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编号:10271795
雌激素对去卵巢家兔血浆氧化型低密度脂蛋白的影响
http://www.100md.com 《中国病理生理杂志》 2000年第9期
     作者:林国生 李庚山 黄从新 刘军 罗新

    单位:(湖北医科大学附属第一医院心内科, 湖北 武汉 430060)

    关键词:雌激素类;动脉粥样硬化;脂蛋白类,LDL

    中国病理生理杂志000911

    [摘 要] 目的:探讨胆固醇饲养的去卵巢兔接受17β-雌二醇(17β-estradiol, E2)替代治疗后血浆氧化型低密度脂蛋白(oxidized LDL,oxLDL)的变化及其与主动脉粥样硬化形成的关系。方法:全部兔切除双侧卵巢,喂饲含1.5%胆固醇的标准颗粒饲粒。2周后随机分成4组,其中3组分别用E2 1 mg,2 mg和4 mg替代治疗,另1组为对照组。分别在用E2后0,3,8,12周测定血清超氧化物歧化酶(SOD)活性和oxLDL水平,用计算机测定主动脉粥样斑块面积。结果:17β-雌二醇替代治疗后,血清SOD明显上升(P<0.05),而血浆oxLDL水平和主动脉粥样斑块面积显著降低(P<0.01),且与E2有量效关系。全部实验兔血浆oxLDL水平和主动脉粥样斑块面积呈显著正相关(r=0.74,P<0.01)。结论:雌激素抑制低密度脂蛋白的氧化修饰可能是其抑制主动脉粥样斑块形成的重要机制。
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    [中图分类号] R737.9 [文献标识码] A

    [文章编号] 1000-4718(2000)09-0814-04

    Effect of 17β-estradiol on the levels of plasma oxidized low

    density lipoprotein in ovariectomized rabbits

    LIN Guo-sheng, LI Geng-shan, HUANG Cong-xin, LIU Jun, LUO Xin

    (Department of Cardiology, First Affiliated Hospital of Hubei Medical University, Wuhan 430060, China)
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    [Abstract] AIM: To observe the changes of plasma oxidized low density lipoprotein(oxLDL) levels of ovariectomized cholesterol-fed rabbits with or without 17β-estradiol(E2) replacement therapy.METHODS: All rabbits were ovariectomized and fed standard chow supplemented with 1.5% cholesterol for 14 weeks. Two weeks after operation, the rabbits were randomly assigned to four groups. Three groups were treated with E2 1 mg, 2 mg, 4 mg respectively, the other group served as control. Serum superoxide dismutase (SOD) levels and plasma oxLDL levels were measured at 0, 3, 8, 12 weeks after hormone replacement therapy. The aortic atherosclerotic lesion areas were determined by computer. RESULTS: We found that there were striking increase of serum SOD levels (P<0.05) and significant decrease in both the plasma oxLDL levels and the aortic atherosclerotic lesion areas (P<0.01 respectively). Moreover, a positive correlation was found between plasma oxLDL levels and the areas of atherosclerotic plaque in all rabbits. CONCLUSIONS: Estrogen attenuates atherogenesis in cholesterol-fed ovariectomized rabbits. And this beneficial effect of E2 may be duo to its lowering of plasma oxLDL level.
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    [MeSH] Estrogens; Atherosclerosis; Lipoproteins, LDL

    氧化型低密度脂蛋白胆固醇(oxidized LDL, oxLDL)是动脉粥样硬化斑块的重要组成部分,在动脉粥样硬化斑块形成的早期和后期均起重要作用。临床研究发现,停经后女性血浆oxLDL增多,补充雌激素后血oxLDL显著减少[1]。体外实验显示17β-雌二醇(17β-estradiol,E2)能抑制LDL的氧化修饰,并且能直接增强动脉内皮细胞对oxLDL的抵抗力[2]。为了探讨在体内状态下,雌激素能否阻止LDL的氧化修饰及其机制,我们制作了动脉粥样硬化家兔模型,观察雌激素对血浆oxLDL的影响及其与动脉粥样硬化的关系。

    材 料 和 方 法

    一、实验动物分组及处理
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    雌性纯种新西兰白兔(湖北省医学科学院实验动物中心提供)34只,体重(2.61±0.57) kg,单笼饲养,供给含1.5%胆固醇的标准颗粒饲料,自由饮水。适应10天后在无菌操作下切除双侧卵巢。静养2周后随机分成对照组和1 mg组、2 mg组、4 mg组4组,1 mg组、2 mg组、4 mg组分别加喂E2(Sigma公司产品)1、2、4 mg/d。

    二、血清雌激素水平测定

    用E2前及用E2后第3周分别采耳正中动脉血2 mL,即刻1000 r/min离心30 min,血清-20℃保存。放免法测定血清雌激素水平。

    三、血清SOD活力测定

    分别于用药0、3、8、12周采耳正中动脉血2 mL,制备血清,-20℃保存。用黄嘌呤氧化酶法测定血清总SOD活力,试剂盒由南京市建成生化研究所提供,严格按说明书操作。用药后3次采血测定值的均值进行统计分析。
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    四、血浆oxLDL含量测定

