中国湖北汉族重症肌无力与HLA-Ⅱ类等位基因的关联
作者：龚非力 杨志章 熊平 徐金枝 徐勇 姜晓丹 吴雄文 S.Ferencik Yanj un Liu H.Grosse-Wilde
单位：
龚非力 杨志章 熊 平 徐金枝 徐 勇 姜晓丹 吴雄文 同济医科大学免疫学教研室(武汉 430030)；S.Ferencik Yanj un Liu H.Grosse-Wilde 德国ESSEN大学免疫学研究所
关键词：重症肌无力；HLA抗原；基因表达
中国病理生杂志/990702 摘 要 目的和方法：探讨中国湖北汉族重症肌无力(MG) 患者与HLA-Ⅱ类等位基因的关联。利用PCR/SSP和PCR-RFLP技术对湖北地区91例MG患者进行 HLA-Ⅱ类(HLA-DRB1、DQB1和DPB1)基因型别分析，并与168例正常个体比较。 结果：患者组(1)：HLA-DRB1*0901、DQB1*0303和DPB1*0501等位基因频 率明显高于对照组，RR值分别为4.12、3.04和3.01，P<0.01；(2)HLA-DPB1*0202 等位基因频率明显低于对照组，RR值为0.13，P<0.05。结论：中国 湖北汉族群体中MG与HLA-DRB1*0202、等位基因正关联，而与HLA-DPB1*0202等位基因呈 负关联，与白种人群相比，这种关联对中国湖北汉族MG病人来说是特有的。
, 百拇医药
Association of HLA class Ⅱ (DRB1/DQB1/DPB1) alleles and myasthenia
gravies in the Han nationality of Hubei province
GONG Fei-Li, YANG Zhi-Zhang, XIONG Ping, XU Jing-Zhi,XU Yong, JIANG Xiao-Dan, WU Xiong-Wen
Department of Immunology, Tongji Medical University, Wuhan(430030)
S.Ferencik, Yanjun Liu, H. Grosse-Wilde
Institute of Immunology, Essen University, Germany
, 百拇医药
Abstract：AIM：To investigate the association of polymorphism o f HLA class Ⅱ genes (DRB1/DQB1/DPB1) with myasthenia gravies(MG). METHODS：HLA class Ⅱ alleles of 91 patients with MG and that of 168 normal individuals of Han nationality of Hubei province were typed by using PC R/SSP and PCR/RFLP.RESULTS：(1) Gene frequencies of HLA-DRB1*090 1(RR=4.12, P<0.01), HLA-DQB10303(RR=3.04,P<0.01) and DPB1*0501(RR =1.22,P<0.01) are much higher in MG patients than in normal controls; (2) Gene frequencies of HLA-DPB1*0202(RR=0.12,P<0.05) are much lower in MG pa tients than in normal controls. CONCLUSION：There is a positive co rrelation between HLA-DRB1*0901、DQB1*0303、DPB1*0501 and MG. There is a nega tive correlation between HLA-DPB1*0202 and MG. These correlations are peculiar to MG patients of the Han nationality of Hubei province, as compared with Caucas ians.
