早孕外周血与蜕 膜之间自然杀伤细胞亚群的差异以及雌、孕激素对外周血自然杀伤细胞的影响。结 果：蜕膜以CD56+细胞为主要淋巴细胞，早孕外周血则以CD56+CD16+和CD16 +为主。孕酮在一定范围内增加，可使外周血自然杀伤细胞各亚群的百分率明显增加；在 早孕期，雌、孕激素水平的急剧升高可能使外周血CD56+细胞向CD16+细胞 转化。结论：早孕外周血和蜕膜组织中的自然杀伤细胞对维持正常妊娠发 挥着重要作用。
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Different expression of NK cellular subsets in decidual tissue a nd peripheral blood
HOU Qian , ZENG Yao-Ying, WANG Zi-Neng
Department of Gynaecology and Obstetrics, Medical College, Jinan Uni versity, Guangzhou (510632)
Abstract AIM：To determinate the difference of na tural killer ( NK) cellular subpopulations between decidual tissue and peripheral blood(PB) in early pregnancy, and to investigate the effect of estrogen and progesterone on N K cell of PB.METHODS：Flow cytometry was used to detect the expr ession of CD56 and CD16 of NK cellular markers on peripheral blood lymphocytes(P BL) in non-pregnancy and on decidual lymphocytes and PBL in early pregnancy. RESULTS： CD56+NK cells were predominant population of decidual lymphocytes, and both CD56+CD16+ and CD16+NK cells made up the majority o f PBLs in early pregnancy. The percentage of diverse s ubpopulations of NK cells was significantly enhanced in peripheral blood as prog esterone was increased within certain limits; it was possible that CD56+NK cel ls were likely transformed into CD16+NK cells in peripheral blood when the lev els of estrogen and progesterone were sharply raised during early pregnancy. CONCLUSION：The difference of NK cellular subpopulations between pe ripheral blood and decidual tissues in early pregnancy played an important role in the maintenance of normal pregnancy.
, 百拇医药
MeSH Decidua； Killer cell, natural; Estrogens; Proge sterone
自然杀伤(natural killer，NK)细胞是机体内重要的免疫细胞，其表面无T细胞受体 和B细胞受体，其杀伤活性不受主要组织相容性复合物的限制，它不依赖抗体或补体，与抗 肿瘤、抗病毒感染和免疫调节有关。近年研究表明：人类早期妊娠蜕膜中含有丰富的 NK细 胞，它大部分来源于骨髓，分泌多种细胞因子，对胚胎在母体内免遭排斥及正常生长发育起 着重要的免疫调节作用。目前认为，子宫内膜NK细胞数受雌、孕激素控制：增殖期稀少，分 泌期显著增加。它不同于周围血的NK细胞。然而，NK细胞的鉴别是由其表面标志决定着的， 故本研究采用流式细胞仪分析技术，比较NK细胞表面抗原特异性标记CD56和CD16在外周血与 早孕蜕膜组织淋巴细胞中的差异，探讨雌、孕激素对NK细胞的影响。
材料和方法
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一、研究对象：
1.蜕膜组(decidua)：双盲随机法从人工流产的正常孕妇中采取早孕蜕膜组织，10 例，年龄21～37岁，平均年龄(26.5±5.62)岁，孕6～8周，无急慢性疾病史，无自身免疫疾 病史。
2.早孕外周血组(early pregnant peripheral blood，EPPB)：抽取同一孕妇外周血4 mL ，其中2 mL置空白试管中，室温静置30 min，离心1 000 r/min 5 min，吸取血清，-20 ℃保存待测；另2 mL加肝素(25IU/ mL)，用于分离淋巴细胞，共10例。
3.正常非孕外周血组(normal non-pregnant peripheral blood，NNPPB)：抽取正常 非孕妇女外周血4 mL，处理同上，年龄22～35岁，平均年龄(27.42±3.64)岁，共19例。无 感 染史，无自身免疫疾病史。根据外周血孕酮(progesterone，P)水平将其分为P<2.30 nmol/L组和P>2.30 nmol/L组。
