糖皮质激素受体减少对严重烫伤大鼠体内炎症介质水平的影响
作者：林海 肖素芳 林忠清 林雪怡 宋屿娜 姜夕玲
单位：(解放军福州医学高等专科学校，福建 福州 350003)
关键词：受体，糖皮质激素；炎症；综合征；烧伤
中国病理生理杂志000117
[摘 要] 目的：阐明糖皮质激素受体(GR)减少对严重烫伤大鼠体内几种炎症介质水平的影响。方法：以RU38486阻断严重烫伤大鼠体内的GR，观察其血浆磷脂酶A2(PLA2)活性、肿瘤坏死因子α(TNFα)和丙二醛(MDA)含量以及脏器组织匀浆中PLA2活性和MDA含量变化。结果：烫伤后8 h，大鼠血浆及肺、肾组织匀浆中PLA2活性、MDA和TNF含量均明显高于假处理对照组(P<0.01)；烫伤复合GR阻断组以上效应更显著(P<0.01，P<0.05)。结论：烫伤复合GR阻断可导致大鼠体内炎症介质释放增多，提示GR在烫伤中具有明显的抗炎作用。
, 百拇医药
[中图分类号] K 318.04 [文献标识码] A
[文章编号]1000-4718(2000)01-0060-03
The effect of glucocorticoid receptor on level of inflammatory media in rats after critical scald
LIN Hai, XIAO Su-fang, LIN Zhong-qing, LIN Xue-yi, SONG Yu-na, JIANG Xi-lin
(Fuzhou Military Medical College, Fuzhou 350003，China)
[Abstract] AIM:To further elaborate the effect of glucocorticoid receptor(GR) decrease on level of inflammatory media in rats after critical scald.METHOD：The changes of phospholipase A2(PLA2) activity and concentrations of tumor necrosis factor alpha (TNFα) and malondialdehyde (MDA), the product of lipid peroxidation metabolism in plasma and tissue homogenate have been studied in scalded rats with or without GR blockade by RU38486.RESULTS：The PLA2 activity and the concentrations of TNFα and MDA in plasma and homogenate of pulmonary and renal tissue in scalded rats were significantly higher than those in the controls(P<0.01) and further increased in scalded rats accompanied with GR blockade (P<0.01 or P<0.05).CONCLUSION：Blockade of GR might aggravate the increase of inflammatory mediator caused by scalding. It suggested that GR might potentiate anti-inflammation in scald.
, http://www.100md.com
[MeSH] Receptors, glucocorticoid; Inflammation; Syndrome;Burns
林海等[1]曾报道，阻断糖皮质激素受体(glucocorticoid receptor, GR)可明显加重烫伤后大鼠肺、肾血管壁通透性升高，并提高其功能衰竭的发生率，提示烫伤后GR减少可能参与了烫伤后全身炎症反应综合征(systemic inflammatory response syndrome, SIRS)甚至多器官功能障碍综合征(multiple organ dysfunction sysdrome ,MODS)的发生。为进一步证实烫伤后GR减少的这种效应，本实验观察阻断GR对烫伤大鼠血浆磷脂酶A2(phospholipase A2, PLA2)活性、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor， TNFα)和脂质过氧化代谢产物丙二醛(malondialdehyde, MDA)含量以及肺、肾组织匀浆中PLA2活性、MDA含量的影响。
