中药海乐得对部分肾切除大鼠残余肾脏表达PAI-1、TGFβ mRNA的影响*
作者：李岩 陈香美 张颖 叶一舟 师锁柱 于力方
单位：李岩 陈香美 张颖 叶一舟 师锁柱 于力方 中国人民解放军总医院肾科 (北京 100853)
关键词：纤溶酶原灭活剂；转化生长因子β；中草药
中国病理生理杂志/990706 摘 要 目的：观察中药制剂海乐得对5/6肾切 除(5/6NX) 大鼠残余肾组织表达纤溶酶原激活物抑制物-1(Plasminogen activator inhibitor-l， PAI -l) 、转化生长因子β(transforming growth factor-β，TGFβ)的影响。方法：海乐得治疗5/6肾切除大鼠6周后处死，检测尿蛋白排泄和血生化变化，制作残肾组织病 理和冰冻切片，提取残余肾脏组织RNA，分别采用组织原位杂交及Northern印记杂交方法观 察PAI-l、TGFβ的基因表达。结果：中药治疗组残肾组织中PAI-l和TGFβ mRNA表达、尿蛋白排泄、血清 尿素氮和肌酐均明显低于未治疗组，肾脏病理损害以及脂代谢紊乱亦有明显改善。 结论：海乐得通过PAI-l和TGFβ途径，能明显改善慢性肾功能衰竭大鼠的肾功能和 病理损伤。
, 百拇医药
Effects of HaiLeDe on mRNA expressions of PAI-l and TGFβ
in the rat remnant kidney
LI Yan, CHEN Xiang-Mei, ZHANG Ying, YE Yi-Zhou, SHI Suo-Zhu, YU Li-Fang
Department of Nephrology, General Hospital of Chinese PLA, Beijing(100853 )
Abstract AIM：To explore effects of Traditional Chinese Medic in e(TCM) prescription HaiLeDe on the mRNA expression of plasminogen activator inh ibitor-l(PAI-l) and transforming growth factor-β(TGFβ) in the remnant kidney o f Wistar rats with 5/6 nephrectomy.METHODS： The Wistar rats with 5 /6 nephrectomy were administered HaiLeDe for six weeks and then sacrificed. Prot einuria and serum biochemical parameters were examined. Expressions of PAI-l and TGFβ mRNAs in the remnant kidney of the rats with 5/6 nephrectomy were determined by in situ hybridization and Northern blot hybridization analy sis. RESULTS：The mRNA expressions of PAI-l and TGFβ genes were signif icantly increased in the renal tissue of 5/6 nephrectomized rats and the treatme nt with HaiLeDe markedly decreased the mRNA expressions of PAI-l and TGFβ genes. P roteinuria, blood urea nitrogen, serum creatinine, triglyceride and glom erular hypertrophy and sclerosis were also redu ced significantly in the 5/6 nephrectomized rats treated with HaiLeDe compared w ith those in the non-treated group. CONCLUSION：The therapeutic effec ts of HaiLeDe on the 5/6 nephrectomized rats may be partially attributed to its d own-regulation of PAI-l and TGFβ gene expressions.