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二、研究方法：
1.蜕膜组织淋巴细胞的分离：将蜕膜组织血迹清洗干净，剪碎成糊状，用200目筛网研 磨过滤，然后以1∶1的比例沿管壁缓慢加在淋巴细胞分离液(相对密度1.077，上海试剂二 厂产品)液面上，离心2 000 r/min 10 min，吸取单个核细胞层，用磷酸缓冲液(phosph ate balanced solution, PBS pH7.2)洗涤2次，调整细胞浓度5×105/mL,离心2 000 r/m in 5 min，去上清液。
2.外周血淋巴细胞的分离：早孕外周血加入等体积的PBS稀释，然后以1∶1 比例沿管壁缓慢 加在淋巴细胞分离液液面上，离心2 000 r/min 10 min，吸取淋巴细胞层。用PBS洗涤2次 ，调整细胞浓度5×105/ mL,离心1 500r/min 5 min，弃上清液。
3.免疫荧光抗体标记：每管分别加入鼠抗人CD16-FITC 10 μL(法国Immunotech公司产 品)、CD56-PE 5μL(丹麦Dako公司产品),混匀后4℃避光孵育30 min，加入1 mL PBS混匀 ，离心1 500 r/min 5 min，弃上清，而后加入1%多聚甲醛0.5 mL固定样品，混匀后4℃避 光保存，48 h内检测。
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4.早孕外周血和蜕膜NK细胞亚群检测和结果分析：利用美国Becton Dickinson公司生产 的FACSCan流式细胞仪(flow cytometer)进行细胞膜受体检测，每份样品检测5 000个细胞 。在前散射(FSC)和侧散射(SSC)的二维Dot-Plot散点图中划出淋巴细胞区，然后对淋巴 细胞作FITC和PE荧光强度检测。在确定阳性细胞前，根据非特异荧光强度设定双阳性、双阴 性和单阳性区。获得数据在Hewlett Packard计算机上用CellQuest软件测定和分析结果。
5. 用放射免疫沉淀法测定外周血清雌二醇(estradiol，E2)、 P4水平。E2试 剂 盒为天津德普DPC产品，P4试剂盒为天津九鼎医学生物工程有限公司产品。实验步骤严格 按试剂盒要求及质控标准进行。
E2检测：(1)将标准品A至F及非妊娠血清样品各取200μL分别加入试管中，早孕 妇 女的血清取100 μL，与零标准品100 μL (1∶1)稀释置入相应试管；(2) 每管加入100 μL 雌二醇抗血清，振荡，室温温育2 h；(3) 每管加入100μL [125I]雌二醇，振荡， 室温温育10 min；(4) 离心3 000 r/min 30 min。(5) 电动吸液器吸去上清液，用γ-计 数器测定各管沉淀物的放射性强度。
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P4操作：(1)先在塑料管上编号，然后依次将标准品(0-100 ng/mL)、质控血清 (I、II)和检测样品血清各取200μL加入到相应的试管中；(2)每管先后加入[125 I] 孕酮200 μL和抗孕酮抗体200 μL，混匀后放37℃水浴温育30 min；(3)每管加入PEG-第二抗体1 mL ，充分混匀，离心3 000 r/min 30 min，弃上清，用γ-计数器测量各管沉淀物的 放射性强度。质控I：(1.0±0.25)nmol/L，质控II：(12.4±3.2)nmol/L。
三、统计学处理：
配对t检验和非配对t检验。
结 果
(一)早孕外周血与蜕膜组织淋巴细胞中NK亚群的比较：蜕膜组织中的NK细胞以CD56 + 为优势，占51.22%；而早孕周围血中的NK细胞以CD56+CD16+和CD16+为主，分别占10. 75%和10.43%。早孕外周血CD16+值明显高于蜕膜组织。见表1。
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表1 早孕外周血与蜕膜组织淋巴细胞中
NK细胞亚群的百分率
Tab 1 The percentage of NK cellular subtypes in peripheral
blood lymphocytes and decidual cells of early pregnancies(
±s,%)
Phenotype
Early pregnancy
PB(n=10)
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Decidua
(n=10)
CD56+CD16-
3.70±1.74**
5 1.22±21.04
CD56+CD16+
10.75±5.10
6.89±3.58
CD56-CD16+
10.43±5.28**
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3.95±2.78
**P<0.01, vs decidua group
(二)正常早孕与非孕外周血淋巴细胞中NK亚群的比较：早孕组CD56+明显低于非孕 组，其CD56+CD16+的百分率略高于非孕组，其CD16+百分率明显高于非孕组。见表2。
表2 正常非孕与早孕外周血淋巴细胞中NK细胞的百分率
Tab 2 The percentage of NK cellular subcytes in peripheral blo od lymphocytes of normal non-pregnancies and early pregnancies (±s, %)
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Group
n
