正常妊娠对灵长目前房相关免疫偏离的影响*
作者：李志杰 彭广华 李辰
单位：(暨南大学组织移植与免疫实验中心， 眼科学实验室，广东 广州 510632)
关键词：妊娠；免疫性； 前房； 眼
中国病理生理杂志000716 [摘 要] 目的：最近发现兔正常妊娠期间伴随前房相关免疫偏离(ACAID)的消失。本研究旨在进一步观察在接近人类的灵长目动物是否发生同样的事件。方法: 随机选取中期妊娠恒河猴。将牛血清白蛋白(BSA)接种于非妊娠和中期妊娠猴眼前房。后使用加有佐剂的BSA免疫动物。然后再使用BSA刺激皮肤评估诱导的迟发型超敏反应(DTH)。结果: 前房接种BSA的非妊娠猴均获得抗原特异性迟发型超敏反应的抑制。与此相反，将BSA接种于妊娠猴眼则消除对DTH的抑制效应。结论:灵长目动物在正常妊娠期间ACAID消失；正常妊娠期间全身激素水平的波动对眼局部的免疫调控具有重要的影响。
, http://www.100md.com
[中图分类号] R392.11 [文献标识码] A
[文章编号] 1000-4718(2000)07-0637-03
Effects of normal pregnancy on anterior chamber-associated
immune deviation in primates
LI Zhi-jie, PENG Guang-hua, LI Chen
(Research Section of Ophthalmology, Institute of Tissue Transplantation
& Immunology, Jinan University, Guangzhou 510632, China)
, 百拇医药
[Abstract] AIM：Recently it was found that loss of anterior chamber-associated immune deviation (ACAID) was associated with normal pregnancy in rabbits. The purpose of this study is to further investigate whether the same events occurred in nonhuman primates. METHODS：Mid-pregnant cynomolgus monkeys were randomly selected. Bovine serum albumin (BSA) or balanced salt solution was inoculated in anterior chamber of eyes of nonpregnant and mid-pregnant monkeys that were subsequently immunized with BSA in adjuvant and then skin was challenged for delayed-type hypersensitivity with BSA. RESULTS: Non-pregnant monkeys of intracameral BSA were able to acquire antigen-specific suppression of delayed-type hypersensitivity. By contrast, inoculation of BSA to anterior chamber of pregnant monkeys abolished the DTH-suppression effect. CONCLUSIONS: This is the first demonstration in primates that loss of anterior chamber-associated immune deviation occurred during normal pregnancy. The fluctuations of systemic hormone levels during normal pregnancy might influence local immunoregulation within the eye.
, 百拇医药
[MeSH] Pregnancy; Immunity; Anterior chamber; Eye
将抗原接种于眼前房可诱导一种固定模式的全身性免疫反应，表现为抗原特异性迟发型超敏反应(delayed-type hypersensitivity, DTH)的抑制，但与此同时却保留非补体结合性抗体反应和细胞毒T细胞反应。我们将这种细胞免疫和体液免疫的部分偏离称为前房相关免疫偏离(anterior chamber-associated immune deviation, ACAID)[1]。ACAID作为眼免疫赦免现象的核心部分，与眼组织移植(包括角膜移植和视网膜移植)的长期存活以及许多眼免疫性疾病的发生和发展存在着密切的关系。 ACAID的诱导和建立取决于多维因素，既受局部因素的影响，又受全身状态的影响。最近，我们发现正常妊娠期间伴随兔眼前房相关免疫偏离的消失[2]。本研究旨在进一步观察接近于人类的灵长类是否也发生同样的事件。
, 百拇医药
材 料 和 方 法
一、动物
选择3～9岁成年健康无眼疾的恒河猴。由饲养人员随机选择中期妊娠(80～100 d)猴4只。另外，随机选择相应年龄的雄性或未妊娠雌性猴8只。所有动物均由河南省云台山旅游局提供。
二、试剂及配制