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材 料 和 方 法
一、 主要试剂：
RU38486(法国Roussel-Uclaf公司产品)以麻油配制成10 g/L，TNF测定试剂盒(军事医学科学院邦定生物医学公司产品)，MDA测定试剂盒(暨南大学医学院病理生理教研室提供)。
二、动物分组：
雄性SD大鼠26只(上海西普尔一必凯实验动物有限公司提供，由于RU38486又是孕激素受体阻断剂，故实验全部选用雄性动物)，体重220～280 g，随机分4组。(1)假处理对照组(n=6)；肌肉注射麻油2 mL/kg， 1 h后行假烫伤(背部浸入37℃水中10 s)；(2)单纯阻断假处理组(n=6)；按20 mg/kg肌肉注射RU38486，GR的阻断率为80%左右[2]。1 h后假烫伤动物，方法同假处理对照组；(3)烫伤对照组(n=7)；肌肉注射麻油2 mL/kg，1 h后将大鼠背部皮肤于95℃水中烫10 s，造成30% TBSA Ⅲ度烫伤(经病理组织切片证实)；(4)烫伤+GR阻断组(n=7)：按20 mg/kg肌肉注射RU38486，1 h后烫伤动物，方法同烫伤对照组。
, 百拇医药
三、实验方法：
以上动物经不同处理后，均饲养8 h，20%乌拉坦(0.75 mL/kg ip)麻醉下颈动脉插管，取血、分离血浆，随后开胸、开腹，留取肺和肾组织。
(一)PLA2活性测定方法：参照文献[3]方法，以37℃条件下每分钟、每毫升血浆或组织匀浆上清液反应过程中消耗1 nmol盐酸为1个PLA2活性单位(即：1U＝1 nmol.mL-1.min-1)。
(二)血液及组织匀浆中MDA含量测定方法：取肺、肾组织各0.5 g，加入PBS 5 mL匀浆、离心(4000 r/min×10 min)，留取上清液；血浆和组织匀浆MDA含量测定严格按试剂盒说明书进行。
(三)血浆TNF含量测定：严格按照试剂盒说明书进行。
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四、统计处理：
所有实验结果以均数±标准差(
±s)表示，并用t检验做组间差异的显著检验。
结 果
一、GR阻断对烫伤大鼠血浆及组织匀浆中PLA2活性的影响：
烫伤8 h后，大鼠血浆及肺、肾组织匀浆PLA2活性十分显著高于假处理对照组(P<0.01)，复合GR阻断组各值均明显高于烫伤对照组(血液和肾：P<0.05)，肺：P<0.01)(表1)。
二、GR阻断对烫伤大鼠血浆及组织匀浆中MDA含量的影响：
烫伤8 h后，大鼠血浆及肺、肾组织匀浆MDA含量非常明显高于假处理对照组(P<0.01)，复合GR阻断组各值均明显高于烫伤对照组(肾：P<0.05，血液、肺：P<0.01)(表2)。
, 百拇医药
三、GR阻断对烫伤大鼠血浆TNF含量的影响：
烫伤8 h后，大鼠血浆TNFα含量十分显著高于假处理对照组(P<0.01)，烫伤复合GR阻断组血浆TNFα含量显著高于烫伤对照组(P<0.05)，而单纯GR阻断组TNFα含量与假处理对照组并无明显差异(P>0.05)(表3)。
讨 论
MODS是目前烧伤最严重的并发症之一，其发生机制一般认为是由于机体体液或细胞因子过度释放导致全身性的炎症反应失控所致[4]，也就是说，MODS实质上是SIRS发展到最后的结局；笔者认为，这种炎症反应失控的原因应包括体内抗炎机制的减弱。最近，徐仁宝提出[5]糖皮质激素(glucocorticoid, GC)与其受体GR的复合物是体内最重要的抗炎机制，并在内毒素血症中得到证实[6]。结合既往的研究[7]，我们认为，烫伤后GR减少参与了烫伤后SIRS的发生。
, 百拇医药
已有的资料表明，在引起MODS的体液因子中，PLA2及其调节的磷脂代谢产物在组织损伤中起了重要作用。而GC通过与GR结合，诱导脂皮素(lipocortin)合成，可明显抑制PLA2活性[8]；因此，严重烫伤后GR的减少必然导致机体内源性GC对PLA2抑制作用的减弱，致使体内出现过度炎症反应，此时，尽管GC分泌大量增多，但SIRS以致于MODS还是难免发生。
在引起MODS的众多细胞因子中，TNF是最重要的始动因子，它可直接或通过诱导其它细胞因子而间接诱发SIRS和MODS的发生。Kutteh等[9]曾发现，GC通过GR的介导可抑制枯否氏细胞产生TNF；因此，严重烫伤后GR减少还可能引起内源性GC对TNF合成和释放的抑制作用减弱，从而加重各脏器的损伤，导致MODS。
表1 各组大鼠血浆和组织匀浆中PLA2活性
, 百拇医药
Tab 1 Activity of PLA2 in plasma and tissue homogenate (U) Group
n
Plasma
Tissue homogenate
Pulmonary
Renal
Sham
6
48.75±5.11
17.78±4.77
10.34±2.03