E2(pmol/L)
P4(nmol/L)
CD56+CD16-
CD56+CD16+
CD56-CD16+
EPPB
10
2320.40±865.26
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20.37±6.11
3.70±1.74
10.75±5.10
10.43±5.28
NNPPB
12
462.03±243.20**
7.10±3.86**
5.4 9±2.08*
8.03±3.70
6.61±3.35**
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NNPPB为P4>2.30 nmol/L *P<0.05, **P<0.01, vs EPPB group
三、非孕外周血不同孕酮值淋巴细胞中NK亚群的比较：P4>2.30 nmol/L组的CD56+ ，CD56+CD16+及CD16+ 百分率均明显高于P4<2.30 nmol/L组。
表3 非孕外周血不同孕酮值淋巴细胞中NK细胞的百分率
Tab 3 The percentage of NK cellular subcytes in non-pregnancies peripheral blood between different value of progesterone (±s,%)
, 百拇医药
Group
n
E2(pmol/L)
CD56+CD16-
CD56+CD16+
CD56-CD16+
P4<2.30nmol/L
7
274.74±1 47.46
2.21±0.59
, 百拇医药
3.46±1.33
3.65±1.52
P4>2.30nmol/L
12
462.03±243.20
5.49±2.08*
8.03± 3.70**
6.61±3.35#
*P<0.05, **P<0.01, vs P4<2.30nmol/L group
讨 论
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NK细胞是机体抗感染抗肿瘤的第一道防线，它可分为3种不同的亚群，即CD56+CD16-， CD56+CD16+，CD56-CD16+。Chao 等[3] 报道早孕蜕膜组织淋巴细胞以CD5 6+NK细胞最丰富，占40～50%，而在外周血中其含量甚少。本研究检测结果：CD56+NK 细胞在早孕外周血中仅占3.7%，而在早孕蜕膜组织中占51.22%，与Chao等[3] 报道 的结果基本一致。Inoue等[4] 报道，在分泌晚期和早孕期，CD56+/CD16-/CD3 -大颗粒淋巴细胞在宫内膜增加；在孕酮、E2、垂体泌乳素(PRL)和绒毛膜促性腺激素 (HCG)存在下，分别培养宫内膜白细胞和外周血单个核细胞6d，然后富集细胞并进行免疫 细胞化学检查。CD56+的百分率在用孕酮的宫内膜白细胞组明显高于无孕酮组。而E2、P RL和HCG在宫内膜白细胞中诱导CD56+细胞无显著性差异。因此，孕酮对宫内膜的CD56+ 大颗粒淋巴细胞的增殖和分化有重要作用。目前认为人类正 常蜕膜NK细胞表面含有杀伤抑制性受体(killer inhibitory receptors，KIRs)和杀伤活 化性受体(killer activatory receptors，KARs)，且以抑制性受体为主，负责转递抑制信 号，阻止NK细胞的活化作用[5] 。King等[6] 认为蜕膜CD56+NK样细胞 杀伤活性低于外周血NK细胞的杀伤活性，这可能是因为外周血的NK细胞以CD56+CD16+， CD56-CD16+为主的结果。由此推论，正常蜕膜中CD56+NK细胞膜上可能主要含有KIRs ，以保护胚胎免受母体免疫系统的排斥。
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Sarachi等[7] 认为E2可提高NK细胞的增殖，E2是NK大颗粒淋巴细胞的激活 剂。Ho等[8]认为，随着雌、孕激素水平的升高，外周血淋巴细胞膜上CD56+CD16 +NK细胞的百分率也随之增加。而在我们的研究结果中，正常生育年龄非孕妇女的外周血 中的E2对NK细胞各亚群的增 殖影响不大，但孕酮水平却能显著影响外周血淋巴细胞CD56和CD16膜受体的合成，使二者均 明显增加。本研究结果进一步提示：在早孕组外周血CD56+CD16+与正常非孕组比较无明 显变 化，这是因为孕酮增加到一定程度，使外周血CD56+CD16+亚群达到饱和状态，此后无论 孕酮 增加多少，CD56+CD16+的百分率也不发生明显变化；CD56+细胞是CD16+细胞的前体 ，在早孕 组，外周血CD56+明显低于非孕组，而CD16+却明显高于非孕组，可能是由于雌、孕激素 水平的急剧升高，促进外周血CD56+细胞向CD16+细胞转化，从而减少外周血CD56膜受体 的含量。CD16+NK细胞可通过抗体依赖细胞介导的细胞毒(antibody dependent cell-med iated cytotoxicity, ADCC)效应启动NK细胞的杀伤功能[9] 。因此，作者认为在 早孕期，外周血CD16+NK细胞亚群的增加，可防御细菌及病毒等有害物质从外周血入侵到 母胎界面和胎儿体内，有利于胎盘的形成，使妊娠继续。
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参考文献
1 Vince GS, Starkey PM, Jackson MC, et al. Flow cytometric characteris ation of cell populations in human pregnancy decidua and isolation of decidual macrophage s. J Immunol Methods， 1990,132(2):181.