, 百拇医药
MeSH Plasminogen inactivators; Transforming growth factor, be ta; Drugs, Chinese herbal
大鼠肾脏部分切除后，残存的肾脏通常呈代偿性改变，导致肾小球肥大，继而出现高血压、蛋白尿、肾小管间质纤维化、单核细胞浸润、肾小球硬化等多种病理改变。有研究表明，在肾脏部分切除后，残余肾脏中TGFβ表达明显增高[1]，而T GFβ在细胞外基质(extracellular matrix, ECM)的积聚过程中起着重要的作用。PAI-l是纤 溶酶原激活物(PA)/纤溶酶系统中一个重要调节因子，也是ECM降解的一个关键抑制因子，因 而在ECM积聚和肾小球硬化过程中起着重要作用。文献报道肾脏放射性损伤以及增殖性肾炎 模型中PAI-l mRNA表达明显增高，原位杂交结果提示，PAI-l的表达与肾脏损伤呈正相关 [2]。本文采用5/6肾切除大鼠模型，利用原位杂交、Northern印迹杂交技术检测了 残余肾脏中PAI-l及TGFβ mRNA表达，观察了中药制剂海乐得对上述指标的影响。
, 百拇医药
材料与方法
(一)动物：雌性Wistar大鼠30只，体重180～200 g，由本医院实验动物中心提供。
(二)药品及试剂：海乐得(HLD)胶囊由海乐得研究课题组提供。批号为：9700624；9700626 ；9700 628(实验用三批等量混合物)。处方组成主要为水蛭、当归、生地、党参等。本品功能： 活 血化瘀，健脾化浊，补气养血。RNAzolTMB，美国Tel Test Inc产品。PAI-l原位 杂交探针制备，将PAI-l cDNA片断(3-256)碱 基序列(253bp)亚克隆至Bluescript 11SK质粒中，宝灵 曼公司DIG RNA Labeling Kit(SP6/T7)标记 cRNA探针。TGFβ、三磷酸甘油醛脱氢 酶(GAPDH)cDNA探针由美国Vanderbilt大学lchikawa教授惠赠。同位素标记试剂盒Stratagen 公司产品。
, 百拇医药 (三)动物分组及给药方式：适应性喂养1周后，随机分成3组：(1)假手术组(sham)：(2)5/6N X组；( 3)5/6NX+海乐得组，每组8只。5/6NX组、5/6NX+海乐得组行5/6肾切除。5/6NX+海乐得组按 22 g/kg体重给药，术后2周开始喂药，治疗6周，给药方式用蒸镏水配成1.1 g/mL浓度的混悬液，混于动物饮水中喂食(详细记录动物的饮水量及剩余量，并根 据情况调整其饮水量以保证动物实际饮药量不低于22g.kg-1.d-1)。
(四)动物模型制备：大鼠用硫贲妥钠(50 mg/kg ip)麻醉，俯卧位固定于鼠台上，暴露肾脏 ，剥离肾包膜，切除肾脏的上、下约占左肾的2/3。1周后，在脊柱右侧中1/3旁1.5～2 cm 行纵行切口(切口位略高于左侧)，切除右侧肾脏。假手术组只作肾包膜剥离，不作肾脏切除 。
(五)实验标本的留取：海乐得治疗6周后，留取24 h尿，测定尿蛋白； 称体重，乙醚轻麻， 眼眶内取血，分离血清，剖开腹腔取出残余肾脏，分别留取光镜切片、冰冻切片样品，制备 RNA样品。
, http://www.100md.com
(六)血生化指标的测定：7150型自动生化分析仪测定血尿素氮(BUN)、肌酐(SCr)、胆固醇(C H)、甘油三酯(TG)、血红蛋白(Hb)检测用光电比色法。
(七)平均肾小球面积测定：于每张病理切片上选测12个完整肾小球，顺序由皮质到髓质，其 中皮质及髓质部分别选测6个，12个肾小球面积中去除一个最大值，去除一个最小值，最后 均数为平均肾小球面积。假手术、对照和海乐得治疗三组，每组均检测8个样本。操作程序 为：于计算机启动图像分析系统，将病理切片图像输入，用鼠标沿肾小球毛细血管丛描画出整个肾小球，经计算机自动处理后，给出所描画的肾小球的面积。
(八)组织原位杂交：冰冻切片，多聚甲醛固定，PBS洗涤，蛋白酶K消化，PBS洗涤，再经多 聚甲醛固定，稀酸处理后，PAI-l cRNA探针杂交42℃过夜，梯度SSC，RNaseA,梯度SSC，碱 性磷酸酶标记(1：1000稀释)1～2 h，NBT系统发色，封片观察结果。
, 百拇医药
(九)Northern印迹杂交：取肾组织50～100 mg，RNAzolTMB一步法提取总RNA。紫外 分光光度计进行RNA定量。上样25 μg电泳，转膜，紫外固定。用随机引物法掺入[3 2P]-dCTP,分别标记TGFβ、GAPDH探针。65℃预杂交2 h后，65℃杂交过夜。60℃洗 膜15 min，放射自显影12～36 h。
(十)统计处理：数据用
±s表示，数据处理采用方差分析和q检验。
结 果
大鼠5/6肾切除后6周，5/6NX组的尿蛋白排泄率明显高于假手术组(n=8，P <0.01)，而5/6NX+海乐得组的尿蛋白排泄率明显低于5/6NX组(n=8，P<0.05) 。大鼠5/6肾切除后肾小球面积明显大于假手术组(n=8，P<0.01)，而5/6NX+海 乐得组与5/6NX组比较有显著差异(n=8，P<0.05)，见图1和图2。