, 百拇医药
MeSH：Myasthenia gravis; HLA antigens; Gene expression
重症肌无力(myasthenia gravis, MG)属于一种自身免疫病，患者体内 产生高水平抗乙酰胆碱受体(AchR)抗体，后者与骨骼肌运动终板上AchR结合，导致骨骼肌功 能障碍。本文借助多聚酶链式反应/序列特异性引物(polymerase chain reaction/ s equence specific primers, PCR/SSP)及PCR/RFLP技术对中国湖北汉族MG患者和正常人群进 行HLA-DRB1 、DQB1和DPB1基因多态性的群体分析，研究中国湖北汉族MG与HLA-Ⅱ类基因的相关性，以期 进一步探讨MG免疫学异常的机制，并为寻找MG的疾病易感基因提供线索。
材料与方法
(一)病例：MG患者91名，均为同济医科大学附属同济医院神经内科门诊病人；正常对照组16 8名，均为湖北省武汉市郊区献血员；二组年龄及性别分布相似，且均为湖北籍随机抽样个 体。
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(二)主要试剂：蛋白酶K、Taq聚合酶、琼脂糖(Boehringer Mannheim)，HLA-DRB1与HLA-DQB 1等位基因序列特异性引物(德国ESSEN大学Grosse-Wilde教授惠赠)，dNTP(Pharmacia)。
(三)模板制备：按改进的盐析法从外周血淋巴细胞提取基因组DNA，用紫外分光光度计(Shim adzu Ur-120-02)测定DNA含量及浓度，OD260nm/OD280nm须在1.6～1.8。
(四)用于HLA-DRB1、HLA-DQB1多态性分析的PCR/SSP技术[1]：
1.HLA-DRB1及HLA-DQB1等位基因特异性引物(SSP)：针对HLA-DRB1及DQB1第二外显子多态性 设 计SSP，其所扩增产物具有相应等位基因特异性，分型结果与血清学方法测得的HLA-DR及HLA -DQ表型具有对应关系。SSP只能与某一等位基因特异性片段的碱基序列互补性结合，从而可 通过PCR反应特异性地扩增该基因片段。
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2.PCR扩增体系的成分为：基因组DNA 50～100 ng、Taq酶0.5 U、dNTPs各200 μmol、SS P 2 pmol。PCR反应条件为：预变性94℃ 5 min，然后变性94℃ 30 s；退火65℃ 1 min；延 伸72℃ 1 min，共30个循环。
3.特异性扩增产物的检测：PCR产物经2%琼脂糖凝胶(含溴乙啶)电泳(条件为10～15 V/cm凝 胶，15 min)，经紫外透射在泳道中见明显DNA条带为阳性。
4.PCR反应假阴性和假阳性控制：每一个PCR反应中都含有一对扩增基因和一个保守基因(人 生长激素，350 bp)的引物，对这个保守基因的扩增有可能受到抑制，其作用是作为阳性质 控。
(五)HLA-DPB1的多态性分析采用PCR/RFLP技术：基因组DNA抽提后，DPB1基因第二外显子的P CR扩增，扩增产物的酶切消化，消化片段的电泳分离和显示等见参考文献[2]。DP B1基因第二外显子扩增引物核苷酸顺序如下：
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PB101N： 5’-GTGAAGCTTTCCCCGCAGAGAATTAC-3’
PB201： 5’-GTCGCGGCTCCACTCACTGACGTCCAC-3’
用于消化扩增产物的限制性内切酶为Bsp1286Ⅰ、FokⅠ、DdeⅠ、BsaJⅠ、BssHⅡ、Ctr13Ⅰ 、RsaⅠ、EcoNⅠ、AvaⅡ
(六)统计处理：采用直接计数法计算等位基因频率。相对危险性(relative risk, RR)按Woo lf公式计算：RR=ad/bc。式中a为群体中携带某一特定HLA型别的患者数；d为不携带某一 特定HLA型别的正常对照人数；b为不携带某一HLA型别的患者人数；c为携带某一特定HLA型 别的正常人数。RR值显著性检验采用精确概率P值法，并经校正(Pc)。P值的 计算按下列公式：
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Pc=P×等位基因个数
结 果
一、MG与HLA-DRB1等位基因的关联：
