阻塞性睡眠呼吸暂停综合征合并慢性阻塞性肺病患者血清中β1与M2受体自身抗体的变化
作者：宋满景 王蓓 刘卓拉 付娟
单位：(山西医科大学第二医院呼吸科， 山西 太原 030001)
关键词：睡眠呼吸暂停综合征；肺疾病，阻塞性；受体，肾上腺素能，β；受体，胆碱能；自身抗体
中国病理生理杂志000317
[摘 要] 目的： 检测阻塞性睡眠呼吸暂停综合征(OSAS)合并慢性阻塞性肺病(COPD)即重叠综合征(overlap syndrome，OS)患者血清中β1-肾上腺素能受体与M2-胆碱能受体自身抗体的变化。方法： 应用酶联免疫吸附法(ELISA)检测OS患者26例、OSAS患者32例、COPD患者30例及正常人28例血清中抗β1与M2受体的自身抗体。结果： β1与M2受体的自身抗体阳性率及滴度，OS组(92.2%, 57.7%及1∶98, 1∶67)明显高于OSAS组(71.9%, 40.6%及1∶83, 1∶30 )和COPD组(70.0%,36.7%及1∶79, 1∶28)(P<0.05)，OSAS和COPD组显著高于正常对照组(25.0%,14.3%及1∶20, 1∶20)(P<0.01)。结论： OS，OSAS与COPD患者血清β1与M2受体自身抗体明显高于正常人，且以OS患者为著。
, 百拇医药
[中图分类号] R563 [文献标识码] A
[文章编号] 1000-4718(2000)03-0255-03
Changes of serum autoantibodies against β1 and M2 receptors in the patients of obstructive sleep apnea syndrome with chronic obstructive pulmonary disease
SONG Man-jing, WANG Pei, LIU Zhuo-la, FU Juan
(Respiratory Division, No.2 Hospital, Shanxi Medical University, Taiyuan 030001，China)
, 百拇医药
[Abstract] AIM: To study the changes of serum autoantibodies against β1- adrenergic and M2-muscarinic receptors in obstructive sleep apnea syndrome (OSAS) patients with chronic obstructive pulmonary disease (COPD), that is, overlap syndrome (OS). METHOD: Serum autoantibodies against β1 and M2 receptors in 26 cases with OS, 32 with OSAS, 30 with COPD and 28 normal subjects were determined by using enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA). RESULTS: The positive rates and titer of β1 and M2 receptor autoantibodies are significantly increased in OS group (92.2%,57.7% and 1∶98, 1∶67), compared to OSAS (71.9%, 40.6% and 1∶83, 1∶30) or COPD group (70.0%, 36.7% and 1∶79, 1∶28) (P<0.05), and they are higher in these groups than in the control (25.0%, 14.3% and 1∶20, 1∶20) (P<0.01). CONCLUSION:Serum β1-and M2 receptor autoantibodies are significantly increased in the patients with COPD, OSAS or OS, compared to the control, and the highest is in OS.
, 百拇医药
[MeSH] Sleep apnea syndroms;Lung diseases, Obstructive; Receptors, adrenergic,beta; Receptors, cholinergic; Autoantibodies
阻塞性睡眠呼吸暂停综合征(obstructive sleep apnea syndrome, OSAS)和慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease, COPD)均可造成低氧状态，两者并存(重叠综合征，overlap syndrome，OS)更易发生心肺并发症[1]。本文测定OS患者血清中β1和M2受体的自身抗体，并探讨其临床意义。
对 象 和 方 法
一、对象
, http://www.100md.com (一)轻度单纯OSAS患者32例，其中男28例，女4例，平均年龄(50±7)岁，由本科睡眠呼吸障碍研究中心确诊均符合OSAS的诊断标准[2]，并经心电图、超声心动图、X线胸片、肺功能检查未发现心肺疾病。
(二) 轻度COPD患者30例，其中男27例，女3例，平均年龄(51±4)岁，均符合1997年慢性阻塞性肺疾病诊治规范(草案)标准[3]。
(三)OS患者26例，其中男23例，女3例，平均年龄(48±7)岁。该组患者COPD与OSAS均属于轻度。