, 百拇医药
Fig 1 The effect of HLD(HaiLeDe) on urine protein excretion r ate of 5/6NX rats
P<0.01，vs sham;▲P<0.05，vs 5/6NX
图1 海乐得对5/6NX大鼠尿蛋白排泄率的影响
Fig 2 The effect of HLD on the mean glomerular area of 5/6NX rats
P<0.01，vs sham; △P<0.05，vs 5/6NX
图2 海乐得对5/6NX大鼠平均肾小球面积的影响
, 百拇医药
大鼠5/6肾切除后，光镜下观察，其肾脏组织出现明显的肾小球系膜增殖、系膜 硬化、纤维素样渗出、间质病变，而海乐得治疗组大鼠肾脏上述损伤均明显改善。PAI-l原 位杂交结果显示，大鼠5/6肾切除6周后，海乐得治疗组大鼠PAI-l在肾小球内及血管壁的表 达也低于未治疗组。
表1 海乐得对5/6NX大鼠血红蛋白、血清肌酸酐、血尿素氮、胆固醇和甘 油三酯的影响
Tab 1 Effects of HaiLeDe(HLD) on Hb, SCr, BUN, CH and TG of 5/6NX rats Group
n
Hb(g/L)
sCr (μmol/L)
BUN(mmol/L)
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CH(mmol/L)
TG(mmol/L)
Sham
8
181.75±4.03
45 .99±2.30
5.95±0.79
1.51±0.21
0.970.33
5/6NX
8
158.71±4.07*
, http://www.100md.com
96.48±13.92**
1 9.62±3.02**
2.94±0.99**
1.44±0.57**
5/6NX+HLD
8
173.68±10.06▲
77.45±12.46▲
15.69±3.70 ▲
2.11±0.32
, 百拇医药
0.95±0.45▲▲
*P<0.05，**P<0.01，vs sham group；▲P <0.05, ▲▲P<0.01，vs 5/6NX group；Hb＝hemoglobin; SCr= se rum creatinine; BUN=blood urea nitrogen; CH=cholesterol; TG=triglyceride
大鼠5/6肾切除6周后，Hb明显低于假手术组，而血肌酐、尿素氮及甘油三酯水平显著高 于假 手术组；海乐得+5/6NX组与5/6NX，Hb明显高于5/6NX组，血肌酐、尿素氮及甘油三酯显著低 于5/6NX组，结果详见表1。
Northern印迹杂交结果显示，海乐得治疗组大鼠残余肾组织中TGFβ mRNA的表达比未治 疗组也减少。图3所示为各组大鼠(n=2)肾组织Northern印迹杂交及其图象分析结果。
, 百拇医药
Fig 3 The effect of HLD on the mRNA expression of TGFβ in th e rat remnant kidney tissue 1,2: 5/6NX; 3，4：Sham; 5,6: 5/6NX+HLD
图3 海乐得对5/6NX大鼠6周残肾组织TGFβ mRNA的影响
讨 论
系膜基质合成与降解的失衡是导致肾小球硬化的主要因素之一。TGFβ能促进系膜基 质的合成，抑制蛋白水解酶活性，是导致细胞外基质积聚的主要细胞因子[3]。PA /纤溶酶系统在细胞外基质降解中起着重要的作用，PAI-l是PA/纤溶酶系统中重要的调控因 子，PAI-l的增加能显著抑制细胞外基质降解酶的活性。肾脏部分切除后，氧自由基的产生 也明显增多[4]，氧自由基的增多对于PAI-l的mRNA的表达增高起着重要的促进作 用[5]。大鼠5/6肾切除后与正常大鼠肾脏相比，残肾组织中的TGFβ和PAI-l的基 因表达均增加。
, 百拇医药
依传统中医理论，大鼠5/6肾切除后应属肾之精气亏虚，因虚致瘀，气化不利，而致痰湿内 聚，冲斥于脏腑。而海乐得正是以水蛭活血化淤为君，辅以当时、党参、陈皮等补肾益气、 化痰、降浊之药制成的中药制剂。水蛭始载于《神农本草经》，是经典的破血逐瘀类中药， 其主要有效成分水蛭素是迄今为止发现的最强的天然凝血酶拮抗剂，而当归、陈皮、党参等 药伍用取香砂六君汤之养胃化痰、降逆之意。前期的研究证实，单方水蛭即可明显的减低蛋 白尿，降低血胆固醇及甘油三酯[6]。本研究进一步证实，水蛭复方制剂不仅具有 上述疗效特点，而且还可以对残肾组织中的TGFβ、PAI-l mRNA表达有下调作用。这一结果 提示海乐得可能通过抑制TGFβ、PAI-l mRNA表达等途径减轻肾损害、延缓肾小球硬化的发生。
参考文献