MG患者携带HLA-DRB1*0901等位基因频率明显高于正常组，RR值为4.12，差异显著( Pc<0.01)；DRB1*0301等位基因频率明显低于正常组，RR值为0.28，但经校正 后差异无显著(Pc>0.05)，结果见表1。
二、MG与HLA-DQB1等位基因的关联：
MG患者组HLA-DQB1*0303等位基因频率明显高于正常组，RR值为3.04，差异显著(Pc <0.000 1)；DQB1*0604等位基因频率明显低于正常组，RR值为0.063，经校正后差 异无显著(Pc>0.05)，结果见表2。
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三、MG与HLA-DPB1等位基因的关联：
MG患者组HLA-DPB1*0501等位基因频率明显高于正常组，RR值为3.01，差异显著(Pc <0.01)；DPB1*0202等位基因频率明显低于正常组，RR值为0.13，差异显著(Pc<0 .05) ，结果见表3。
讨 论
重症肌无力是一种典型的神经系统自身免疫性疾病，其发病机制尚未完全清楚。自70年代以 来，国内外均对MG与HLA表型的相关性进行了大量研究，其结果不完全一致[3～ 5]。随着分子生物学技术的发展，自80年代后期起，国外开始在基因水平分析HLA多态 性，并有多个实验组报道了MG与HLA-Ⅱ类等位基因型别存在关联[6～8]。国内迄 今尚无MG与HLA-Ⅱ类基因型别相关性的系统报告。
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本文作者借助PCR/SSP和PCR/RFLP技术分析湖北汉族MG患者与正常对照组HLA-Ⅱ基因多态性 ，结果发现MG患者HLA-DRB10901、DQB10303和DPB1*0501等位基因频率明显升高，其RR 值分别为4.12、3.04和3.01，差异有显著性。另外，MG患者HLA-DPB1*0202等位基因频 率降低，且RR值为0.13，经检验差异有显著性。上述结果表明，中国湖北汉族MG与HLA-DRB 1*0901、DQB1*0303和DPB1*0501有正关联，与HLA-DPB1*0202有负关联。
HLA各等位基因频率的分布格局随种族及地域差异，具有不同特点。HLA-DRB1*0901等位基 因在白种人中是一种频率较低的等位基因，但我们的调查结果显示，中国湖北汉族正常人群 中HLA-DRB1*0901基因频率为14%，而MG患者中该基因频率高达30.8%，存在明显关联；尤 其还发现6例MG患者为HLA-DRB1*0901纯合子个体。DQB1*0303基因频率在中国湖北汉族正 常人群中为18.4%，MG患者中为33.5%，亦存在明显关联。
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有关HLA与疾病关联的机制未完全弄清，根据早期的实验结果，一般认为关联现象的出现很 可能是由于特定的HLA等位基因与多基因疾病的易感基因之一处于连锁不平衡，故发生关联 的HLA等位基因仅是疾病易感基因的一种遗传标志。近年来，在对类风湿关节炎(rheumatoid arthritis, RA)与HLA关联的研究中发现，不同人种中RA与不同HLA-DRB1等位基因关联，但 这些不同型别的HLA-DRB1等位基因产物在肽链的特定位置具有相同的氨基酸序列，称为共同 表位(shared epitope)[9，10]。后者可能选择性结合致病性自身抗原多肽，将 其提呈给辅助性T细胞，从而诱发自身免疫病。因此，特定的HLA等位基因型别可能是疾病的 原发关联成分，甚至直接参与疾病的发生。
文献报道，白种人中MG与HLA-DRB1*0301和HLA-DQB1*0201关联，而我们在中国汉族中发现 MG与HLA-DRB1*0901和HLA-DQB1*0303关联。在不同人种中与MG关联的HLA-Ⅱ类等位基因型 别不同，是否也可能存在如同RA研究中所发现的共同表位，以及这一现象在MG发病中的意义 ，有待深入开展研究。
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表1 MG与HLA-DRB1等位基因的关联
Tab 1 Comparison of gene frequencies of HLA-DRB1
in MG patients and normal indiv iduals DRB1
Normal individuals
MG patients
RR
P
Pc
No.
GF
, 百拇医药
(n=336)
PF
(n=168)%
No.