(四)正常对照组28例，其中男26例，女2例，平均年龄(49±6)岁，由本院体检中心提供。4组间年龄、性别差异无显著(P>0.05)。
二、方法
(一)采用改进的固相法[4]合成抗原肽段，并行氨基酸序列分析以判断合成肽段纯度。抗原β1和M2肽段分别由中国科学院生物分子研究所和瑞典哥得堡大学合成(β1肽段序列：H-W-W-R-A-E-S-D-E-A-R-R-C-Y-N-D-P-K-C-C-F-V-T-N-R-C；M2肽段序列：V-R-T-V-E-D-G-E-C-Y-I-F-F-S-N-A-A-V-F-G-T-A-I-C)。
, 百拇医药
(二)ELISA检测：将β1与M2两种氨基酸肽段溶解于100 mmol/L 的无水碳酸氢钠溶液中分别配成10 μg/L和5 μg/L的抗原包被液以50 μg/孔的量包被在酶标板滴定孔内，本实验巳包被4个月4℃冰箱保存，实验步骤按张麟等[5]方法进行,在波长为405 nm处测光密度OD值。
(三)判断标准用比例法，以阳性血清与阴性血清的吸光度之比即P/N比值来判断，P/N≥1.5为阳性；抗体滴度判定：将标本从1∶20起依次倍比稀释以出现P/N≥1.5的稀释度作为该标本滴度。
三、统计处理
用χ2检验进行两样本阳性率的差异显著性判断，几何均数表示抗体滴度的平均值，两几何均数间显著性差异用t检验判定。
结 果
, http://www.100md.com
β1与M2受体自身抗体阳性率及其滴度：OS组与OSAS组、COPD组、对照组间，OSAS组、COPD组与对照组相比差异有显著(P<0.05)，OSAS与COPD组间差异无显著。结果见表1。
表1 4组血清中β1与M2自身抗体阳性率
Tab 1 Positive rate of β1 and M2 autoantibodies
in serum in four groups (%) Group
n
β1 autoantibody
, http://www.100md.com M2 autoantibody
Control
28
25.0(8/28)
14.3(4/28)
OS
26
92.2(24/26)*▲ ★
57.7(15/26)*▲★
OSAS
32
, http://www.100md.com
71.9(23/32)*
40.6(13/32)*
COPD
30
70.0(21/30)*△
36.7(11/30)*△
*P<0.01, vs control；▲P<0.05, vs OSAS；
△P>0.05, vs OSAS；★P<0.05, vs COPD
OS=overlap syndrome；OSAS=obstructive sleep apnea syndrome； COPD=chronic obstructive pulmonary disease
, 百拇医药
表2 4组血清中β1与M2自身抗体滴度(几何均数)
Tab 2 Titers of β1 and M2 autoantibodies in sernm in four groups Group
n
Titer of β1 autoantibody
Titer of M2 autoantibody
Control
28
1∶20
, http://www.100md.com
1∶20
OS
26
1∶98*▲★
1∶67*▲★
OSAS
32
1∶83*
1∶30*
COPD
30
1∶79*△
, http://www.100md.com
1∶28*△
*P<0.01, vs control； ▲P<0.05, vs OSAS
△P>0.05, vs OSAS ；★P<0.05, vs COPD讨 论
自从Flenley首次提出重叠综合征(OSAS合并COPD，OS)[6]以来,至今为学术界所公认。OSAS及COPD都是常见病多发病，因而OS也是比较常见的。OSAS的主要病理生理是在睡眠中咽部闭塞或接近闭塞，其直接后果可导致机体缺氧。COPD的主要特征是慢性气流阻塞，从而使肺泡通气不足，血中氧含量降低。OS患者由于OSAS与COPD并存，睡眠中存在着上、下气道阻塞，使机体缺氧加重。心肌氧的需求和动脉血氧的含量之间出现最大不匹配，心肌容易受损甚至形成肺动脉高压、慢性肺心病。
心脏G-蛋白偶联型受体家族中，β1-肾上腺素能受体与M2胆碱能受体是调节心脏活动的主要受体。它们的自身抗体中β1受体自身抗体有激动剂样作用，可增强心肌收缩力，但缺乏正常激动剂所引起的受体脱敏感现象[7]，因而可干扰心脏受体的正常调节功能，影响心功能的改变；M2受体自身抗体可引起心肌细胞内cAMP减少，导致心肌收缩力下降[8]；是引起心肌损害的原因之一，目前这方面的研究多集中于扩张型心肌病[7,9]。本研究发现OS、OSAS及COPD患者血清中抗心肌β1与M2受体的自身抗体阳性率及其滴度都显著高于正常组(P<0.01)，提示β1与M2受体的自身抗体可能参与并影响这类患者的心肌病理改变。OS患者除在肺泡低通气的状态下还存在有严重的与睡眠有关的低氧血症，这可能是OS患者血清中β1与M2受体自身抗体阳性率及其滴度较OSAS、COPD患者组高且有显著差异的原因。正常人中这两种自身抗体也有一定比例的阳性，但滴度很低。本结果表明，M2受体自身抗体为14.3%，与文献报道相近(10.3%[5]和13%[9])，但β1受体抗体的阳性率似乎较高，达25%(文献报道11.7%[5]和9%[9])，其原因还待进一步探讨。
, http://www.100md.com
[参 考 文 献]
[1] Fletcher EC,Schacf JM,Miller J, et al. Long- term cardiopulmonary sequelae in patients with SAS and COPD[J]. Am Rev Respir Dis, 1987, 135:525～533.