将牛血清白蛋白(bovine serum albumin, BSA， Fluka公司)溶解于平衡盐溶液(balanced salt solution, BSS)，分别配制0.5%和0.05 %浓度的溶液，0.22 μm微孔滤器过滤除菌，分装后冻存，分别用于前房、皮下和皮内注射用。将完全福氏佐剂(complete Freund's adjuvant, CFA， Sigma公司)与0.05 %BSA溶液等量充分混合成油包水乳剂。
, http://www.100md.com 三、前房抗原接种
使用氯胺酮(10 mg/kg)和氯丙嗪(10mg/kg)混合剂肌肉注射全麻。0.5%地卡因表面麻醉角膜。在显微镜下，使用微量注射器作斜行角膜穿刺，抽取50 μL房水。然后循原针孔将50 μL 0.5%的BSA溶液注入前房[4]。
四、 DTH的诱导和测定
按照文献描述的方法进行[3]。上述3组动物在前房接种抗原10 d后，使用0.05 % BSA+CFA混合乳剂两下肢皮下注射免疫动物，每侧注射50 μL。免疫10 d后，在左侧胸部皮肤皮内注射两点，每点0.5% BSA 100 μL，右侧皮内注射相等体积的BSS作为阴性对照。24 h后，用工程游标卡尺(精确度为0. 01 mm)测量注射部位皮肤红斑的直径大小。红斑反应直径大于5 mm者视为阳性DTH反应。
结 果
, http://www.100md.com
实验结果见表1。前房接种BSA的非妊娠动物在BSA皮肤刺激部位均未显示显著的红斑反应或炎症浸润表现。相反，前房接种BSS的阳性对照组动物，在BSA皮肤注射部位均显示不同程度的阳性红斑反应。这提示前房抗原接种动物针对抗原刺激诱导了 ACAID。4只中期妊娠动物在前房接种抗原后，在抗原BSA接种部位均显示不同程度的红斑反应，即ACAID诱导失败。
表1 眼内腔接种BSA预处理后灵长目的迟发型超敏反应
Tab 1 Delayed-type hypersensitivity reactions in
primates pretreated intraocularly with BSA Primate
number
Pregnancy
, 百拇医药
Anterior chamber
inoculation
Skin reactivity
erythema
1
None
PBS
+ + +
2
None
PBS
+ +
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3
None
PBS
+ + +
4
None
PBS
+
5
None
BSA
-
6
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BSA
-
7
None
BSA
-
8
None
BSA
-
9
Pregnancy
BSA
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+
10
Pregnancy
BSA
+ +
11
Pregnancy
BSA
+ +
12
Pregnancy
BSA
+ + +
, 百拇医药
Scoring of cutaneous erythema: -=no erythema, or diameter<5 mm; +=diameter between 5 and 10 mm; + +=diameter between 10 and 20 mm; + + +=diameter >20mm讨 论
眼的免疫赦免是一极其复杂和动态的免疫调节过程。本实验结果表明，在妊娠期间猴眼前房的生理免疫机制ACAID发生消失。这与我们以前在兔眼进行的实验结果相一致[3]。这些结果提示，全身生理状态的改变也可导致眼局部免疫调节机制的改变。
生理妊娠期导致ACAID消失的原因还不清楚。可能与下述两种因素有关：①妊娠造成眼局部生理功能的改变。在妊娠期间，眼内压无例外地都会发生下降，且可持续于整个妊娠期间。其下降的原因与妊娠期间房水流出易度增大和房水葡萄膜巩膜引流途径的开放程度增加有关[7]。大量的实验表明，ACAID的诱导需要来自眼的携带抗原的抗原递呈细胞直接通过小梁网进入血流，然后被脾脏所接受，而非进入引流区的局部淋巴结。最近，Eichhorm等[3]使用前列腺素增加葡萄膜巩膜引流途径，发现可导致ACAID的消失。因此，可以推测：在妊娠期间房水流出途径的改变可能促使眼内抗原通过淋巴管途径而非血管途径溢出眼外，最终导致ACAID的消失。②妊娠改变了全身的免疫反应状态。在妊娠期间，内分泌系统发生了剧烈的改变，胎盘组织分泌了大量的雌激素和孕激素。这些激素具有广泛的生物学效应，其中对免疫系统也具有直接的影响[6]。主要表现在：影响胸腺细胞的成熟和分化，广泛删除非成熟的胸腺细胞；抑制B淋巴细胞的发育；改变巨噬细胞细胞因子的分泌模式。最近的研究表明，改变上述每一个环节都可造成ACAID的消除，如摘除胸腺[7]、删除B淋巴细胞[4]和改变巨噬细胞细胞因子的分泌模式[8]。
, 百拇医药
到目前为止，在妊娠期间发生 ACAID消失的临床意义还不清楚。临床研究表明，某些眼免疫性疾病，如Behcet病，在妊娠期间随着激素水平的波动出现缓解或加重[9]。最近的实验也表明，生理性妊娠对自身免疫性葡萄膜炎的发生发展也具有显著的影响[10]。然而，目前还没有人类妊娠对眼免疫赦免状态影响的有关信息。如果其反应与本研究所描述的发现一样，那么这些现象将可能具有重要的意义。例如，可以通过妊娠相关激素的替代或对抗疗法用于治疗某些眼免疫性疾病。
[基金项目] 国家自然科学基金(No. 39970250)、教育部霍英东教育基金会和广东省自然科学基金资助
[参 考 文 献]
[1] Streilein JW. Immunoregulatory mechanism of the eye[J]. Prog Retin Eye Res, 1999, 18: 357～362.