    分别于用药0、3、8、12周采耳正中动脉血2 mL制备血浆,-20℃保存。采用ELISA(双抗体酶联免疫试验)法测定血浆oxLDL水平,试剂盒由上海市荣盛试剂厂提供,严格按说明书操作。用药后3次采血测定值的均值进入统计分析。

    五、主动脉粥样硬化斑块面积测定

    用药后第13周放血处死动物,仔细分离主动脉,取主动脉起始至胸主动脉结束段,纵面剖开,置10%福尔马林固定,油红0染色,用IBAS2000型自动图像分析仪(德国Opten公司产品)摄像并作图像处理,计算粥样斑块面积与主动脉内膜总面积的百分比(area of atherosclerotic lesion per superficial area of totle aorta, APS%)。

    六、统计处理
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    全部数据以均数±标准差(±s)表示,用E2前后各指标的比较用配对t检验,多组数据的比较用方差分析和q检验。

    结 果

    一、去卵巢后血清雌激素浓度

    去卵巢后血清雌激素浓度显著下降(P<0.01)[(64.37±8.45) pmol/L vs (14.46±4.15) pmol/L]。补充E2后血清雌激素浓度明显上升,与对照组比P<0.01(表1)。不同剂量的E2血清雌激素浓度差异显著,其中4 mg组与2 mg组比较P<0.01。

    表1 去卵巢兔补充E2前后血清雌激素浓度的变化
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    Tab 1 The changes of levels of serum estrogen before and after

    E2 therapy for ovariectomized rabbits(±s. pmol/L) Group(n)

    Before E2 therapy

    After E2 therapy

    Control(7)

    14.46±4.15

    11.78±3.82
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    E2 1 mg(9)

    14.86±3.05

    78.76±8.73*

    E2 2 mg(9)

    15.56±4.62

    93.47±9.55*

    E2 4 mg(9)

    14.13±3.41

    146.63±13.10*

    *P<0.01 vs control group.
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    二、血清SOD活力和血浆oxLDL含量的变化

    去卵巢后血清SOD总活力显著下降(P<0.01),oxLDL含量明显上升。补充E2后血清SOD总活力与用E2前比较,1 mg组无明显变化(P>0.05),2 mg和4 mg组显著增高(P<0.05)。用E2后各组SOD活力均显著高于对照组(P<0.05)(表2);E2各剂量组间无显著差异。血浆oxLDL在用E2后与用E2前或与对照组比较,各组均明显降低(P<0.01)(表3),血浆oxLDL与E2存在量效关系,2 mg组与1 mg组比较,P<0.05,4 mg组与2 mg组比较,P<0.01。

    表2 去卵巢兔补充E2前后血清SOD活力的变化

    Tab 2 The changes of serum SOD before and after E2
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    therapy for ovariectomized rabbits(±s. ×103 NU/L) Group(n)

    Before E2 therapy

    After E2 therapy

    Control(7)

    29.38±5.59

    24.14±5.12

    E2 1 mg(9)

    28.47±5.64
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    34.27±6.32*

    E2 2 mg(9)

    28.29±4.59

    38.22±5.77*

    E2 4 mg(9)

    26.18±4.57

    36.14±9.54*

    *P<0.05 vs control group.

    三、主动脉粥样斑块面积与主动脉内膜总面积的百分比
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    用E2后,主动脉粥样斑块面积与主动脉总面积百分比对照组为48.4%±15.9%,1 mg\, 2 mg\, 4 mg组分别为28.8%±8.1%(与对照组比较,P<0.05)、22.7%±6.7%(P<0.01)和18.8%±6.1%(P<0.01)。

    表3 去卵巢兔补充E2前后血浆oxLDL水平的变化

    Tab 3 The changes of plasma oxLDL levels before and after E2

    therapy for ovariectomized rabbits(±s. μg/L) Group(n)

    Before E2 therapy
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    After E2 therapy

    Control(7)

    92.15±17.07

    97.18±16.83

    E2 1 mg(9)

    87.59±16.25

    64.67±5.26*

    E2 2 mg(9)

    93.74±14.62

    58.60±6.91*
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    E2 4 mg(9)

    98.43±13.41

    43.62±9.17*

    *P<0.01 vs control group.

    四、血浆oxLDL与主动脉粥样斑块面积的关系

    直线相关分析显示,PAS%与血浆oxLDL含量呈显著正相关(r=0.74,P<0.01)(图1)。

    Fig 1 Correlation between plasma oxLDL levels and areas of aortic atherosclerosis.
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    图1 血浆oxLDL与PAS%的相关关系