[2] 牛 楠,戴玉华. 阻塞性睡眠呼吸暂停综合征与心律失常[J].中华心血管病杂志， 1997,25:330～332.
[3] 中华医学会呼吸病学分会.慢性阻塞性肺疾病COPD诊治规范[J].中华结核和呼吸杂志，1997,8:199～203.
[4] Rauch B,Niroomand F. Specific M2-receptor activation: an alternative to treatment with beta-receptor blockers[J]. Eur Heart J, 1991, 12 (Suppl F):76～81.
, 百拇医药
[5] 张 麟,张 健.高血压性心脏病抗G-蛋白偶联β1-肾上腺素能受体与M2- 胆碱能受体自身抗体的初步研究[J].高血压杂志，1998,6:5～8.
[6] Flenley DC. Sleep in chronic obstructive lung disease[J]. Clin Chest Med, 1985,6:51～61.
[7] Magnusson Y, Wallukat G, Waagstein F, et al. Autoimmunity in idiopathic dilated cardiomyopathy: characterization of antibodies against the β1-adrenoreceptor with positive chronotropic effect[J]. Circulation, 1994, 89:2760～2767.
, 百拇医药
[8] Fu LXM, Magnusson Y, Hjalmarson A, et al. Agonist-like activity of anti-peptide antibodies to an autoimmune epitope on the second extracellular loop of the human heart muscarinic receptor[J]. Receptors Channels, 1994, 2:121～130.
[9] Matsui S, Fu LXM, Shimizu M, et al. Dilated cardiomyopathy defines serum autoantibodies against G-protein-coupled cardiovascular receptors[J]. Autoimmunity, 1995, 21:85～88.
[收稿日期] 1998-12-16 [修回日期] 1999-06-14, 百拇医药
单位：(山西医科大学第二医院呼吸科， 山西 太原 030001)
关键词：睡眠呼吸暂停综合征；肺疾病，阻塞性；受体，肾上腺素能，β；受体，胆碱能；自身抗体
中国病理生理杂志000317
[摘 要] 目的： 检测阻塞性睡眠呼吸暂停综合征(OSAS)合并慢性阻塞性肺病(COPD)即重叠综合征(overlap syndrome，OS)患者血清中β1-肾上腺素能受体与M2-胆碱能受体自身抗体的变化。方法： 应用酶联免疫吸附法(ELISA)检测OS患者26例、OSAS患者32例、COPD患者30例及正常人28例血清中抗β1与M2受体的自身抗体。结果： β1与M2受体的自身抗体阳性率及滴度，OS组(92.2%, 57.7%及1∶98, 1∶67)明显高于OSAS组(71.9%, 40.6%及1∶83, 1∶30 )和COPD组(70.0%,36.7%及1∶79, 1∶28)(P<0.05)，OSAS和COPD组显著高于正常对照组(25.0%,14.3%及1∶20, 1∶20)(P<0.01)。结论： OS，OSAS与COPD患者血清β1与M2受体自身抗体明显高于正常人，且以OS患者为著。
, 百拇医药
[中图分类号] R563 [文献标识码] A
[文章编号] 1000-4718(2000)03-0255-03
Changes of serum autoantibodies against β1 and M2 receptors in the patients of obstructive sleep apnea syndrome with chronic obstructive pulmonary disease
SONG Man-jing, WANG Pei, LIU Zhuo-la, FU Juan
(Respiratory Division, No.2 Hospital, Shanxi Medical University, Taiyuan 030001，China)
, 百拇医药
[Abstract] AIM: To study the changes of serum autoantibodies against β1- adrenergic and M2-muscarinic receptors in obstructive sleep apnea syndrome (OSAS) patients with chronic obstructive pulmonary disease (COPD), that is, overlap syndrome (OS). METHOD: Serum autoantibodies against β1 and M2 receptors in 26 cases with OS, 32 with OSAS, 30 with COPD and 28 normal subjects were determined by using enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA). RESULTS: The positive rates and titer of β1 and M2 receptor autoantibodies are significantly increased in OS group (92.2%,57.7% and 1∶98, 1∶67), compared to OSAS (71.9%, 40.6% and 1∶83, 1∶30) or COPD group (70.0%, 36.7% and 1∶79, 1∶28) (P<0.05), and they are higher in these groups than in the control (25.0%, 14.3% and 1∶20, 1∶20) (P<0.01). CONCLUSION:Serum β1-and M2 receptor autoantibodies are significantly increased in the patients with COPD, OSAS or OS, compared to the control, and the highest is in OS.