GF
( n=182)
PF
(n=91)%
0101/4
16
0.048
9.5
3
, 百拇医药
0.016
3.3
150x
8
0.024
4.8
1501
38
0.113
22.0
22
0.120
24.2
, 百拇医药
1502
9
0.027
4.8
1
0.005
1.1
160x
3
0.009
1.8
1601
1
, 百拇医药
0.003
0.6
1602
8
0.024
4.8
9
0.049
9.9
0301
24
0.071
14.3
, http://www.100md.com
4
0.022
4.4
0.28
0.007 23
0.282
0302
3
0.009
1.8
1
0.005
1.1
, http://www.100md.com
040x
3
0.009
1.8
0401
8
0.024
4.8
2
0.011
2.2
0402
3
, 百拇医药
0.016
3.3
0403
3
0.009
1.8
0404
3
0.009
1.8
0405
12
0.036
, 百拇医药
7.2
3
0.016
3.3
0406
5
0.015
3.0
6
0.033
6.6
0408
2
, 百拇医药
0.006
1.2
0701
15
0.047
9.0
11
0.060
12.1
0801
5
0.015
3.0
, http://www.100md.com
1
0.005
1.1
0802/4
3
0.009
1.8
1
0.005
1.1
0803
16
0.048
, http://www.100md.com
9.5
10
0.064
11.0
0805-6
3
0.009
1.8
1
0.005
1.1
0901
47
, http://www.100md.com
0.140
26.8
56
0.308
54.9
4.12
2.35×10-5
9.41×10-4
1001
14
0.042
7.7
, http://www.100md.com
4
0.022
4.4
110x
6
0.018
3.6
1101
13
0.039
7.1
1
0.005
, http://www.100md.com
1.1
1102
2
0.006
1.2
1
0.005
1.1
1103/4
2
0.006
1.2
6
, http://www.100md.com
0.033
6.6
120x
1
0.003
0.6
1201
8
0.024
4.8
1
0.005
1.1
, http://www.100md.com
1202
11
0.033
6.5
14
0.077
15.4
2.6
<0.05
>0.05
130x
1
0.003
, http://www.100md.com
0.6
1301
4
0.012
2.4
1
0.005
1.1
1302
13
0.039
7.7
3
, 百拇医药
0.016
3.3
1303-4
5
0.015
3.0
3
0.016
3.3
1305
3
0.009
1.8
, 百拇医药
3
0.016
3.3
1401
13
0.039
7.7
7
0.038
7.7
1402
1
0.003
, http://www.100md.com
0.6
2
0.011
2.2
1403
1
0.003
0.6
1401-4
3
0.009
1.8
1
, http://www.100md.com
0.005
1.1
GF:gene frequency;PF:phenotype frequency
表2 MG与HLA-DQB1等位基因的关联
Tab 2 Comparison of gene frequencies of
HLA-DQB1 in normal individuals and MG pa tients DQB1
Normal individuals
MG patients
RR
, http://www.100md.com
P
Pc
No.
GF
(n=320)
P F
(n=160)%
No.
GF
(n =182)
PF
(n=91)%
0201
, 百拇医药
32
0.100
20.0
13
0.071
14.3
0301
60
0.188
35.0
28
0.154
30.7
, 百拇医药
0302
27
0.084
16.9
15
0.082
16.5
0303
59
0.184
36.9
61
0.335
, http://www.100md.com
58.2
3.04
2.53×10-6
4.05×10 -5
0304
1
0.003
0.6
0401
15
0.047
9.4
, 百拇医药
3
0.016
3.3
0402
5
0.016
3.1
4
0.022
4.4
0501
22
0.069
, 百拇医药
13.1
5
0.027
5.5
0502
22
0.069
13.1
15
0.082
16.5
0503
6
, http://www.100md.com
0.019
3.8
6
0.033
6.6
0504
2
0.006
1.3
0601
25
0.078
15.6
, http://www.100md.com
13
0.071
14.3
0602
24
0.075
15.0
15
0.082
16.5
0603
3
0.009
, 百拇医药
1.9
1
0.005
1.1
0604
17
0.053
10.6
2
0.011
2.2
0.063
8.78×10-3
, http://www.100md.com
0.14
0608
1
0.005
1
表3 MG与HLA-DPB1等位基因的关联
Tab 3 Comparison of gene frequencies
of HLA-DPB1 in MG patients and normal indiv iduals
Normal individuals in Han-Chinese
MG patients
, http://www.100md.com
RR
P
Pc
DPB1
alleles
No.
GF
( n=186)
PF
(n=93)%
No.