    讨 论

    低密度脂蛋白(LDL)颗粒核芯部分的中性脂肪和表面的磷脂基团都可受到氧化修饰,其修饰可因氧自由基的攻击或受Cu2+离子等阳性离子的催化,也可由血管内皮细胞、平滑肌细胞,尤其是单核巨噬细胞系统诱导[2]。氧化修饰后的oxLDL理化特性发生了很大变化,LDL颗粒变细,表面的蛋白分子折叠,断裂,载脂蛋白B变构形成新的抗原决定簇,不能被LDL受体识别,而成为巨噬细胞清道夫受体的配体[3]。巨噬细胞吞噬大量的oxLDL形成泡沫细胞,后者又可促进LDL的氧化修饰,使oxLDL大量生成,形成恶性循环[4]

    oxLDL在动脉粥样硬化(atheroslerosis, AS)的发生发展中,起重要作用。oxLDL及变构的apoB可增强循环血液中单核细胞的趋化性,促进单核细胞向血管内皮下聚集;oxLDL可诱导单核细胞趋化因子和集落刺激因子表达,抑制巨噬细胞迁移,至血管内皮下细胞间隙聚集大量的巨噬-泡沫细胞,形成脂纹[5]。oxLDL具有很强的细胞毒效应,可选择性作用于细胞循环周期的S期,对增殖活跃期细胞的毒性作用更强,可引起泡沫细胞坏死,形成粥样斑块的脂质核心[1]。oxLDL可诱导内皮细胞表达多种粘附分子,促进T淋巴细胞和血小板的聚集和粘附;还可引起内皮细胞功能障碍,使内皮细胞变性、坏死、脱落[7]。oxLDL本身及继发的多种活性因子可引起血管平滑肌细胞由收缩型向增殖型转变,促进平滑肌细胞的增生和移行[8]
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    本实验结果显示,E2能降低oxLDL生成,而且表现出明显的量效关系。E2是一种天然雌激素,具有良好的抗氧化功能,能从不同途径拮抗LDL的氧化修饰,减少oxLDL的形成。Negre-Salvayre等[2]认为E2除削弱氧自由基对LDL的氧化作用外,还能促进内源性Vit E的再生和保护LDL颗粒内β-胡萝卜素的抗氧化修饰能力。E2能抑制单核细胞和淋巴细胞产生氧自由基,减少细胞内oxLDL的生成;抑制巨噬细胞经清道夫途径对oxLDL的摄取;E2的另外一个重要作用是直接增强细胞对oxLDL的抗毒性。

    SOD是体内维持氧自由基产生与灭活动态平衡的主要酶类,SOD活性降低可导致氧自由基在体内堆积,造成机体细胞过氧化损伤[9]。本实验结果显示,雌兔去卵巢后,SOD活性明显降低,补充E能提高SOD活性,但高剂量雌激素并不能使SOD活性进一步增高,其机制不清楚。这一结果提示,E2引起SOD活性增高可能是oxLDL生成减少的原因之一。
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    Haarbo等发现E2 4 mg能使去卵巢兔食高胆固醇后主动脉壁胆固醇的沉积量明显减少。本实验用E2 1 mg、2 mg、4 mg都能使主动脉粥样硬化斑块面积显著减小。同时发现,动脉粥样硬化斑块面积与血浆oxLDL含量明显相关,提示E2抗LDL氧化修饰可能是其预防动脉粥样硬化的重要机制之一。

    [基金项目] 湖北省科委“九五”攻关课题基金资助(No. 962P1101)

    [参 考 文 献]

    [1] Sack MN, Rader DJ, Cnnon RO.Estrogen and inhibition of oxidation of low-density lipoproteinsin postmenopausal women[J]. Lancet, 1994, 343:269-270.
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    [2] Negre-Salvayre A, Pieraggi MT, Mebile L, et al. Pretecitve effect of 17β-estradiol against the cytotoxicity of minimally oxidized LDL to cultured bovine aortic endothelial cells[J]. Atherosclerosis, 1993, 99:207-217.

    [3] Liu SX, Zhou M, Chen Y, et al. Lipopeoxidative injury to macrophages by oxidatively modified low-density lipoprotein may play an important role in foam cell formation[J]. Atherosclerosis, 1996, 121:55-63.

, http://www.100md.com     [4] Bolten EJ, Jessup W, Stauley K, et al. Enhanced LDL oxidation by murine macrophage foam cells and their failure to secrete nitric oxide[J]. Atherosclerosis, 1994, 106: 213-225.

    [5] Witztum JL, Steinberg D. Role of oxidized low-density lipoprotein in atherosclerosis[J].J Clin Invest, 1991, 88:785-792.

    [6] Kosugi K, Morel DW, Corleto PE, et al. Toxicity of oxidized low density lipoprotein to cultured fibroblasts is selective for S phase of cell cycle[J]. J Cell Physiol, 1987, 130: 311-324.
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    [7] Liao JK, Shin WS, Lee WY, et al. Oxidized low density lipoprotein decrease the expression of endothelial nitric oxide synthese[J]. J Biol Chem, 1995, 270: 319-325.

    [8] Quinn MT, Parthasarathy S, Steinberg D. Endothelial cell derived chemotactic activity for mouse peritoneal macrophages and the effects of modified forms of low density lipoprotein[J]. Proc Natl Acad Sci USA, 1985, 82:5949-5958.

    [9] Gerhard M, Walsh BW, Tawakol A, et al. Estradiol therapy combined with progesterone and endothelium-dependent vasodiation in postmenopausal women[J]. Circulation, 1998, 98:1158-1176.

    [收稿日期]1999-08-20 [修回日期]2000-01-05, 百拇医药