, http://www.100md.com
GR Blockade
6
47.93±5.25
18.21±5.34
11.20±2.74
Scalding
7
325.95±22.99
136.32±26.10
35.63±6.99
Scalding+GR
blockade
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7
400.78±49.58*
231.59±60.38**
48.52±6.12*
*P<0.05，**P<0.01，vs scalding表2 各组大鼠血浆和组织匀浆中MDA含量
Tab 2 Contents of MDA in plasma and tissue
homogenate (nmol/L,±s) Group
n
, 百拇医药
Plasma
Tissue homogenate
Pulmonary
Renal
Sham
6
5.01±0.36
4.95±0.38
3.22±0.51
GR Blockade
6
5.11±0.33
, 百拇医药
5.19±0.53
3.33±0.45
Scalding
7
20.10±2.34
16.39±1.86
9.06±1.25
Scalding+GR
blockade
7
29.81±4.95**
23.29±2.85**
, 百拇医药
11.83±2.30*
*P<0.05，**P<0.01，vs scalding表3 各组大鼠血浆中TNFα含量
Tab 3 Contents of TNFα in plasma (nmol/L，±s) Group
n
Contents of TNFα
Sham
6
1.02±0.28
GR Blockade
, 百拇医药
6
1.07±0.29
Scalding
7
12.67±3.23
Scalding+GR blockade
7
18.83±2.58
*P<0.05, vs Scalding
另外，在MODS的发生中，氧自由基也是一类重要的体液因子[10]；严重烫伤后，组织中氧自由基浓度增加，可引起生物膜脂质过氧化，导致组织损伤。烫伤时GR的减少则加重了生物膜脂质过氧化，表现为MDA增多。
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总之，本实验表明，阻断GR可使内源性GC对PLA2活性、脂质过氧化以及TNF释放的抑制作用减弱，致使体内抗炎机制降低。
(本文感谢第二军医大学病理生理教研室龚肖崎副教授曾经给予的大力指导)
[参 考 文 献]
[1] 林 海，肖素芳，龚肖崎，等.糖皮质激素受体阻断对烫伤大鼠肺、肾功能及其血管壁通透性的影响 [J].中华创伤杂志，1997，13：153～154.
[2] 范 杰，徐仁宝.糖皮质激素受体阻断动物模型的建立和研究 [J].第二军医大学学报，1993， 14：5～9.
[3] 陈思锋，吴中立.体液和组织磷脂酶A2简便快速测定法 [J].第二军医大学学报，1989， 10：254～256.
, http://www.100md.com
[4] The ACCP/SCCM Consensus Conference Committee. Definition for sepsis and organ failure and guidelines for the use of innovative therapies in sepsis [J]. Chest, 1992, 101:1644～1655.
[5] 徐仁宝. 体内的抗炎机制及其意义 [J].生理科学进展，1994， 25：305～308.
[6] 范 杰，徐仁宝.糖皮质激素受体减少对内毒素血症并发多脏器损伤的病因学作用 [J].中华整形烧伤外科杂志， 1992， 8：28～31.
[7] 徐仁宝，谭金兴.致死性和非致死性烫伤大鼠胞液和胞核糖皮质激素受体的研究 [J].中国科学B辑，1986，12：265～267.
, 百拇医药
[8] Flower RJ. Lipocortin and the mechanism of action of the glucocorticoids. Br J Pharmacol, 1988, 94:987～1015.
[9] Kutteh WH, Rainey WE, Carr BR, et al. Glucocorticoid inhibit lipopolysaccharid-induced production of tumor necrosis factor-alpha by human fetal Kupffer cell [J]. J Clin Endocrinol Metab, 1991, 73:296～305.
[10] 金丽娟.多系统器官功能衰竭.见：王迪浔，金惠铭主编.病理生理学 [M].北京：人民卫生出版社， 1994.744～756.
