大鼠β-防御素rBD-1基因在皮肤和肾脏固有表达
作者：吴琦 黄宁 唐彬 陈新年 王伯瑶
单位：华西医科大学感染免疫研究室、病生教研室(成都610041)
关键词：
中国病理生理杂志990855 设计大鼠β-防御素rBD-1 cDNA序列一对特异引物：R1 5′→3′ ACTCTGGACCCTGACTTTCACCG；R2 5′→3′CCCTTGCTTGTCCTTTATGTCC。根据大鼠β-actin cDNA序列设计一对阳性对照特异引物：B1 5′→3′AGCTGAGAGGGAAATCGTGCG；B2 5′→3′GTGCCACCAGACAGCACTGTG。引物由Gibco公司合成。从Wistar大鼠皮肤、肾脏、气管、子宫颈、膀胱、小肠、脾脏、骨骼肌、骨髓及腮腺组织中提取总RNA，行RT-PCR扩增，其扩增产物纯化后，连接至pGEM-T easy载体，转化宿主菌JM109，进行亚克隆筛。用上述rBD-1引物作RT-PCR，在10种受检测的器官组织RNA中，只有皮肤和肾脏获得长度272bp的特异性片段，表明rBD-1基因在皮肤和肾脏中固有表达，而在气管、子宫颈、膀胱、小肠、脾脏、骨骼肌、骨髓及腮腺等8种器官组织中没有检测到rBD-1基因表达信号。用阳性对照β-actin特异引物作RT-PCR，在10种受检测的器官组织RNA中，均扩增出长度为300bp的片段，与预计扩增片段大小相符，表明本实验提取的RNA无降解，实验结果可靠。RT-PCR扩增片段经亚克隆后，进行DNA序列测定，获得rBD-1之cDNA序列，推导其编码的氨基酸序列，借助Genbank中BLAST程序将rBD-1的氨基酸序列与人β-防御素hBD-1和hBD-2之氨基酸序列作类似性分析，结果表明rBD-1与hBD-1氨基酸残基相同率为50%(34/68)。rBD-1的成熟分子中含β-防御素共同的保守氨基酸及6个典型的半胱氨酸残基。人β-防御素hBD-1于1995年发现并证明主要在肾脏表达，后经深入研究表明它广泛表达于人体的粘膜及腺体上皮细胞。本实验显示大鼠β-防御素-1在肾脏和皮肤这两种组织均有显著表达。大鼠是常用的实验动物，科研中经常要损伤其皮肤(如手术)，或切断鼠尾采血，即使不做特殊处理，这些操作一般也不致发生感染，这或许和其皮肤能表达大量具有抗菌活性的β-防御素有关。皮肤是保护机体的重要天然屏障，但它通常只被看作对病原微生物起机械阻挡作用，这种观念有必要重新加以评估。, 百拇医药
单位：华西医科大学感染免疫研究室、病生教研室(成都610041)
关键词：
中国病理生理杂志990855 设计大鼠β-防御素rBD-1 cDNA序列一对特异引物：R1 5′→3′ ACTCTGGACCCTGACTTTCACCG；R2 5′→3′CCCTTGCTTGTCCTTTATGTCC。根据大鼠β-actin cDNA序列设计一对阳性对照特异引物：B1 5′→3′AGCTGAGAGGGAAATCGTGCG；B2 5′→3′GTGCCACCAGACAGCACTGTG。引物由Gibco公司合成。从Wistar大鼠皮肤、肾脏、气管、子宫颈、膀胱、小肠、脾脏、骨骼肌、骨髓及腮腺组织中提取总RNA，行RT-PCR扩增，其扩增产物纯化后，连接至pGEM-T easy载体，转化宿主菌JM109，进行亚克隆筛。用上述rBD-1引物作RT-PCR，在10种受检测的器官组织RNA中，只有皮肤和肾脏获得长度272bp的特异性片段，表明rBD-1基因在皮肤和肾脏中固有表达，而在气管、子宫颈、膀胱、小肠、脾脏、骨骼肌、骨髓及腮腺等8种器官组织中没有检测到rBD-1基因表达信号。用阳性对照β-actin特异引物作RT-PCR，在10种受检测的器官组织RNA中，均扩增出长度为300bp的片段，与预计扩增片段大小相符，表明本实验提取的RNA无降解，实验结果可靠。RT-PCR扩增片段经亚克隆后，进行DNA序列测定，获得rBD-1之cDNA序列，推导其编码的氨基酸序列，借助Genbank中BLAST程序将rBD-1的氨基酸序列与人β-防御素hBD-1和hBD-2之氨基酸序列作类似性分析，结果表明rBD-1与hBD-1氨基酸残基相同率为50%(34/68)。rBD-1的成熟分子中含β-防御素共同的保守氨基酸及6个典型的半胱氨酸残基。人β-防御素hBD-1于1995年发现并证明主要在肾脏表达，后经深入研究表明它广泛表达于人体的粘膜及腺体上皮细胞。本实验显示大鼠β-防御素-1在肾脏和皮肤这两种组织均有显著表达。大鼠是常用的实验动物，科研中经常要损伤其皮肤(如手术)，或切断鼠尾采血，即使不做特殊处理，这些操作一般也不致发生感染，这或许和其皮肤能表达大量具有抗菌活性的β-防御素有关。皮肤是保护机体的重要天然屏障，但它通常只被看作对病原微生物起机械阻挡作用，这种观念有必要重新加以评估。, 百拇医药