人气管粘膜上皮细胞的抗菌活性
作者：黄宁 吴琦 唐彬 王伯瑶
单位：华西医科大学病生教研室、感染免疫研究室(成都 610041)
关键词：
中国病理生理杂志990874 新近报道牛纤毛柱状上皮细胞表达抗菌肽β-防御素，人气管上皮细胞是否分泌β-防御素尚存疑。本文对气液界面培养的人气管上皮细胞的抗菌活性和人支气管肺泡灌洗液抗菌多肽进行了分析。用低温酶消化法获取健康成人新鲜气管粘膜上皮细胞，采用气液界面无血清培养方式培养，一周后用PBS反复冲洗套皿及底层24 孔板，撤去培养基内的抗生素，继续培养，并每隔48 h收集套皿内上清及底层培养基。采用琼脂糖弥散法检测其抗菌活性。结果显示培养细胞呈现复层生长，细胞角蛋白免疫组化染色呈阳性反应，可确认为气管上皮细胞。抗菌实验显示培养细胞上清对绿脓杆菌有明显的抗菌活性。随着底层培养基中NaCl浓度的增高，杀菌环直径逐渐减小，当NaCl浓度分别为0、20、40、80、160、320 mmol/L时，杀菌环直径分别为12、11.5、10、9、4.5、3 mm。无血清细胞培养基和套皿下层培养基对绿脓杆菌无抗菌活性。正常成人支气管肺泡灌洗液经离心去除沉淀，以分子截流量3500的透析袋于4℃透析48 h，冷冻干燥。溶于0.01%乙酸备用。酸性尿素聚丙烯酰胺凝胶电泳显示支气管肺泡灌洗液中有一阳离子性多肽，其迁徙率明显高于溶菌酶和α-防御素。应用电泳凝胶/琼脂糖凝胶弥散法鉴定抗菌蛋白条带，结果显示这一阳离子多肽对绿脓杆菌呈现很强的抗菌活性(相应蛋白条带复盖处呈现无菌落生长的透明带)，此外在相当于溶菌酶和α防御素的迁徙率处，也出现相应的抗菌条带。当抗菌实验底层培养基中含145 mmol/L NaCl(即生理盐水)时，溶菌酶和α-防御素的抗菌活性消失，而人支气管肺泡灌洗液阳离子多肽仍有一定抗菌活性。当底层培养基中NaCl浓度增加至3倍生理盐水时，其抗菌活性消失。本实验结果提示人支气管肺泡灌洗液中除了含溶菌酶和来自人中性粒细胞的α-防御素外，还有另类阳离子性极强的小肽介导人气管上皮细胞的抗菌作用。, 百拇医药
单位：华西医科大学病生教研室、感染免疫研究室(成都 610041)
关键词：
中国病理生理杂志990874 新近报道牛纤毛柱状上皮细胞表达抗菌肽β-防御素，人气管上皮细胞是否分泌β-防御素尚存疑。本文对气液界面培养的人气管上皮细胞的抗菌活性和人支气管肺泡灌洗液抗菌多肽进行了分析。用低温酶消化法获取健康成人新鲜气管粘膜上皮细胞，采用气液界面无血清培养方式培养，一周后用PBS反复冲洗套皿及底层24 孔板，撤去培养基内的抗生素，继续培养，并每隔48 h收集套皿内上清及底层培养基。采用琼脂糖弥散法检测其抗菌活性。结果显示培养细胞呈现复层生长，细胞角蛋白免疫组化染色呈阳性反应，可确认为气管上皮细胞。抗菌实验显示培养细胞上清对绿脓杆菌有明显的抗菌活性。随着底层培养基中NaCl浓度的增高，杀菌环直径逐渐减小，当NaCl浓度分别为0、20、40、80、160、320 mmol/L时，杀菌环直径分别为12、11.5、10、9、4.5、3 mm。无血清细胞培养基和套皿下层培养基对绿脓杆菌无抗菌活性。正常成人支气管肺泡灌洗液经离心去除沉淀，以分子截流量3500的透析袋于4℃透析48 h，冷冻干燥。溶于0.01%乙酸备用。酸性尿素聚丙烯酰胺凝胶电泳显示支气管肺泡灌洗液中有一阳离子性多肽，其迁徙率明显高于溶菌酶和α-防御素。应用电泳凝胶/琼脂糖凝胶弥散法鉴定抗菌蛋白条带，结果显示这一阳离子多肽对绿脓杆菌呈现很强的抗菌活性(相应蛋白条带复盖处呈现无菌落生长的透明带)，此外在相当于溶菌酶和α防御素的迁徙率处，也出现相应的抗菌条带。当抗菌实验底层培养基中含145 mmol/L NaCl(即生理盐水)时，溶菌酶和α-防御素的抗菌活性消失，而人支气管肺泡灌洗液阳离子多肽仍有一定抗菌活性。当底层培养基中NaCl浓度增加至3倍生理盐水时，其抗菌活性消失。本实验结果提示人支气管肺泡灌洗液中除了含溶菌酶和来自人中性粒细胞的α-防御素外，还有另类阳离子性极强的小肽介导人气管上皮细胞的抗菌作用。, 百拇医药