[收稿日期] 1998-09-21 [修回日期] 1999-03-25, 百拇医药
单位：(解放军福州医学高等专科学校，福建 福州 350003)
关键词：受体，糖皮质激素；炎症；综合征；烧伤
中国病理生理杂志000117
[摘 要] 目的：阐明糖皮质激素受体(GR)减少对严重烫伤大鼠体内几种炎症介质水平的影响。方法：以RU38486阻断严重烫伤大鼠体内的GR，观察其血浆磷脂酶A2(PLA2)活性、肿瘤坏死因子α(TNFα)和丙二醛(MDA)含量以及脏器组织匀浆中PLA2活性和MDA含量变化。结果：烫伤后8 h，大鼠血浆及肺、肾组织匀浆中PLA2活性、MDA和TNF含量均明显高于假处理对照组(P<0.01)；烫伤复合GR阻断组以上效应更显著(P<0.01，P<0.05)。结论：烫伤复合GR阻断可导致大鼠体内炎症介质释放增多，提示GR在烫伤中具有明显的抗炎作用。
, 百拇医药
[中图分类号] K 318.04 [文献标识码] A
[文章编号]1000-4718(2000)01-0060-03
The effect of glucocorticoid receptor on level of inflammatory media in rats after critical scald
LIN Hai, XIAO Su-fang, LIN Zhong-qing, LIN Xue-yi, SONG Yu-na, JIANG Xi-lin
(Fuzhou Military Medical College, Fuzhou 350003，China)
[Abstract] AIM:To further elaborate the effect of glucocorticoid receptor(GR) decrease on level of inflammatory media in rats after critical scald.METHOD：The changes of phospholipase A2(PLA2) activity and concentrations of tumor necrosis factor alpha (TNFα) and malondialdehyde (MDA), the product of lipid peroxidation metabolism in plasma and tissue homogenate have been studied in scalded rats with or without GR blockade by RU38486.RESULTS：The PLA2 activity and the concentrations of TNFα and MDA in plasma and homogenate of pulmonary and renal tissue in scalded rats were significantly higher than those in the controls(P<0.01) and further increased in scalded rats accompanied with GR blockade (P<0.01 or P<0.05).CONCLUSION：Blockade of GR might aggravate the increase of inflammatory mediator caused by scalding. It suggested that GR might potentiate anti-inflammation in scald.
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[MeSH] Receptors, glucocorticoid; Inflammation; Syndrome;Burns
林海等[1]曾报道，阻断糖皮质激素受体(glucocorticoid receptor, GR)可明显加重烫伤后大鼠肺、肾血管壁通透性升高，并提高其功能衰竭的发生率，提示烫伤后GR减少可能参与了烫伤后全身炎症反应综合征(systemic inflammatory response syndrome, SIRS)甚至多器官功能障碍综合征(multiple organ dysfunction sysdrome ,MODS)的发生。为进一步证实烫伤后GR减少的这种效应，本实验观察阻断GR对烫伤大鼠血浆磷脂酶A2(phospholipase A2, PLA2)活性、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor， TNFα)和脂质过氧化代谢产物丙二醛(malondialdehyde, MDA)含量以及肺、肾组织匀浆中PLA2活性、MDA含量的影响。
, http://www.100md.com
