口腔唾液富组蛋白抗菌及中和内毒素活性
作者：杨美薷 罗海燕 吴 琦 王伯瑶
单位：华西医科大学口腔内科教研室、感染免疫研究室 (成都 610041)
关键词：
口腔唾液富组蛋白抗菌及中和内毒素活性 唾液构成牙齿和口腔软组织的化学环境，与口腔健康密切相关。现已分离纯化出40多种唾液蛋白，其中发现多种抗菌成分，如溶菌酶、乳铁蛋白、唾液过氧化物酶、分泌型IgA等。新近发现一类小分子阳离子抗菌肽特别引人注目。因其分子富含组氨酸，故称之为富组蛋白(histatins)。本文用制备性酸性尿素聚丙烯酰胺凝胶电泳(AU-PAGE)，从健康成人刺激性唾液中分离纯化了3种主要富组蛋白，即HRP-1、-3和-5。经Tricine-SDS-PAGE分析所得分子均为单一条带，说明纯度很高，其分子量3～5 kD。分离纯化富组蛋白的方法很多，本试验采用制备性AU-PAGE分离纯化富组蛋白，具有分辨率高、操作简便、纯化效率 好等特点，但该法获得率不太高，有待改进。采用琼脂糖弥散抗菌试验显示3种富组蛋白对变形链球菌和金色葡萄球菌均有抗菌活性；对大肠杆菌和绿脓杆菌，HRP-3和HRP-5有明显抗菌活性，而HRP-1无抗菌活性。其抗菌活性随浓度增高而增大。HRP-3和HRP-5的抗菌活性强于HRP-1。3种主要富组蛋白对革兰氏阴性专性和兼性厌氧的牙周可疑致病杆病，在本检测系统中均未显示抗菌活性。
采用Wesphal热酚水法提取牙龈卟啉菌(47-A)和具核梭杆菌临床分离株的LPS，并用酶消化法配合超速离心进行纯化。采用鲎试验试管法观察了HRP-5对LPS的中和作用。结果显示两株菌的LPS在浓度≥1 ng/mL时，均显示较强鲎活性，与标准大肠杆菌LPS的鲎活性相似。HRP-5 (10 μg/mL)对牙龈卟啉菌、具核梭杆菌和大肠杆菌LPS(1 ng/mL)的鲎活性，均具相同的抑制作用。本试验提示唾液富组蛋白可能通过中和牙周可疑致病杆菌的内毒素，在维护牙周健康上发挥一定作用。, 百拇医药
单位：华西医科大学口腔内科教研室、感染免疫研究室 (成都 610041)
关键词：
口腔唾液富组蛋白抗菌及中和内毒素活性 唾液构成牙齿和口腔软组织的化学环境，与口腔健康密切相关。现已分离纯化出40多种唾液蛋白，其中发现多种抗菌成分，如溶菌酶、乳铁蛋白、唾液过氧化物酶、分泌型IgA等。新近发现一类小分子阳离子抗菌肽特别引人注目。因其分子富含组氨酸，故称之为富组蛋白(histatins)。本文用制备性酸性尿素聚丙烯酰胺凝胶电泳(AU-PAGE)，从健康成人刺激性唾液中分离纯化了3种主要富组蛋白，即HRP-1、-3和-5。经Tricine-SDS-PAGE分析所得分子均为单一条带，说明纯度很高，其分子量3～5 kD。分离纯化富组蛋白的方法很多，本试验采用制备性AU-PAGE分离纯化富组蛋白，具有分辨率高、操作简便、纯化效率 好等特点，但该法获得率不太高，有待改进。采用琼脂糖弥散抗菌试验显示3种富组蛋白对变形链球菌和金色葡萄球菌均有抗菌活性；对大肠杆菌和绿脓杆菌，HRP-3和HRP-5有明显抗菌活性，而HRP-1无抗菌活性。其抗菌活性随浓度增高而增大。HRP-3和HRP-5的抗菌活性强于HRP-1。3种主要富组蛋白对革兰氏阴性专性和兼性厌氧的牙周可疑致病杆病，在本检测系统中均未显示抗菌活性。
采用Wesphal热酚水法提取牙龈卟啉菌(47-A)和具核梭杆菌临床分离株的LPS，并用酶消化法配合超速离心进行纯化。采用鲎试验试管法观察了HRP-5对LPS的中和作用。结果显示两株菌的LPS在浓度≥1 ng/mL时，均显示较强鲎活性，与标准大肠杆菌LPS的鲎活性相似。HRP-5 (10 μg/mL)对牙龈卟啉菌、具核梭杆菌和大肠杆菌LPS(1 ng/mL)的鲎活性，均具相同的抑制作用。本试验提示唾液富组蛋白可能通过中和牙周可疑致病杆菌的内毒素，在维护牙周健康上发挥一定作用。, 百拇医药