G F
(n=168)
, http://www.100md.com
PF
(n=84)%
0101
4
0.022
4.3
2
0.012
2.4
0201
26
0.140
25.5
, 百拇医药
26
0.155
27.4
0202
15
0.081
16.0
2
0.012
2.4
0.13
0.0013
0.02
, 百拇医药
0301
9
0.048
9.6
13
0.077
15.5
0401
28
0.151
24.0
16
0.095
, http://www.100md.com
16.7
0402
22
0.118
23.4
15
0.089
17.9
0501
58
0.312
53.1
70
, http://www.100md.com
0.417
71.4
3.01
0.001
0.01
0502
1
0.005
1.1
0801
1
0.005
1.1
, 百拇医药
2
0.012
2.4
0901
1
0.005
1.1
1001
4
0.022
4.3
3
0.018
, 百拇医药
3.6
1301
7
0.038
7.7
8
0.048
9.5
1401
2
0.011
2.1
3
, 百拇医药
0.018
3.6
1601
3
0.016
3.2
1701
2
0.011
2.1
6
0.036
7.1
, 百拇医药
1801
2
0.011
2.1
1
0.006
1.2
1901
1
0.005
1.1
1
0.006
, http://www.100md.com
1.2
国家自然科学基金资助(No.39470667)
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(1998年11月26日收稿，1999年3月16日修回), 百拇医药
单位：
龚非力 杨志章 熊 平 徐金枝 徐 勇 姜晓丹 吴雄文 同济医科大学免疫学教研室(武汉 430030)；S.Ferencik Yanj un Liu H.Grosse-Wilde 德国ESSEN大学免疫学研究所
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Association of HLA class Ⅱ (DRB1/DQB1/DPB1) alleles and myasthenia
gravies in the Han nationality of Hubei province
GONG Fei-Li, YANG Zhi-Zhang, XIONG Ping, XU Jing-Zhi,XU Yong, JIANG Xiao-Dan, WU Xiong-Wen
Department of Immunology, Tongji Medical University, Wuhan(430030)
S.Ferencik, Yanjun Liu, H. Grosse-Wilde
Institute of Immunology, Essen University, Germany
, 百拇医药
Abstract：AIM：To investigate the association of polymorphism o f HLA class Ⅱ genes (DRB1/DQB1/DPB1) with myasthenia gravies(MG). METHODS：HLA class Ⅱ alleles of 91 patients with MG and that of 168 normal individuals of Han nationality of Hubei province were typed by using PC R/SSP and PCR/RFLP.RESULTS：(1) Gene frequencies of HLA-DRB1*090 1(RR=4.12, P<0.01), HLA-DQB10303(RR=3.04,P<0.01) and DPB1*0501(RR =1.22,P<0.01) are much higher in MG patients than in normal controls; (2) Gene frequencies of HLA-DPB1*0202(RR=0.12,P<0.05) are much lower in MG pa tients than in normal controls. CONCLUSION：There is a positive co rrelation between HLA-DRB1*0901、DQB1*0303、DPB1*0501 and MG. There is a nega tive correlation between HLA-DPB1*0202 and MG. These correlations are peculiar to MG patients of the Han nationality of Hubei province, as compared with Caucas ians.
, 百拇医药
MeSH：Myasthenia gravis; HLA antigens; Gene expression
重症肌无力(myasthenia gravis, MG)属于一种自身免疫病，患者体内 产生高水平抗乙酰胆碱受体(AchR)抗体，后者与骨骼肌运动终板上AchR结合，导致骨骼肌功 能障碍。本文借助多聚酶链式反应/序列特异性引物(polymerase chain reaction/ s equence specific primers, PCR/SSP)及PCR/RFLP技术对中国湖北汉族MG患者和正常人群进 行HLA-DRB1 、DQB1和DPB1基因多态性的群体分析，研究中国湖北汉族MG与HLA-Ⅱ类基因的相关性，以期 进一步探讨MG免疫学异常的机制，并为寻找MG的疾病易感基因提供线索。
材料与方法