材 料 和 方 法
一、 主要试剂：
RU38486(法国Roussel-Uclaf公司产品)以麻油配制成10 g/L，TNF测定试剂盒(军事医学科学院邦定生物医学公司产品)，MDA测定试剂盒(暨南大学医学院病理生理教研室提供)。
二、动物分组：
雄性SD大鼠26只(上海西普尔一必凯实验动物有限公司提供，由于RU38486又是孕激素受体阻断剂，故实验全部选用雄性动物)，体重220～280 g，随机分4组。(1)假处理对照组(n=6)；肌肉注射麻油2 mL/kg， 1 h后行假烫伤(背部浸入37℃水中10 s)；(2)单纯阻断假处理组(n=6)；按20 mg/kg肌肉注射RU38486，GR的阻断率为80%左右[2]。1 h后假烫伤动物，方法同假处理对照组；(3)烫伤对照组(n=7)；肌肉注射麻油2 mL/kg，1 h后将大鼠背部皮肤于95℃水中烫10 s，造成30% TBSA Ⅲ度烫伤(经病理组织切片证实)；(4)烫伤+GR阻断组(n=7)：按20 mg/kg肌肉注射RU38486，1 h后烫伤动物，方法同烫伤对照组。
, 百拇医药
三、实验方法：
以上动物经不同处理后，均饲养8 h，20%乌拉坦(0.75 mL/kg ip)麻醉下颈动脉插管，取血、分离血浆，随后开胸、开腹，留取肺和肾组织。
(一)PLA2活性测定方法：参照文献[3]方法，以37℃条件下每分钟、每毫升血浆或组织匀浆上清液反应过程中消耗1 nmol盐酸为1个PLA2活性单位(即：1U＝1 nmol.mL-1.min-1)。
(二)血液及组织匀浆中MDA含量测定方法：取肺、肾组织各0.5 g，加入PBS 5 mL匀浆、离心(4000 r/min×10 min)，留取上清液；血浆和组织匀浆MDA含量测定严格按试剂盒说明书进行。
(三)血浆TNF含量测定：严格按照试剂盒说明书进行。
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四、统计处理：
所有实验结果以均数±标准差(
±s)表示，并用t检验做组间差异的显著检验。结 果
一、GR阻断对烫伤大鼠血浆及组织匀浆中PLA2活性的影响：
烫伤8 h后，大鼠血浆及肺、肾组织匀浆PLA2活性十分显著高于假处理对照组(P<0.01)，复合GR阻断组各值均明显高于烫伤对照组(血液和肾：P<0.05)，肺：P<0.01)(表1)。
二、GR阻断对烫伤大鼠血浆及组织匀浆中MDA含量的影响：
烫伤8 h后，大鼠血浆及肺、肾组织匀浆MDA含量非常明显高于假处理对照组(P<0.01)，复合GR阻断组各值均明显高于烫伤对照组(肾：P<0.05，血液、肺：P<0.01)(表2)。
, 百拇医药
三、GR阻断对烫伤大鼠血浆TNF含量的影响：
烫伤8 h后，大鼠血浆TNFα含量十分显著高于假处理对照组(P<0.01)，烫伤复合GR阻断组血浆TNFα含量显著高于烫伤对照组(P<0.05)，而单纯GR阻断组TNFα含量与假处理对照组并无明显差异(P>0.05)(表3)。
讨 论
MODS是目前烧伤最严重的并发症之一，其发生机制一般认为是由于机体体液或细胞因子过度释放导致全身性的炎症反应失控所致[4]，也就是说，MODS实质上是SIRS发展到最后的结局；笔者认为，这种炎症反应失控的原因应包括体内抗炎机制的减弱。最近，徐仁宝提出[5]糖皮质激素(glucocorticoid, GC)与其受体GR的复合物是体内最重要的抗炎机制，并在内毒素血症中得到证实[6]。结合既往的研究[7]，我们认为，烫伤后GR减少参与了烫伤后SIRS的发生。
, 百拇医药
已有的资料表明，在引起MODS的体液因子中，PLA2及其调节的磷脂代谢产物在组织损伤中起了重要作用。而GC通过与GR结合，诱导脂皮素(lipocortin)合成，可明显抑制PLA2活性[8]；因此，严重烫伤后GR的减少必然导致机体内源性GC对PLA2抑制作用的减弱，致使体内出现过度炎症反应，此时，尽管GC分泌大量增多，但SIRS以致于MODS还是难免发生。
在引起MODS的众多细胞因子中，TNF是最重要的始动因子，它可直接或通过诱导其它细胞因子而间接诱发SIRS和MODS的发生。Kutteh等[9]曾发现，GC通过GR的介导可抑制枯否氏细胞产生TNF；因此，严重烫伤后GR减少还可能引起内源性GC对TNF合成和释放的抑制作用减弱，从而加重各脏器的损伤，导致MODS。
表1 各组大鼠血浆和组织匀浆中PLA2活性
, 百拇医药
Tab 1 Activity of PLA2 in plasma and tissue homogenate (U) Group
n
Plasma
Tissue homogenate
Pulmonary
Renal
Sham
6
48.75±5.11
17.78±4.77
10.34±2.03
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GR Blockade