1 Wu LL, Cox A, Roe CJ, et al. Transforming growth factor bet al and renal injury following subtotal nephrectomy in the rat: role of the reni n-angiotensin system. Kidney Int, 1997,51:1553.
, 百拇医药
2 Oikawa T, Freeman M, Lo W, et al. Modulation of plasminogen activator inhibitor-in vivo: a new mechanism for the anti-fibrotic effect of renin-angiot ensin inhibition. Kidney Int, 1997,51:164.
3 Border WA, Noble NA, Yamamoto T, et al. Antagonists of transforming gr owth factor-β:A novel approach to treatment of glomerulonephritis and preventi on of glomerulosclerosis. Kidney Int,1992,41:566.
4 Harris DC, Chan L, Schrier RW, et al. Remnant kidney hypermetabolism a nd progression chronic renal failure. Am J Physiol,1988,254:267.
, http://www.100md.com
5 Ceriello A, Curcio F, Dello Russo P, et al. The defence against free r adicals protects endothelial cells from hyperglycaemia-induced plasminogen activ ation inhibitor-l over-production. Blood Coagul Fibrinol, 1995,6(2):133.
6 董 柯，陈香美，汤 力，等.水蛭对系膜增殖性肾炎蛋白尿、脂质代谢及凝血 机制的影响.中华内科杂志，1995，34：250.
(1997年10月15日收稿，1999年元月29日修回), http://www.100md.com
单位：李岩 陈香美 张颖 叶一舟 师锁柱 于力方 中国人民解放军总医院肾科 (北京 100853)
关键词：纤溶酶原灭活剂；转化生长因子β；中草药
中国病理生理杂志/990706 摘 要 目的：观察中药制剂海乐得对5/6肾切 除(5/6NX) 大鼠残余肾组织表达纤溶酶原激活物抑制物-1(Plasminogen activator inhibitor-l， PAI -l) 、转化生长因子β(transforming growth factor-β，TGFβ)的影响。方法：海乐得治疗5/6肾切除大鼠6周后处死，检测尿蛋白排泄和血生化变化，制作残肾组织病 理和冰冻切片，提取残余肾脏组织RNA，分别采用组织原位杂交及Northern印记杂交方法观 察PAI-l、TGFβ的基因表达。结果：中药治疗组残肾组织中PAI-l和TGFβ mRNA表达、尿蛋白排泄、血清 尿素氮和肌酐均明显低于未治疗组，肾脏病理损害以及脂代谢紊乱亦有明显改善。 结论：海乐得通过PAI-l和TGFβ途径，能明显改善慢性肾功能衰竭大鼠的肾功能和 病理损伤。
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Effects of HaiLeDe on mRNA expressions of PAI-l and TGFβ
in the rat remnant kidney
LI Yan, CHEN Xiang-Mei, ZHANG Ying, YE Yi-Zhou, SHI Suo-Zhu, YU Li-Fang
Department of Nephrology, General Hospital of Chinese PLA, Beijing(100853 )