(一)病例：MG患者91名，均为同济医科大学附属同济医院神经内科门诊病人；正常对照组16 8名，均为湖北省武汉市郊区献血员；二组年龄及性别分布相似，且均为湖北籍随机抽样个 体。
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(二)主要试剂：蛋白酶K、Taq聚合酶、琼脂糖(Boehringer Mannheim)，HLA-DRB1与HLA-DQB 1等位基因序列特异性引物(德国ESSEN大学Grosse-Wilde教授惠赠)，dNTP(Pharmacia)。
(三)模板制备：按改进的盐析法从外周血淋巴细胞提取基因组DNA，用紫外分光光度计(Shim adzu Ur-120-02)测定DNA含量及浓度，OD260nm/OD280nm须在1.6～1.8。
(四)用于HLA-DRB1、HLA-DQB1多态性分析的PCR/SSP技术[1]：
1.HLA-DRB1及HLA-DQB1等位基因特异性引物(SSP)：针对HLA-DRB1及DQB1第二外显子多态性 设 计SSP，其所扩增产物具有相应等位基因特异性，分型结果与血清学方法测得的HLA-DR及HLA -DQ表型具有对应关系。SSP只能与某一等位基因特异性片段的碱基序列互补性结合，从而可 通过PCR反应特异性地扩增该基因片段。
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2.PCR扩增体系的成分为：基因组DNA 50～100 ng、Taq酶0.5 U、dNTPs各200 μmol、SS P 2 pmol。PCR反应条件为：预变性94℃ 5 min，然后变性94℃ 30 s；退火65℃ 1 min；延 伸72℃ 1 min，共30个循环。
3.特异性扩增产物的检测：PCR产物经2%琼脂糖凝胶(含溴乙啶)电泳(条件为10～15 V/cm凝 胶，15 min)，经紫外透射在泳道中见明显DNA条带为阳性。
4.PCR反应假阴性和假阳性控制：每一个PCR反应中都含有一对扩增基因和一个保守基因(人 生长激素，350 bp)的引物，对这个保守基因的扩增有可能受到抑制，其作用是作为阳性质 控。
(五)HLA-DPB1的多态性分析采用PCR/RFLP技术：基因组DNA抽提后，DPB1基因第二外显子的P CR扩增，扩增产物的酶切消化，消化片段的电泳分离和显示等见参考文献[2]。DP B1基因第二外显子扩增引物核苷酸顺序如下：
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PB101N： 5’-GTGAAGCTTTCCCCGCAGAGAATTAC-3’
PB201： 5’-GTCGCGGCTCCACTCACTGACGTCCAC-3’
用于消化扩增产物的限制性内切酶为Bsp1286Ⅰ、FokⅠ、DdeⅠ、BsaJⅠ、BssHⅡ、Ctr13Ⅰ 、RsaⅠ、EcoNⅠ、AvaⅡ
(六)统计处理：采用直接计数法计算等位基因频率。相对危险性(relative risk, RR)按Woo lf公式计算：RR=ad/bc。式中a为群体中携带某一特定HLA型别的患者数；d为不携带某一 特定HLA型别的正常对照人数；b为不携带某一HLA型别的患者人数；c为携带某一特定HLA型 别的正常人数。RR值显著性检验采用精确概率P值法，并经校正(Pc)。P值的 计算按下列公式：
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Pc=P×等位基因个数
结 果
一、MG与HLA-DRB1等位基因的关联：
MG患者携带HLA-DRB1*0901等位基因频率明显高于正常组，RR值为4.12，差异显著( Pc<0.01)；DRB1*0301等位基因频率明显低于正常组，RR值为0.28，但经校正 后差异无显著(Pc>0.05)，结果见表1。
二、MG与HLA-DQB1等位基因的关联：
MG患者组HLA-DQB1*0303等位基因频率明显高于正常组，RR值为3.04，差异显著(Pc <0.000 1)；DQB1*0604等位基因频率明显低于正常组，RR值为0.063，经校正后差 异无显著(Pc>0.05)，结果见表2。
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三、MG与HLA-DPB1等位基因的关联：
MG患者组HLA-DPB1*0501等位基因频率明显高于正常组，RR值为3.01，差异显著(Pc <0.01)；DPB1*0202等位基因频率明显低于正常组，RR值为0.13，差异显著(Pc<0 .05) ，结果见表3。
讨 论
重症肌无力是一种典型的神经系统自身免疫性疾病，其发病机制尚未完全清楚。自70年代以 来，国内外均对MG与HLA表型的相关性进行了大量研究，其结果不完全一致[3～ 5]。随着分子生物学技术的发展，自80年代后期起，国外开始在基因水平分析HLA多态 性，并有多个实验组报道了MG与HLA-Ⅱ类等位基因型别存在关联[6～8]。国内迄 今尚无MG与HLA-Ⅱ类基因型别相关性的系统报告。
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本文作者借助PCR/SSP和PCR/RFLP技术分析湖北汉族MG患者与正常对照组HLA-Ⅱ基因多态性 ，结果发现MG患者HLA-DRB10901、DQB10303和DPB1*0501等位基因频率明显升高，其RR 值分别为4.12、3.04和3.01，差异有显著性。另外，MG患者HLA-DPB1*0202等位基因频 率降低，且RR值为0.13，经检验差异有显著性。上述结果表明，中国湖北汉族MG与HLA-DRB 1*0901、DQB1*0303和DPB1*0501有正关联，与HLA-DPB1*0202有负关联。
HLA各等位基因频率的分布格局随种族及地域差异，具有不同特点。HLA-DRB1*0901等位基 因在白种人中是一种频率较低的等位基因，但我们的调查结果显示，中国湖北汉族正常人群 中HLA-DRB1*0901基因频率为14%，而MG患者中该基因频率高达30.8%，存在明显关联；尤 其还发现6例MG患者为HLA-DRB1*0901纯合子个体。DQB1*0303基因频率在中国湖北汉族正 常人群中为18.4%，MG患者中为33.5%，亦存在明显关联。