6
47.93±5.25
18.21±5.34
11.20±2.74
Scalding
7
325.95±22.99
136.32±26.10
35.63±6.99
Scalding+GR
blockade
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7
400.78±49.58*
231.59±60.38**
48.52±6.12*
*P<0.05，**P<0.01，vs scalding表2 各组大鼠血浆和组织匀浆中MDA含量
Tab 2 Contents of MDA in plasma and tissue
homogenate (nmol/L,
±s) Groupn
, 百拇医药
Plasma
Tissue homogenate
Pulmonary
Renal
Sham
6
5.01±0.36
4.95±0.38
3.22±0.51
GR Blockade
6
5.11±0.33
, 百拇医药
5.19±0.53
3.33±0.45
Scalding
7
20.10±2.34
16.39±1.86
9.06±1.25
Scalding+GR
blockade
7
29.81±4.95**
23.29±2.85**
, 百拇医药
11.83±2.30*
*P<0.05，**P<0.01，vs scalding表3 各组大鼠血浆中TNFα含量
Tab 3 Contents of TNFα in plasma (nmol/L，
±s) Groupn
Contents of TNFα
Sham
6
1.02±0.28
GR Blockade
, 百拇医药
6
1.07±0.29
Scalding
7
12.67±3.23
Scalding+GR blockade
7
18.83±2.58
*P<0.05, vs Scalding
另外，在MODS的发生中，氧自由基也是一类重要的体液因子[10]；严重烫伤后，组织中氧自由基浓度增加，可引起生物膜脂质过氧化，导致组织损伤。烫伤时GR的减少则加重了生物膜脂质过氧化，表现为MDA增多。
, http://www.100md.com
总之，本实验表明，阻断GR可使内源性GC对PLA2活性、脂质过氧化以及TNF释放的抑制作用减弱，致使体内抗炎机制降低。
(本文感谢第二军医大学病理生理教研室龚肖崎副教授曾经给予的大力指导)
[参 考 文 献]
[1] 林 海，肖素芳，龚肖崎，等.糖皮质激素受体阻断对烫伤大鼠肺、肾功能及其血管壁通透性的影响 [J].中华创伤杂志，1997，13：153～154.
[2] 范 杰，徐仁宝.糖皮质激素受体阻断动物模型的建立和研究 [J].第二军医大学学报，1993， 14：5～9.
[3] 陈思锋，吴中立.体液和组织磷脂酶A2简便快速测定法 [J].第二军医大学学报，1989， 10：254～256.
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[4] The ACCP/SCCM Consensus Conference Committee. Definition for sepsis and organ failure and guidelines for the use of innovative therapies in sepsis [J]. Chest, 1992, 101:1644～1655.
[5] 徐仁宝. 体内的抗炎机制及其意义 [J].生理科学进展，1994， 25：305～308.
[6] 范 杰，徐仁宝.糖皮质激素受体减少对内毒素血症并发多脏器损伤的病因学作用 [J].中华整形烧伤外科杂志， 1992， 8：28～31.
[7] 徐仁宝，谭金兴.致死性和非致死性烫伤大鼠胞液和胞核糖皮质激素受体的研究 [J].中国科学B辑，1986，12：265～267.
, 百拇医药
[8] Flower RJ. Lipocortin and the mechanism of action of the glucocorticoids. Br J Pharmacol, 1988, 94:987～1015.
[9] Kutteh WH, Rainey WE, Carr BR, et al. Glucocorticoid inhibit lipopolysaccharid-induced production of tumor necrosis factor-alpha by human fetal Kupffer cell [J]. J Clin Endocrinol Metab, 1991, 73:296～305.
[10] 金丽娟.多系统器官功能衰竭.见：王迪浔，金惠铭主编.病理生理学 [M].北京：人民卫生出版社， 1994.744～756.
[收稿日期] 1998-09-21 [修回日期] 1999-03-25, 百拇医药