Abstract AIM：To explore effects of Traditional Chinese Medic in e(TCM) prescription HaiLeDe on the mRNA expression of plasminogen activator inh ibitor-l(PAI-l) and transforming growth factor-β(TGFβ) in the remnant kidney o f Wistar rats with 5/6 nephrectomy.METHODS： The Wistar rats with 5 /6 nephrectomy were administered HaiLeDe for six weeks and then sacrificed. Prot einuria and serum biochemical parameters were examined. Expressions of PAI-l and TGFβ mRNAs in the remnant kidney of the rats with 5/6 nephrectomy were determined by in situ hybridization and Northern blot hybridization analy sis. RESULTS：The mRNA expressions of PAI-l and TGFβ genes were signif icantly increased in the renal tissue of 5/6 nephrectomized rats and the treatme nt with HaiLeDe markedly decreased the mRNA expressions of PAI-l and TGFβ genes. P roteinuria, blood urea nitrogen, serum creatinine, triglyceride and glom erular hypertrophy and sclerosis were also redu ced significantly in the 5/6 nephrectomized rats treated with HaiLeDe compared w ith those in the non-treated group. CONCLUSION：The therapeutic effec ts of HaiLeDe on the 5/6 nephrectomized rats may be partially attributed to its d own-regulation of PAI-l and TGFβ gene expressions.
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MeSH Plasminogen inactivators; Transforming growth factor, be ta; Drugs, Chinese herbal
大鼠肾脏部分切除后，残存的肾脏通常呈代偿性改变，导致肾小球肥大，继而出现高血压、蛋白尿、肾小管间质纤维化、单核细胞浸润、肾小球硬化等多种病理改变。有研究表明，在肾脏部分切除后，残余肾脏中TGFβ表达明显增高[1]，而T GFβ在细胞外基质(extracellular matrix, ECM)的积聚过程中起着重要的作用。PAI-l是纤 溶酶原激活物(PA)/纤溶酶系统中一个重要调节因子，也是ECM降解的一个关键抑制因子，因 而在ECM积聚和肾小球硬化过程中起着重要作用。文献报道肾脏放射性损伤以及增殖性肾炎 模型中PAI-l mRNA表达明显增高，原位杂交结果提示，PAI-l的表达与肾脏损伤呈正相关 [2]。本文采用5/6肾切除大鼠模型，利用原位杂交、Northern印迹杂交技术检测了 残余肾脏中PAI-l及TGFβ mRNA表达，观察了中药制剂海乐得对上述指标的影响。
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材料与方法
(一)动物：雌性Wistar大鼠30只，体重180～200 g，由本医院实验动物中心提供。
(二)药品及试剂：海乐得(HLD)胶囊由海乐得研究课题组提供。批号为：9700624；9700626 ；9700 628(实验用三批等量混合物)。处方组成主要为水蛭、当归、生地、党参等。本品功能： 活 血化瘀，健脾化浊，补气养血。RNAzolTMB，美国Tel Test Inc产品。PAI-l原位 杂交探针制备，将PAI-l cDNA片断(3-256)碱 基序列(253bp)亚克隆至Bluescript 11SK质粒中，宝灵 曼公司DIG RNA Labeling Kit(SP6/T7)标记 cRNA探针。TGFβ、三磷酸甘油醛脱氢 酶(GAPDH)cDNA探针由美国Vanderbilt大学lchikawa教授惠赠。同位素标记试剂盒Stratagen 公司产品。
, 百拇医药 (三)动物分组及给药方式：适应性喂养1周后，随机分成3组：(1)假手术组(sham)：(2)5/6N X组；( 3)5/6NX+海乐得组，每组8只。5/6NX组、5/6NX+海乐得组行5/6肾切除。5/6NX+海乐得组按 22 g/kg体重给药，术后2周开始喂药，治疗6周，给药方式用蒸镏水配成1.1 g/mL浓度的混悬液，混于动物饮水中喂食(详细记录动物的饮水量及剩余量，并根 据情况调整其饮水量以保证动物实际饮药量不低于22g.kg-1.d-1)。