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有关HLA与疾病关联的机制未完全弄清，根据早期的实验结果，一般认为关联现象的出现很 可能是由于特定的HLA等位基因与多基因疾病的易感基因之一处于连锁不平衡，故发生关联 的HLA等位基因仅是疾病易感基因的一种遗传标志。近年来，在对类风湿关节炎(rheumatoid arthritis, RA)与HLA关联的研究中发现，不同人种中RA与不同HLA-DRB1等位基因关联，但 这些不同型别的HLA-DRB1等位基因产物在肽链的特定位置具有相同的氨基酸序列，称为共同 表位(shared epitope)[9，10]。后者可能选择性结合致病性自身抗原多肽，将 其提呈给辅助性T细胞，从而诱发自身免疫病。因此，特定的HLA等位基因型别可能是疾病的 原发关联成分，甚至直接参与疾病的发生。
文献报道，白种人中MG与HLA-DRB1*0301和HLA-DQB1*0201关联，而我们在中国汉族中发现 MG与HLA-DRB1*0901和HLA-DQB1*0303关联。在不同人种中与MG关联的HLA-Ⅱ类等位基因型 别不同，是否也可能存在如同RA研究中所发现的共同表位，以及这一现象在MG发病中的意义 ，有待深入开展研究。
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表1 MG与HLA-DRB1等位基因的关联
Tab 1 Comparison of gene frequencies of HLA-DRB1
in MG patients and normal indiv iduals DRB1
Normal individuals
MG patients
RR
P
Pc
No.
GF
, 百拇医药
(n=336)
PF
(n=168)%
No.
GF
( n=182)
PF
(n=91)%
0101/4
16
0.048
9.5
3
, 百拇医药
0.016
3.3
150x
8
0.024
4.8
1501
38
0.113
22.0
22
0.120
24.2
, 百拇医药
1502
9
0.027
4.8
1
0.005
1.1
160x
3
0.009
1.8
1601
1
, 百拇医药
0.003
0.6
1602
8
0.024
4.8
9
0.049
9.9
0301
24
0.071
14.3
, http://www.100md.com
4
0.022
4.4
0.28
0.007 23
0.282
0302
3
0.009
1.8
1
0.005
1.1
, http://www.100md.com
040x
3
0.009
1.8
0401
8
0.024
4.8
2
0.011
2.2
0402
3
, 百拇医药
0.016
3.3
0403
3
0.009
1.8
0404
3
0.009
1.8
0405
12
0.036
, 百拇医药
7.2
3
0.016
3.3
0406
5
0.015
3.0
6
0.033
6.6
0408
2
, 百拇医药
0.006
1.2
0701
15
0.047
9.0
11
0.060
12.1
0801
5
0.015
3.0
, http://www.100md.com
1
0.005
1.1
0802/4
3
0.009
1.8
1
0.005
1.1
0803
16
0.048
, http://www.100md.com
9.5
10
0.064
11.0
0805-6
3
0.009
1.8
1
0.005
1.1
0901
47
, http://www.100md.com
0.140
26.8
56
0.308
54.9
4.12
2.35×10-5
9.41×10-4
1001
14
0.042
7.7
, http://www.100md.com
4
0.022
4.4
110x
6
0.018
3.6
1101
13
0.039
7.1
1
0.005
, http://www.100md.com
1.1
1102
2
0.006
1.2
1
0.005
1.1
1103/4
2
0.006
1.2
6
, http://www.100md.com
0.033
6.6
120x
1
0.003
0.6
1201
8
0.024
4.8
1
0.005
1.1
, http://www.100md.com
1202
11
0.033
6.5
14
0.077
15.4
2.6
<0.05
>0.05
130x
1
0.003
, http://www.100md.com
0.6
1301
4
0.012
2.4
1
0.005
1.1
1302
13
0.039
7.7
3
, 百拇医药
0.016
3.3
1303-4
5
0.015
3.0
3
0.016
3.3
1305
3
0.009
1.8
, 百拇医药
3
0.016
3.3
1401
13
0.039
7.7
7
0.038
7.7
1402
1
0.003
, http://www.100md.com
0.6
2
0.011
2.2
1403
1
0.003
0.6
1401-4
3
0.009
1.8
1
, http://www.100md.com
0.005
1.1
GF:gene frequency;PF:phenotype frequency
表2 MG与HLA-DQB1等位基因的关联
Tab 2 Comparison of gene frequencies of
HLA-DQB1 in normal individuals and MG pa tients DQB1
Normal individuals
MG patients
RR
, http://www.100md.com
P
Pc
No.