, 百拇医药
[2] Li Z, Peng G, Li C. Anterior chamber-associated immune deviation during normal pregnancy in rabbits[J]. Chin Ophthal Res, 1999, 17:161～164.
[3] Eichhorn M, Horneber M, Streilein JW, et al. Anterior chamber-associated immune deviation elicited via primate eyes[J]. Invest Ophthalmol Vis Sci, 1993, 34:2926～2930.
[4] D'orazio TJ, Niederkorn JY. Splenic B cells are required for tolerogenic antigen presentation in the induction of anterior chamber-associated immune deviation (ACAID)[J]. Immunology, 1998, 95:47～52.
, 百拇医药
[5] Sunness JS. The pregnant woman eye[J]. Surv Ophthalmol[J], 1988, 32:219～227.
[6] Smith T, Hewson AK. Neuroendocrine-induced immune modulation and autoimmunity[M]. In: Kresina TF. ed. Immune modulating agents. New York: Marcel Dekker Inc.1998. 75～383.
[7] Wang Y, Goldschneider I, Foss D, et al. Direct thymic involvement in anterior chamber-associated immune deviation. Evidence for anondeletional mechanism of centrally induced tolerance to extrathymic antigens in adult mice[J]. J Immunol, 1997, 158:2150～2155.
, 百拇医药
[8] Okamoto S, Streilein JW. Role of inflammatory cytokines in induction of anterior chamber-associated immune deviation[J]. Ocul Immunol Inflamm, 1998, 6:1～5.
[9] Bang D, Chun YS, Haan IB, et al. The influence of pregnancy on Bechet's disease[J]. Yonsei Med J, 1997, 38:437～440.
[10] Agarwal RK, Chan CC, Wigger B, et al. Pregnancy ameliorates induction and expression of experimental autoimmune uveitis[J]. J Immunol, 1999, 162:2648～2653.
[收稿日期]1999-05-19
[修回日期]1999-07-19, 百拇医药
单位：(暨南大学组织移植与免疫实验中心， 眼科学实验室，广东 广州 510632)
关键词：妊娠；免疫性； 前房； 眼
中国病理生理杂志000716 [摘 要] 目的：最近发现兔正常妊娠期间伴随前房相关免疫偏离(ACAID)的消失。本研究旨在进一步观察在接近人类的灵长目动物是否发生同样的事件。方法: 随机选取中期妊娠恒河猴。将牛血清白蛋白(BSA)接种于非妊娠和中期妊娠猴眼前房。后使用加有佐剂的BSA免疫动物。然后再使用BSA刺激皮肤评估诱导的迟发型超敏反应(DTH)。结果: 前房接种BSA的非妊娠猴均获得抗原特异性迟发型超敏反应的抑制。与此相反，将BSA接种于妊娠猴眼则消除对DTH的抑制效应。结论:灵长目动物在正常妊娠期间ACAID消失；正常妊娠期间全身激素水平的波动对眼局部的免疫调控具有重要的影响。
, http://www.100md.com
[中图分类号] R392.11 [文献标识码] A
[文章编号] 1000-4718(2000)07-0637-03
Effects of normal pregnancy on anterior chamber-associated
immune deviation in primates
LI Zhi-jie, PENG Guang-hua, LI Chen
(Research Section of Ophthalmology, Institute of Tissue Transplantation
& Immunology, Jinan University, Guangzhou 510632, China)
, 百拇医药
[Abstract] AIM：Recently it was found that loss of anterior chamber-associated immune deviation (ACAID) was associated with normal pregnancy in rabbits. The purpose of this study is to further investigate whether the same events occurred in nonhuman primates. METHODS：Mid-pregnant cynomolgus monkeys were randomly selected. Bovine serum albumin (BSA) or balanced salt solution was inoculated in anterior chamber of eyes of nonpregnant and mid-pregnant monkeys that were subsequently immunized with BSA in adjuvant and then skin was challenged for delayed-type hypersensitivity with BSA. RESULTS: Non-pregnant monkeys of intracameral BSA were able to acquire antigen-specific suppression of delayed-type hypersensitivity. By contrast, inoculation of BSA to anterior chamber of pregnant monkeys abolished the DTH-suppression effect. CONCLUSIONS: This is the first demonstration in primates that loss of anterior chamber-associated immune deviation occurred during normal pregnancy. The fluctuations of systemic hormone levels during normal pregnancy might influence local immunoregulation within the eye.