(四)动物模型制备：大鼠用硫贲妥钠(50 mg/kg ip)麻醉，俯卧位固定于鼠台上，暴露肾脏 ，剥离肾包膜，切除肾脏的上、下约占左肾的2/3。1周后，在脊柱右侧中1/3旁1.5～2 cm 行纵行切口(切口位略高于左侧)，切除右侧肾脏。假手术组只作肾包膜剥离，不作肾脏切除 。
(五)实验标本的留取：海乐得治疗6周后，留取24 h尿，测定尿蛋白； 称体重，乙醚轻麻， 眼眶内取血，分离血清，剖开腹腔取出残余肾脏，分别留取光镜切片、冰冻切片样品，制备 RNA样品。
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(六)血生化指标的测定：7150型自动生化分析仪测定血尿素氮(BUN)、肌酐(SCr)、胆固醇(C H)、甘油三酯(TG)、血红蛋白(Hb)检测用光电比色法。
(七)平均肾小球面积测定：于每张病理切片上选测12个完整肾小球，顺序由皮质到髓质，其 中皮质及髓质部分别选测6个，12个肾小球面积中去除一个最大值，去除一个最小值，最后 均数为平均肾小球面积。假手术、对照和海乐得治疗三组，每组均检测8个样本。操作程序 为：于计算机启动图像分析系统，将病理切片图像输入，用鼠标沿肾小球毛细血管丛描画出整个肾小球，经计算机自动处理后，给出所描画的肾小球的面积。
(八)组织原位杂交：冰冻切片，多聚甲醛固定，PBS洗涤，蛋白酶K消化，PBS洗涤，再经多 聚甲醛固定，稀酸处理后，PAI-l cRNA探针杂交42℃过夜，梯度SSC，RNaseA,梯度SSC，碱 性磷酸酶标记(1：1000稀释)1～2 h，NBT系统发色，封片观察结果。
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(九)Northern印迹杂交：取肾组织50～100 mg，RNAzolTMB一步法提取总RNA。紫外 分光光度计进行RNA定量。上样25 μg电泳，转膜，紫外固定。用随机引物法掺入[3 2P]-dCTP,分别标记TGFβ、GAPDH探针。65℃预杂交2 h后，65℃杂交过夜。60℃洗 膜15 min，放射自显影12～36 h。
(十)统计处理：数据用
±s表示，数据处理采用方差分析和q检验。结 果
大鼠5/6肾切除后6周，5/6NX组的尿蛋白排泄率明显高于假手术组(n=8，P <0.01)，而5/6NX+海乐得组的尿蛋白排泄率明显低于5/6NX组(n=8，P<0.05) 。大鼠5/6肾切除后肾小球面积明显大于假手术组(n=8，P<0.01)，而5/6NX+海 乐得组与5/6NX组比较有显著差异(n=8，P<0.05)，见图1和图2。
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Fig 1 The effect of HLD(HaiLeDe) on urine protein excretion r ate of 5/6NX rats
P<0.01，vs sham;▲P<0.05，vs 5/6NX
图1 海乐得对5/6NX大鼠尿蛋白排泄率的影响
Fig 2 The effect of HLD on the mean glomerular area of 5/6NX rats
P<0.01，vs sham; △P<0.05，vs 5/6NX
图2 海乐得对5/6NX大鼠平均肾小球面积的影响
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大鼠5/6肾切除后，光镜下观察，其肾脏组织出现明显的肾小球系膜增殖、系膜 硬化、纤维素样渗出、间质病变，而海乐得治疗组大鼠肾脏上述损伤均明显改善。PAI-l原 位杂交结果显示，大鼠5/6肾切除6周后，海乐得治疗组大鼠PAI-l在肾小球内及血管壁的表 达也低于未治疗组。
表1 海乐得对5/6NX大鼠血红蛋白、血清肌酸酐、血尿素氮、胆固醇和甘 油三酯的影响
Tab 1 Effects of HaiLeDe(HLD) on Hb, SCr, BUN, CH and TG of 5/6NX rats Group
n
Hb(g/L)
sCr (μmol/L)
BUN(mmol/L)
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CH(mmol/L)
TG(mmol/L)
Sham
8
181.75±4.03
45 .99±2.30
5.95±0.79
1.51±0.21
0.970.33
5/6NX
8
158.71±4.07*
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96.48±13.92**
1 9.62±3.02**
2.94±0.99**
1.44±0.57**