GF
(n=320)
P F
(n=160)%
No.
GF
(n =182)
PF
(n=91)%
0201
, 百拇医药
32
0.100
20.0
13
0.071
14.3
0301
60
0.188
35.0
28
0.154
30.7
, 百拇医药
0302
27
0.084
16.9
15
0.082
16.5
0303
59
0.184
36.9
61
0.335
, http://www.100md.com
58.2
3.04
2.53×10-6
4.05×10 -5
0304
1
0.003
0.6
0401
15
0.047
9.4
, 百拇医药
3
0.016
3.3
0402
5
0.016
3.1
4
0.022
4.4
0501
22
0.069
, 百拇医药
13.1
5
0.027
5.5
0502
22
0.069
13.1
15
0.082
16.5
0503
6
, http://www.100md.com
0.019
3.8
6
0.033
6.6
0504
2
0.006
1.3
0601
25
0.078
15.6
, http://www.100md.com
13
0.071
14.3
0602
24
0.075
15.0
15
0.082
16.5
0603
3
0.009
, 百拇医药
1.9
1
0.005
1.1
0604
17
0.053
10.6
2
0.011
2.2
0.063
8.78×10-3
, http://www.100md.com
0.14
0608
1
0.005
1
表3 MG与HLA-DPB1等位基因的关联
Tab 3 Comparison of gene frequencies
of HLA-DPB1 in MG patients and normal indiv iduals
Normal individuals in Han-Chinese
MG patients
, http://www.100md.com
RR
P
Pc
DPB1
alleles
No.
GF
( n=186)
PF
(n=93)%
No.
G F
(n=168)
, http://www.100md.com
PF
(n=84)%
0101
4
0.022
4.3
2
0.012
2.4
0201
26
0.140
25.5
, 百拇医药
26
0.155
27.4
0202
15
0.081
16.0
2
0.012
2.4
0.13
0.0013
0.02
, 百拇医药
0301
9
0.048
9.6
13
0.077
15.5
0401
28
0.151
24.0
16
0.095
, http://www.100md.com
16.7
0402
22
0.118
23.4
15
0.089
17.9
0501
58
0.312
53.1
70
, http://www.100md.com
0.417
71.4
3.01
0.001
0.01
0502
1
0.005
1.1
0801
1
0.005
1.1
, 百拇医药
2
0.012
2.4
0901
1
0.005
1.1
1001
4
0.022
4.3
3
0.018
, 百拇医药
3.6
1301
7
0.038
7.7
8
0.048
9.5
1401
2
0.011
2.1
3
, 百拇医药
0.018
3.6
1601
3
0.016
3.2
1701
2
0.011
2.1
6
0.036
7.1
, 百拇医药
1801
2
0.011
2.1
1
0.006
1.2
1901
1
0.005
1.1
1
0.006
, http://www.100md.com
1.2
国家自然科学基金资助(No.39470667)
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(1998年11月26日收稿，1999年3月16日修回), 百拇医药