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[MeSH] Sleep apnea syndroms;Lung diseases, Obstructive; Receptors, adrenergic,beta; Receptors, cholinergic; Autoantibodies
阻塞性睡眠呼吸暂停综合征(obstructive sleep apnea syndrome, OSAS)和慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease, COPD)均可造成低氧状态，两者并存(重叠综合征，overlap syndrome，OS)更易发生心肺并发症[1]。本文测定OS患者血清中β1和M2受体的自身抗体，并探讨其临床意义。
对 象 和 方 法
一、对象
, http://www.100md.com (一)轻度单纯OSAS患者32例，其中男28例，女4例，平均年龄(50±7)岁，由本科睡眠呼吸障碍研究中心确诊均符合OSAS的诊断标准[2]，并经心电图、超声心动图、X线胸片、肺功能检查未发现心肺疾病。
(二) 轻度COPD患者30例，其中男27例，女3例，平均年龄(51±4)岁，均符合1997年慢性阻塞性肺疾病诊治规范(草案)标准[3]。
(三)OS患者26例，其中男23例，女3例，平均年龄(48±7)岁。该组患者COPD与OSAS均属于轻度。
(四)正常对照组28例，其中男26例，女2例，平均年龄(49±6)岁，由本院体检中心提供。4组间年龄、性别差异无显著(P>0.05)。
二、方法
(一)采用改进的固相法[4]合成抗原肽段，并行氨基酸序列分析以判断合成肽段纯度。抗原β1和M2肽段分别由中国科学院生物分子研究所和瑞典哥得堡大学合成(β1肽段序列：H-W-W-R-A-E-S-D-E-A-R-R-C-Y-N-D-P-K-C-C-F-V-T-N-R-C；M2肽段序列：V-R-T-V-E-D-G-E-C-Y-I-F-F-S-N-A-A-V-F-G-T-A-I-C)。
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(二)ELISA检测：将β1与M2两种氨基酸肽段溶解于100 mmol/L 的无水碳酸氢钠溶液中分别配成10 μg/L和5 μg/L的抗原包被液以50 μg/孔的量包被在酶标板滴定孔内，本实验巳包被4个月4℃冰箱保存，实验步骤按张麟等[5]方法进行,在波长为405 nm处测光密度OD值。
(三)判断标准用比例法，以阳性血清与阴性血清的吸光度之比即P/N比值来判断，P/N≥1.5为阳性；抗体滴度判定：将标本从1∶20起依次倍比稀释以出现P/N≥1.5的稀释度作为该标本滴度。
三、统计处理
用χ2检验进行两样本阳性率的差异显著性判断，几何均数表示抗体滴度的平均值，两几何均数间显著性差异用t检验判定。
结 果
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β1与M2受体自身抗体阳性率及其滴度：OS组与OSAS组、COPD组、对照组间，OSAS组、COPD组与对照组相比差异有显著(P<0.05)，OSAS与COPD组间差异无显著。结果见表1。
表1 4组血清中β1与M2自身抗体阳性率
Tab 1 Positive rate of β1 and M2 autoantibodies
in serum in four groups (%) Group
n
β1 autoantibody
, http://www.100md.com M2 autoantibody
Control
28
25.0(8/28)
14.3(4/28)
OS
26
92.2(24/26)*▲ ★
57.7(15/26)*▲★
OSAS
32
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71.9(23/32)*
40.6(13/32)*
COPD
30
70.0(21/30)*△
36.7(11/30)*△
*P<0.01, vs control；▲P<0.05, vs OSAS；
△P>0.05, vs OSAS；★P<0.05, vs COPD
OS=overlap syndrome；OSAS=obstructive sleep apnea syndrome； COPD=chronic obstructive pulmonary disease
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表2 4组血清中β1与M2自身抗体滴度(几何均数)
Tab 2 Titers of β1 and M2 autoantibodies in sernm in four groups Group
n
Titer of β1 autoantibody
Titer of M2 autoantibody
Control
28
1∶20
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1∶20
OS
26
1∶98*▲★
1∶67*▲★
OSAS
32
1∶83*
1∶30*
COPD
30
1∶79*△