2 King A，Burrows T, Verms S, et al. Human uterine lymphocytes. Hum R eprod Update， 1998, 4(5):480.
3 Chao KH, Yang YS, Ho HN, et al. Decidual natural killer cytotoxicit y decreased in normal pregnancy but not in anembryonic pregnancy and recurrent spo ntaneous abortion. Am J Reprod Immunol， 1995,34:274.
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4 Inoue T, Kanzaki H, Imai K, et al. Progesterone stimulates the ind u ction of human endometrial CD56+ lymphocytes in an in vitro culture system. J Clin Endocrinol Metab， 1996, 81(4):1502.
5 Loke YW, King A. Immunology of human placental implantation: clini cal implications of our current understanding. Mol Med Today, 1997,1:153.[ ZK)〗
6 King A, Birkby C Loke YW. Early human decidual cells exhibit NK activity against the K562 cell line but not against first trimester trophoblast . Cell Immunol， 1989,118:337.
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7 Sarachi K, Kumagai S, Sugita M, et al. Enhancing effect of 17-beta- estradiol on human NK cell activity. Immunol Lett， 1993,36(1):31 .
8 Ho HN, Chao KH, Chen CK, et al. Activation status of T and NK cells in the endometrium throughout menstrual cycle and normal and abnormal early pre gnancy. Human Immunol， 1996,49:130.
9 Ryan JC, Turck J, Niemi EC, et al. Molecular cloning of the NK1.1 a ntigen, a member of the NKR-P1 family of natural killer cell activation molecule s. J Immunol， 1992,149(5):1631.
(1999年1月12日收稿，1999年3月29日修回), http://www.100md.com
单位：侯 倩 王自能暨南大学医学院妇产科(广州 510632)；曾耀英 暨南大学组织移植与免疫中心
关键词：蜕膜；杀伤细胞；天然；雌激素类；孕酮
早孕妇女外周血和蜕膜组织中自然杀伤细胞亚群的变化 摘要 目的和方法：用流式细胞仪检测正常 非孕及早孕妇女外周血和蜕膜自然杀伤细胞表面标记CD56和CD16分子，探讨早孕外周血与蜕 膜之间自然杀伤细胞亚群的差异以及雌、孕激素对外周血自然杀伤细胞的影响。结 果：蜕膜以CD56+细胞为主要淋巴细胞，早孕外周血则以CD56+CD16+和CD16 +为主。孕酮在一定范围内增加，可使外周血自然杀伤细胞各亚群的百分率明显增加；在 早孕期，雌、孕激素水平的急剧升高可能使外周血CD56+细胞向CD16+细胞 转化。结论：早孕外周血和蜕膜组织中的自然杀伤细胞对维持正常妊娠发 挥着重要作用。
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Different expression of NK cellular subsets in decidual tissue a nd peripheral blood
HOU Qian , ZENG Yao-Ying, WANG Zi-Neng
Department of Gynaecology and Obstetrics, Medical College, Jinan Uni versity, Guangzhou (510632)
Abstract AIM：To determinate the difference of na tural killer ( NK) cellular subpopulations between decidual tissue and peripheral blood(PB) in early pregnancy, and to investigate the effect of estrogen and progesterone on N K cell of PB.METHODS：Flow cytometry was used to detect the expr ession of CD56 and CD16 of NK cellular markers on peripheral blood lymphocytes(P BL) in non-pregnancy and on decidual lymphocytes and PBL in early pregnancy. RESULTS： CD56+NK cells were predominant population of decidual lymphocytes, and both CD56+CD16+ and CD16+NK cells made up the majority o f PBLs in early pregnancy. The percentage of diverse s ubpopulations of NK cells was significantly enhanced in peripheral blood as prog esterone was increased within certain limits; it was possible that CD56+NK cel ls were likely transformed into CD16+NK cells in peripheral blood when the lev els of estrogen and progesterone were sharply raised during early pregnancy. CONCLUSION：The difference of NK cellular subpopulations between pe ripheral blood and decidual tissues in early pregnancy played an important role in the maintenance of normal pregnancy.
