TNFα对血管内皮细胞PDGF-B链基因转录的影响
作者：李健 沈传陆 王小明 郭恒怡 吴其夏
单位：中国协和医科大学基础医学院病理生理室(北京 100005)
关键词：
中国病理生理杂志990843 TNFα主要由巨噬细胞、T细胞和NK细胞产生，是一种在急、慢性炎症过程中均有重要作用的炎症介质。动脉粥样硬化(AS)是以动脉壁内皮结构、功能损害和平滑肌细胞增殖变化为主的慢性炎症过程。AS时TNFα合成增多，且与AS的严重程度成正比。PDGF是以二聚体(AA，BB和AB)形式存在的促分裂剂。其中，PDGF-B链由PDGF-B链基因编码，该基因mRNA在AS血管内皮细胞中表达明显增高。因此，研究在TNFα作用下，血管内皮细胞PDGF-B链基因表达调控的分子机制对于阐明动脉粥样硬化的发病机制具有重要意义。目的：本实验旨在确定人PDGF-B链基因上TNFα诱导反应元件的位置。方法：用限制性内切酶和PCR等方法对PDGF-B链基因5’上游序列进行定向删切，构建了一系列含人PDGF-B链基因不同上游序列的荧光素酶报告基因质粒。以培养的HUVEC和EVC304内皮细胞株为材料，用LipofectaminTM法转染细胞。将构建的质粒pSIS-1758/+43 Luc、pSIS-189/+43 Luc和pSIS-84/+43 Luc分别与内对照质粒pSV-β-Gal共转染培养的内皮细胞，用200 U/mL TNFα分别处理转染内皮细胞18 h，收集细胞裂解物，检测荧光素酶和β-半乳糖苷酶活性，计算荧光素酶的比活性。结果：在PDGF-B链基因上游序列-1758/+43 bp和-189/+43 bp存在下，TNFα可使转染HUVEC荧光素酶表达量较对照组明显增加，前者对照组为3.43±0.01，TNFα组5.41±0.24，P<0.05 vs control；后者对照组为4.30±0.01，TNFα组7.15±0.88，P<0.01， vs control。而在PDGF-B链基因上游序列-84/+43 bp存在时，转染HUVEC荧光素酶表达量显著降低，对照组1.72±0.55，TNFα组1.90±0.69。两组无明显差异。同种方法转染EVC304内皮细胞株，结果一致。结论：TNFα促进内皮细胞PDGF-B链基因表达依赖该基因上游序列-189/+43 bp的存在，即在-189/+43 bp范围内可能存在TNFα诱导反应的顺式调控元件。, 百拇医药
单位：中国协和医科大学基础医学院病理生理室(北京 100005)
关键词：
中国病理生理杂志990843 TNFα主要由巨噬细胞、T细胞和NK细胞产生，是一种在急、慢性炎症过程中均有重要作用的炎症介质。动脉粥样硬化(AS)是以动脉壁内皮结构、功能损害和平滑肌细胞增殖变化为主的慢性炎症过程。AS时TNFα合成增多，且与AS的严重程度成正比。PDGF是以二聚体(AA，BB和AB)形式存在的促分裂剂。其中，PDGF-B链由PDGF-B链基因编码，该基因mRNA在AS血管内皮细胞中表达明显增高。因此，研究在TNFα作用下，血管内皮细胞PDGF-B链基因表达调控的分子机制对于阐明动脉粥样硬化的发病机制具有重要意义。目的：本实验旨在确定人PDGF-B链基因上TNFα诱导反应元件的位置。方法：用限制性内切酶和PCR等方法对PDGF-B链基因5’上游序列进行定向删切，构建了一系列含人PDGF-B链基因不同上游序列的荧光素酶报告基因质粒。以培养的HUVEC和EVC304内皮细胞株为材料，用LipofectaminTM法转染细胞。将构建的质粒pSIS-1758/+43 Luc、pSIS-189/+43 Luc和pSIS-84/+43 Luc分别与内对照质粒pSV-β-Gal共转染培养的内皮细胞，用200 U/mL TNFα分别处理转染内皮细胞18 h，收集细胞裂解物，检测荧光素酶和β-半乳糖苷酶活性，计算荧光素酶的比活性。结果：在PDGF-B链基因上游序列-1758/+43 bp和-189/+43 bp存在下，TNFα可使转染HUVEC荧光素酶表达量较对照组明显增加，前者对照组为3.43±0.01，TNFα组5.41±0.24，P<0.05 vs control；后者对照组为4.30±0.01，TNFα组7.15±0.88，P<0.01， vs control。而在PDGF-B链基因上游序列-84/+43 bp存在时，转染HUVEC荧光素酶表达量显著降低，对照组1.72±0.55，TNFα组1.90±0.69。两组无明显差异。同种方法转染EVC304内皮细胞株，结果一致。结论：TNFα促进内皮细胞PDGF-B链基因表达依赖该基因上游序列-189/+43 bp的存在，即在-189/+43 bp范围内可能存在TNFα诱导反应的顺式调控元件。, 百拇医药