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1∶28*△
*P<0.01, vs control； ▲P<0.05, vs OSAS
△P>0.05, vs OSAS ；★P<0.05, vs COPD讨 论
自从Flenley首次提出重叠综合征(OSAS合并COPD，OS)[6]以来,至今为学术界所公认。OSAS及COPD都是常见病多发病，因而OS也是比较常见的。OSAS的主要病理生理是在睡眠中咽部闭塞或接近闭塞，其直接后果可导致机体缺氧。COPD的主要特征是慢性气流阻塞，从而使肺泡通气不足，血中氧含量降低。OS患者由于OSAS与COPD并存，睡眠中存在着上、下气道阻塞，使机体缺氧加重。心肌氧的需求和动脉血氧的含量之间出现最大不匹配，心肌容易受损甚至形成肺动脉高压、慢性肺心病。
心脏G-蛋白偶联型受体家族中，β1-肾上腺素能受体与M2胆碱能受体是调节心脏活动的主要受体。它们的自身抗体中β1受体自身抗体有激动剂样作用，可增强心肌收缩力，但缺乏正常激动剂所引起的受体脱敏感现象[7]，因而可干扰心脏受体的正常调节功能，影响心功能的改变；M2受体自身抗体可引起心肌细胞内cAMP减少，导致心肌收缩力下降[8]；是引起心肌损害的原因之一，目前这方面的研究多集中于扩张型心肌病[7,9]。本研究发现OS、OSAS及COPD患者血清中抗心肌β1与M2受体的自身抗体阳性率及其滴度都显著高于正常组(P<0.01)，提示β1与M2受体的自身抗体可能参与并影响这类患者的心肌病理改变。OS患者除在肺泡低通气的状态下还存在有严重的与睡眠有关的低氧血症，这可能是OS患者血清中β1与M2受体自身抗体阳性率及其滴度较OSAS、COPD患者组高且有显著差异的原因。正常人中这两种自身抗体也有一定比例的阳性，但滴度很低。本结果表明，M2受体自身抗体为14.3%，与文献报道相近(10.3%[5]和13%[9])，但β1受体抗体的阳性率似乎较高，达25%(文献报道11.7%[5]和9%[9])，其原因还待进一步探讨。
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[参 考 文 献]
[1] Fletcher EC,Schacf JM,Miller J, et al. Long- term cardiopulmonary sequelae in patients with SAS and COPD[J]. Am Rev Respir Dis, 1987, 135:525～533.
[2] 牛 楠,戴玉华. 阻塞性睡眠呼吸暂停综合征与心律失常[J].中华心血管病杂志， 1997,25:330～332.
[3] 中华医学会呼吸病学分会.慢性阻塞性肺疾病COPD诊治规范[J].中华结核和呼吸杂志，1997,8:199～203.
[4] Rauch B,Niroomand F. Specific M2-receptor activation: an alternative to treatment with beta-receptor blockers[J]. Eur Heart J, 1991, 12 (Suppl F):76～81.
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[5] 张 麟,张 健.高血压性心脏病抗G-蛋白偶联β1-肾上腺素能受体与M2- 胆碱能受体自身抗体的初步研究[J].高血压杂志，1998,6:5～8.
[6] Flenley DC. Sleep in chronic obstructive lung disease[J]. Clin Chest Med, 1985,6:51～61.
[7] Magnusson Y, Wallukat G, Waagstein F, et al. Autoimmunity in idiopathic dilated cardiomyopathy: characterization of antibodies against the β1-adrenoreceptor with positive chronotropic effect[J]. Circulation, 1994, 89:2760～2767.
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[8] Fu LXM, Magnusson Y, Hjalmarson A, et al. Agonist-like activity of anti-peptide antibodies to an autoimmune epitope on the second extracellular loop of the human heart muscarinic receptor[J]. Receptors Channels, 1994, 2:121～130.
[9] Matsui S, Fu LXM, Shimizu M, et al. Dilated cardiomyopathy defines serum autoantibodies against G-protein-coupled cardiovascular receptors[J]. Autoimmunity, 1995, 21:85～88.
[收稿日期] 1998-12-16 [修回日期] 1999-06-14, 百拇医药