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MeSH Decidua； Killer cell, natural; Estrogens; Proge sterone
自然杀伤(natural killer，NK)细胞是机体内重要的免疫细胞，其表面无T细胞受体 和B细胞受体，其杀伤活性不受主要组织相容性复合物的限制，它不依赖抗体或补体，与抗 肿瘤、抗病毒感染和免疫调节有关。近年研究表明：人类早期妊娠蜕膜中含有丰富的 NK细 胞，它大部分来源于骨髓，分泌多种细胞因子，对胚胎在母体内免遭排斥及正常生长发育起 着重要的免疫调节作用。目前认为，子宫内膜NK细胞数受雌、孕激素控制：增殖期稀少，分 泌期显著增加。它不同于周围血的NK细胞。然而，NK细胞的鉴别是由其表面标志决定着的， 故本研究采用流式细胞仪分析技术，比较NK细胞表面抗原特异性标记CD56和CD16在外周血与 早孕蜕膜组织淋巴细胞中的差异，探讨雌、孕激素对NK细胞的影响。
材料和方法
, 百拇医药
一、研究对象：
1.蜕膜组(decidua)：双盲随机法从人工流产的正常孕妇中采取早孕蜕膜组织，10 例，年龄21～37岁，平均年龄(26.5±5.62)岁，孕6～8周，无急慢性疾病史，无自身免疫疾 病史。
2.早孕外周血组(early pregnant peripheral blood，EPPB)：抽取同一孕妇外周血4 mL ，其中2 mL置空白试管中，室温静置30 min，离心1 000 r/min 5 min，吸取血清，-20 ℃保存待测；另2 mL加肝素(25IU/ mL)，用于分离淋巴细胞，共10例。
3.正常非孕外周血组(normal non-pregnant peripheral blood，NNPPB)：抽取正常 非孕妇女外周血4 mL，处理同上，年龄22～35岁，平均年龄(27.42±3.64)岁，共19例。无 感 染史，无自身免疫疾病史。根据外周血孕酮(progesterone，P)水平将其分为P<2.30 nmol/L组和P>2.30 nmol/L组。
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二、研究方法：
1.蜕膜组织淋巴细胞的分离：将蜕膜组织血迹清洗干净，剪碎成糊状，用200目筛网研 磨过滤，然后以1∶1的比例沿管壁缓慢加在淋巴细胞分离液(相对密度1.077，上海试剂二 厂产品)液面上，离心2 000 r/min 10 min，吸取单个核细胞层，用磷酸缓冲液(phosph ate balanced solution, PBS pH7.2)洗涤2次，调整细胞浓度5×105/mL,离心2 000 r/m in 5 min，去上清液。
2.外周血淋巴细胞的分离：早孕外周血加入等体积的PBS稀释，然后以1∶1 比例沿管壁缓慢 加在淋巴细胞分离液液面上，离心2 000 r/min 10 min，吸取淋巴细胞层。用PBS洗涤2次 ，调整细胞浓度5×105/ mL,离心1 500r/min 5 min，弃上清液。
3.免疫荧光抗体标记：每管分别加入鼠抗人CD16-FITC 10 μL(法国Immunotech公司产 品)、CD56-PE 5μL(丹麦Dako公司产品),混匀后4℃避光孵育30 min，加入1 mL PBS混匀 ，离心1 500 r/min 5 min，弃上清，而后加入1%多聚甲醛0.5 mL固定样品，混匀后4℃避 光保存，48 h内检测。
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4.早孕外周血和蜕膜NK细胞亚群检测和结果分析：利用美国Becton Dickinson公司生产 的FACSCan流式细胞仪(flow cytometer)进行细胞膜受体检测，每份样品检测5 000个细胞 。在前散射(FSC)和侧散射(SSC)的二维Dot-Plot散点图中划出淋巴细胞区，然后对淋巴 细胞作FITC和PE荧光强度检测。在确定阳性细胞前，根据非特异荧光强度设定双阳性、双阴 性和单阳性区。获得数据在Hewlett Packard计算机上用CellQuest软件测定和分析结果。
5. 用放射免疫沉淀法测定外周血清雌二醇(estradiol，E2)、 P4水平。E2试 剂 盒为天津德普DPC产品，P4试剂盒为天津九鼎医学生物工程有限公司产品。实验步骤严格 按试剂盒要求及质控标准进行。
E2检测：(1)将标准品A至F及非妊娠血清样品各取200μL分别加入试管中，早孕 妇 女的血清取100 μL，与零标准品100 μL (1∶1)稀释置入相应试管；(2) 每管加入100 μL 雌二醇抗血清，振荡，室温温育2 h；(3) 每管加入100μL [125I]雌二醇，振荡， 室温温育10 min；(4) 离心3 000 r/min 30 min。(5) 电动吸液器吸去上清液，用γ-计 数器测定各管沉淀物的放射性强度。