, 百拇医药
[MeSH] Pregnancy; Immunity; Anterior chamber; Eye
将抗原接种于眼前房可诱导一种固定模式的全身性免疫反应，表现为抗原特异性迟发型超敏反应(delayed-type hypersensitivity, DTH)的抑制，但与此同时却保留非补体结合性抗体反应和细胞毒T细胞反应。我们将这种细胞免疫和体液免疫的部分偏离称为前房相关免疫偏离(anterior chamber-associated immune deviation, ACAID)[1]。ACAID作为眼免疫赦免现象的核心部分，与眼组织移植(包括角膜移植和视网膜移植)的长期存活以及许多眼免疫性疾病的发生和发展存在着密切的关系。 ACAID的诱导和建立取决于多维因素，既受局部因素的影响，又受全身状态的影响。最近，我们发现正常妊娠期间伴随兔眼前房相关免疫偏离的消失[2]。本研究旨在进一步观察接近于人类的灵长类是否也发生同样的事件。
, 百拇医药
材 料 和 方 法
一、动物
选择3～9岁成年健康无眼疾的恒河猴。由饲养人员随机选择中期妊娠(80～100 d)猴4只。另外，随机选择相应年龄的雄性或未妊娠雌性猴8只。所有动物均由河南省云台山旅游局提供。
二、试剂及配制
将牛血清白蛋白(bovine serum albumin, BSA， Fluka公司)溶解于平衡盐溶液(balanced salt solution, BSS)，分别配制0.5%和0.05 %浓度的溶液，0.22 μm微孔滤器过滤除菌，分装后冻存，分别用于前房、皮下和皮内注射用。将完全福氏佐剂(complete Freund's adjuvant, CFA， Sigma公司)与0.05 %BSA溶液等量充分混合成油包水乳剂。
, http://www.100md.com 三、前房抗原接种
使用氯胺酮(10 mg/kg)和氯丙嗪(10mg/kg)混合剂肌肉注射全麻。0.5%地卡因表面麻醉角膜。在显微镜下，使用微量注射器作斜行角膜穿刺，抽取50 μL房水。然后循原针孔将50 μL 0.5%的BSA溶液注入前房[4]。
四、 DTH的诱导和测定
按照文献描述的方法进行[3]。上述3组动物在前房接种抗原10 d后，使用0.05 % BSA+CFA混合乳剂两下肢皮下注射免疫动物，每侧注射50 μL。免疫10 d后，在左侧胸部皮肤皮内注射两点，每点0.5% BSA 100 μL，右侧皮内注射相等体积的BSS作为阴性对照。24 h后，用工程游标卡尺(精确度为0. 01 mm)测量注射部位皮肤红斑的直径大小。红斑反应直径大于5 mm者视为阳性DTH反应。
结 果
, http://www.100md.com
实验结果见表1。前房接种BSA的非妊娠动物在BSA皮肤刺激部位均未显示显著的红斑反应或炎症浸润表现。相反，前房接种BSS的阳性对照组动物，在BSA皮肤注射部位均显示不同程度的阳性红斑反应。这提示前房抗原接种动物针对抗原刺激诱导了 ACAID。4只中期妊娠动物在前房接种抗原后，在抗原BSA接种部位均显示不同程度的红斑反应，即ACAID诱导失败。
表1 眼内腔接种BSA预处理后灵长目的迟发型超敏反应
Tab 1 Delayed-type hypersensitivity reactions in
primates pretreated intraocularly with BSA Primate
number
Pregnancy
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Anterior chamber
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Skin reactivity
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Scoring of cutaneous erythema: -=no erythema, or diameter<5 mm; +=diameter between 5 and 10 mm; + +=diameter between 10 and 20 mm; + + +=diameter >20mm讨 论
眼的免疫赦免是一极其复杂和动态的免疫调节过程。本实验结果表明，在妊娠期间猴眼前房的生理免疫机制ACAID发生消失。这与我们以前在兔眼进行的实验结果相一致[3]。这些结果提示，全身生理状态的改变也可导致眼局部免疫调节机制的改变。
生理妊娠期导致ACAID消失的原因还不清楚。可能与下述两种因素有关：①妊娠造成眼局部生理功能的改变。在妊娠期间，眼内压无例外地都会发生下降，且可持续于整个妊娠期间。其下降的原因与妊娠期间房水流出易度增大和房水葡萄膜巩膜引流途径的开放程度增加有关[7]。大量的实验表明，ACAID的诱导需要来自眼的携带抗原的抗原递呈细胞直接通过小梁网进入血流，然后被脾脏所接受，而非进入引流区的局部淋巴结。最近，Eichhorm等[3]使用前列腺素增加葡萄膜巩膜引流途径，发现可导致ACAID的消失。因此，可以推测：在妊娠期间房水流出途径的改变可能促使眼内抗原通过淋巴管途径而非血管途径溢出眼外，最终导致ACAID的消失。②妊娠改变了全身的免疫反应状态。在妊娠期间，内分泌系统发生了剧烈的改变，胎盘组织分泌了大量的雌激素和孕激素。这些激素具有广泛的生物学效应，其中对免疫系统也具有直接的影响[6]。主要表现在：影响胸腺细胞的成熟和分化，广泛删除非成熟的胸腺细胞；抑制B淋巴细胞的发育；改变巨噬细胞细胞因子的分泌模式。最近的研究表明，改变上述每一个环节都可造成ACAID的消除，如摘除胸腺[7]、删除B淋巴细胞[4]和改变巨噬细胞细胞因子的分泌模式[8]。