5/6NX+HLD
8
173.68±10.06▲
77.45±12.46▲
15.69±3.70 ▲
2.11±0.32
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0.95±0.45▲▲
*P<0.05，**P<0.01，vs sham group；▲P <0.05, ▲▲P<0.01，vs 5/6NX group；Hb＝hemoglobin; SCr= se rum creatinine; BUN=blood urea nitrogen; CH=cholesterol; TG=triglyceride
大鼠5/6肾切除6周后，Hb明显低于假手术组，而血肌酐、尿素氮及甘油三酯水平显著高 于假 手术组；海乐得+5/6NX组与5/6NX，Hb明显高于5/6NX组，血肌酐、尿素氮及甘油三酯显著低 于5/6NX组，结果详见表1。
Northern印迹杂交结果显示，海乐得治疗组大鼠残余肾组织中TGFβ mRNA的表达比未治 疗组也减少。图3所示为各组大鼠(n=2)肾组织Northern印迹杂交及其图象分析结果。
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Fig 3 The effect of HLD on the mRNA expression of TGFβ in th e rat remnant kidney tissue 1,2: 5/6NX; 3，4：Sham; 5,6: 5/6NX+HLD
图3 海乐得对5/6NX大鼠6周残肾组织TGFβ mRNA的影响
讨 论
系膜基质合成与降解的失衡是导致肾小球硬化的主要因素之一。TGFβ能促进系膜基 质的合成，抑制蛋白水解酶活性，是导致细胞外基质积聚的主要细胞因子[3]。PA /纤溶酶系统在细胞外基质降解中起着重要的作用，PAI-l是PA/纤溶酶系统中重要的调控因 子，PAI-l的增加能显著抑制细胞外基质降解酶的活性。肾脏部分切除后，氧自由基的产生 也明显增多[4]，氧自由基的增多对于PAI-l的mRNA的表达增高起着重要的促进作 用[5]。大鼠5/6肾切除后与正常大鼠肾脏相比，残肾组织中的TGFβ和PAI-l的基 因表达均增加。
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依传统中医理论，大鼠5/6肾切除后应属肾之精气亏虚，因虚致瘀，气化不利，而致痰湿内 聚，冲斥于脏腑。而海乐得正是以水蛭活血化淤为君，辅以当时、党参、陈皮等补肾益气、 化痰、降浊之药制成的中药制剂。水蛭始载于《神农本草经》，是经典的破血逐瘀类中药， 其主要有效成分水蛭素是迄今为止发现的最强的天然凝血酶拮抗剂，而当归、陈皮、党参等 药伍用取香砂六君汤之养胃化痰、降逆之意。前期的研究证实，单方水蛭即可明显的减低蛋 白尿，降低血胆固醇及甘油三酯[6]。本研究进一步证实，水蛭复方制剂不仅具有 上述疗效特点，而且还可以对残肾组织中的TGFβ、PAI-l mRNA表达有下调作用。这一结果 提示海乐得可能通过抑制TGFβ、PAI-l mRNA表达等途径减轻肾损害、延缓肾小球硬化的发生。
参考文献
1 Wu LL, Cox A, Roe CJ, et al. Transforming growth factor bet al and renal injury following subtotal nephrectomy in the rat: role of the reni n-angiotensin system. Kidney Int, 1997,51:1553.
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2 Oikawa T, Freeman M, Lo W, et al. Modulation of plasminogen activator inhibitor-in vivo: a new mechanism for the anti-fibrotic effect of renin-angiot ensin inhibition. Kidney Int, 1997,51:164.
3 Border WA, Noble NA, Yamamoto T, et al. Antagonists of transforming gr owth factor-β:A novel approach to treatment of glomerulonephritis and preventi on of glomerulosclerosis. Kidney Int,1992,41:566.
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(1997年10月15日收稿，1999年元月29日修回), http://www.100md.com