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P4操作：(1)先在塑料管上编号，然后依次将标准品(0-100 ng/mL)、质控血清 (I、II)和检测样品血清各取200μL加入到相应的试管中；(2)每管先后加入[125 I] 孕酮200 μL和抗孕酮抗体200 μL，混匀后放37℃水浴温育30 min；(3)每管加入PEG-第二抗体1 mL ，充分混匀，离心3 000 r/min 30 min，弃上清，用γ-计数器测量各管沉淀物的 放射性强度。质控I：(1.0±0.25)nmol/L，质控II：(12.4±3.2)nmol/L。
三、统计学处理：
配对t检验和非配对t检验。
结 果
(一)早孕外周血与蜕膜组织淋巴细胞中NK亚群的比较：蜕膜组织中的NK细胞以CD56 + 为优势，占51.22%；而早孕周围血中的NK细胞以CD56+CD16+和CD16+为主，分别占10. 75%和10.43%。早孕外周血CD16+值明显高于蜕膜组织。见表1。
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表1 早孕外周血与蜕膜组织淋巴细胞中
NK细胞亚群的百分率
Tab 1 The percentage of NK cellular subtypes in peripheral
blood lymphocytes and decidual cells of early pregnancies(
±s,%)Phenotype
Early pregnancy
PB(n=10)
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Decidua
(n=10)
CD56+CD16-
3.70±1.74**
5 1.22±21.04
CD56+CD16+
10.75±5.10
6.89±3.58
CD56-CD16+
10.43±5.28**
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3.95±2.78
**P<0.01, vs decidua group
(二)正常早孕与非孕外周血淋巴细胞中NK亚群的比较：早孕组CD56+明显低于非孕 组，其CD56+CD16+的百分率略高于非孕组，其CD16+百分率明显高于非孕组。见表2。
表2 正常非孕与早孕外周血淋巴细胞中NK细胞的百分率
Tab 2 The percentage of NK cellular subcytes in peripheral blo od lymphocytes of normal non-pregnancies and early pregnancies (
±s, %), http://www.100md.com
Group
n
E2(pmol/L)
P4(nmol/L)
CD56+CD16-
CD56+CD16+
CD56-CD16+
EPPB
10
2320.40±865.26
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20.37±6.11
3.70±1.74
10.75±5.10
10.43±5.28
NNPPB
12
462.03±243.20**
7.10±3.86**
5.4 9±2.08*
8.03±3.70
6.61±3.35**
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NNPPB为P4>2.30 nmol/L *P<0.05, **P<0.01, vs EPPB group
三、非孕外周血不同孕酮值淋巴细胞中NK亚群的比较：P4>2.30 nmol/L组的CD56+ ，CD56+CD16+及CD16+ 百分率均明显高于P4<2.30 nmol/L组。
表3 非孕外周血不同孕酮值淋巴细胞中NK细胞的百分率
Tab 3 The percentage of NK cellular subcytes in non-pregnancies peripheral blood between different value of progesterone (
±s,%), 百拇医药
Group
n
E2(pmol/L)
CD56+CD16-
CD56+CD16+
CD56-CD16+
P4<2.30nmol/L
7
274.74±1 47.46
2.21±0.59
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3.46±1.33
3.65±1.52
P4>2.30nmol/L
12
462.03±243.20
5.49±2.08*
8.03± 3.70**
6.61±3.35#
*P<0.05, **P<0.01, vs P4<2.30nmol/L group
讨 论