, 百拇医药
到目前为止，在妊娠期间发生 ACAID消失的临床意义还不清楚。临床研究表明，某些眼免疫性疾病，如Behcet病，在妊娠期间随着激素水平的波动出现缓解或加重[9]。最近的实验也表明，生理性妊娠对自身免疫性葡萄膜炎的发生发展也具有显著的影响[10]。然而，目前还没有人类妊娠对眼免疫赦免状态影响的有关信息。如果其反应与本研究所描述的发现一样，那么这些现象将可能具有重要的意义。例如，可以通过妊娠相关激素的替代或对抗疗法用于治疗某些眼免疫性疾病。
[基金项目] 国家自然科学基金(No. 39970250)、教育部霍英东教育基金会和广东省自然科学基金资助
[参 考 文 献]
[1] Streilein JW. Immunoregulatory mechanism of the eye[J]. Prog Retin Eye Res, 1999, 18: 357～362.
, 百拇医药
[2] Li Z, Peng G, Li C. Anterior chamber-associated immune deviation during normal pregnancy in rabbits[J]. Chin Ophthal Res, 1999, 17:161～164.
[3] Eichhorn M, Horneber M, Streilein JW, et al. Anterior chamber-associated immune deviation elicited via primate eyes[J]. Invest Ophthalmol Vis Sci, 1993, 34:2926～2930.
[4] D'orazio TJ, Niederkorn JY. Splenic B cells are required for tolerogenic antigen presentation in the induction of anterior chamber-associated immune deviation (ACAID)[J]. Immunology, 1998, 95:47～52.
, 百拇医药
[5] Sunness JS. The pregnant woman eye[J]. Surv Ophthalmol[J], 1988, 32:219～227.
[6] Smith T, Hewson AK. Neuroendocrine-induced immune modulation and autoimmunity[M]. In: Kresina TF. ed. Immune modulating agents. New York: Marcel Dekker Inc.1998. 75～383.
[7] Wang Y, Goldschneider I, Foss D, et al. Direct thymic involvement in anterior chamber-associated immune deviation. Evidence for anondeletional mechanism of centrally induced tolerance to extrathymic antigens in adult mice[J]. J Immunol, 1997, 158:2150～2155.
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[8] Okamoto S, Streilein JW. Role of inflammatory cytokines in induction of anterior chamber-associated immune deviation[J]. Ocul Immunol Inflamm, 1998, 6:1～5.
[9] Bang D, Chun YS, Haan IB, et al. The influence of pregnancy on Bechet's disease[J]. Yonsei Med J, 1997, 38:437～440.
[10] Agarwal RK, Chan CC, Wigger B, et al. Pregnancy ameliorates induction and expression of experimental autoimmune uveitis[J]. J Immunol, 1999, 162:2648～2653.
[收稿日期]1999-05-19
[修回日期]1999-07-19, 百拇医药