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NK细胞是机体抗感染抗肿瘤的第一道防线，它可分为3种不同的亚群，即CD56+CD16-， CD56+CD16+，CD56-CD16+。Chao 等[3] 报道早孕蜕膜组织淋巴细胞以CD5 6+NK细胞最丰富，占40～50%，而在外周血中其含量甚少。本研究检测结果：CD56+NK 细胞在早孕外周血中仅占3.7%，而在早孕蜕膜组织中占51.22%，与Chao等[3] 报道 的结果基本一致。Inoue等[4] 报道，在分泌晚期和早孕期，CD56+/CD16-/CD3 -大颗粒淋巴细胞在宫内膜增加；在孕酮、E2、垂体泌乳素(PRL)和绒毛膜促性腺激素 (HCG)存在下，分别培养宫内膜白细胞和外周血单个核细胞6d，然后富集细胞并进行免疫 细胞化学检查。CD56+的百分率在用孕酮的宫内膜白细胞组明显高于无孕酮组。而E2、P RL和HCG在宫内膜白细胞中诱导CD56+细胞无显著性差异。因此，孕酮对宫内膜的CD56+ 大颗粒淋巴细胞的增殖和分化有重要作用。目前认为人类正 常蜕膜NK细胞表面含有杀伤抑制性受体(killer inhibitory receptors，KIRs)和杀伤活 化性受体(killer activatory receptors，KARs)，且以抑制性受体为主，负责转递抑制信 号，阻止NK细胞的活化作用[5] 。King等[6] 认为蜕膜CD56+NK样细胞 杀伤活性低于外周血NK细胞的杀伤活性，这可能是因为外周血的NK细胞以CD56+CD16+， CD56-CD16+为主的结果。由此推论，正常蜕膜中CD56+NK细胞膜上可能主要含有KIRs ，以保护胚胎免受母体免疫系统的排斥。
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Sarachi等[7] 认为E2可提高NK细胞的增殖，E2是NK大颗粒淋巴细胞的激活 剂。Ho等[8]认为，随着雌、孕激素水平的升高，外周血淋巴细胞膜上CD56+CD16 +NK细胞的百分率也随之增加。而在我们的研究结果中，正常生育年龄非孕妇女的外周血 中的E2对NK细胞各亚群的增 殖影响不大，但孕酮水平却能显著影响外周血淋巴细胞CD56和CD16膜受体的合成，使二者均 明显增加。本研究结果进一步提示：在早孕组外周血CD56+CD16+与正常非孕组比较无明 显变 化，这是因为孕酮增加到一定程度，使外周血CD56+CD16+亚群达到饱和状态，此后无论 孕酮 增加多少，CD56+CD16+的百分率也不发生明显变化；CD56+细胞是CD16+细胞的前体 ，在早孕 组，外周血CD56+明显低于非孕组，而CD16+却明显高于非孕组，可能是由于雌、孕激素 水平的急剧升高，促进外周血CD56+细胞向CD16+细胞转化，从而减少外周血CD56膜受体 的含量。CD16+NK细胞可通过抗体依赖细胞介导的细胞毒(antibody dependent cell-med iated cytotoxicity, ADCC)效应启动NK细胞的杀伤功能[9] 。因此，作者认为在 早孕期，外周血CD16+NK细胞亚群的增加，可防御细菌及病毒等有害物质从外周血入侵到 母胎界面和胎儿体内，有利于胎盘的形成，使妊娠继续。
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参考文献
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4 Inoue T, Kanzaki H, Imai K, et al. Progesterone stimulates the ind u ction of human endometrial CD56+ lymphocytes in an in vitro culture system. J Clin Endocrinol Metab， 1996, 81(4):1502.
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7 Sarachi K, Kumagai S, Sugita M, et al. Enhancing effect of 17-beta- estradiol on human NK cell activity. Immunol Lett， 1993,36(1):31 .
8 Ho HN, Chao KH, Chen CK, et al. Activation status of T and NK cells in the endometrium throughout menstrual cycle and normal and abnormal early pre gnancy. Human Immunol， 1996,49:130.
9 Ryan JC, Turck J, Niemi EC, et al. Molecular cloning of the NK1.1 a ntigen, a member of the NKR-P1 family of natural killer cell activation molecule s. J Immunol， 1992,149(5):1631.
(1999年1月12日收稿，1999年3月29日修回), http://www.100md.com