硝普钠对急性胰腺炎大鼠治疗作用初探
作者：李淑华 李晓霞 初彦辉 冯芹喜 胡大鹏 关利新 李志强 胡怀明
单位：(牡丹江医学院预防医学教研室，黑龙江 牡丹江 157011)
关键词：胰腺炎；一氧化氮；超氧化物岐化酶；硝普钠
中国病理生理杂志000923
[摘 要] 目的与方法：为探索硝普钠对急性胰腺炎(AP)的治疗作用，采用胰管内注射牛磺胆酸钠溶液的方法建立大鼠AP模型，并用外源性一氧化氮(NO)供体硝普钠(SNP)实验性治疗，动态观察AP模型复制后(8、16、24、48 h)血浆NO、超氧化物歧化酶(SOD)和淀粉酶含量的变化及胰腺组织学改变。结果：AP组血浆NO、SOD明显下降(P<0.05)，并持续24 h以上，血浆淀粉酶含量明显升高(P<0.05)，而治疗组血浆NO、SOD明显高于非治疗组(P<0.05)，淀粉酶含量明显下降(P<0.05)。治疗组胰腺组织病理损害明显轻于模型组。结论：大鼠实验性急性胰腺炎时，血浆NO含量、SOD活性明显下降，早期腹腔注射硝普钠能显著升高血浆NO、 SOD含量，降低血浆淀粉酶含量，减轻胰腺病损。本实验为临床急性胰腺炎的早期治疗提供一新途径。
, 百拇医药
[中图分类号] R576 [文献标识码] A
[文章编号] 1000-4718(2000)09-0852-02
[MeSH] Pancreatitis; Nitric oxide; Superoxide dismutase; Nitroprusside
急性胰腺炎(acute pancreatitis, AP)是一种发病机理复杂，治疗棘手的危重急症，其确切发病机理尚未清楚，一氧化氮(nitric oxide NO)作为一种新的神经递质，在急性重症胰腺炎的作用已受学者们瞩目[1]。硝普钠可在体内代谢产生NO，我们利用其作为外源性NO的供体对AP大鼠进行实验性治疗，进一步探讨AP的发病机制及硝普钠的治疗作用，为临床治疗提供新的启示及理论依据。
材 料 和 方 法
, 百拇医药
一、实验动物及其分组
Wistar大鼠54只，雌雄各半，体重(250±50) g(白求恩医科大学实验动物中心提供)，随机分为3组，AP组18只；AP+硝普钠组(治疗组)18只；假手术对照组18只，实验前12 h禁食、禁水。
二、方法
大鼠急性胰腺炎模型的复制 将实验大鼠用2%戊巴比妥钠(4 mL/kg体重)腹腔注射麻醉，取上腹正中切口入腹，在胆总管及胰管入十二指肠处作暂时性阻断，经胰管逆行穿刺加压注射5%的牛磺胆酸钠溶液0.1 mL/100 g，穿刺毕后压迫穿刺点5 min，解除阻断，关腹。
治疗组于AP模型复制后10 min由腹壁逆行入腹腔注射硝普钠0.05 mg/100 g，3 h后重复给药1次，共2次。
假手术对照组开腹后按上述方法在胰管穿刺点加压逆行注射生理盐水0.5 mL。
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各组分别于模型复制后8 h、16 h、24 h、48 h采血(2 mL)，并于各时点每组分别处死3只，观察胰腺组织学改变，其余鼠7 d后处死。
血浆NO含量测定采用一氧化氮测试盒提供的“硝酸还原酶法”。NO化学性质活泼，在体内代谢很快转为NO-2，而NO-2又进一步转化为NO-3，本法利用硝酸还原酶特异性将NO-3还原为NO-2，通过显色深浅测定其浓度的高低，NO-2/NO-3的含量可反映血浆中NO水平。
三、试剂
牛磺胆酸钠为simga公司产品：超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)、NO试剂盒为南京建成生物工程研究所产品；血浆淀粉酶试剂盒为上海科欣生物技术研究所产品；硝普钠为武汉第二制药厂产品。
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四、统计处理
用方差分析和U检验，数据用
±s表示。
结 果
一、胰腺组织学改变
大体标本所见 AP组胰腺组织随病程日趋加重，术后8 h胰腺高度充血水肿，有少量散在点状出血，术后24 h大片出血，灶片状坏死。治疗组各时点胰腺改变均明显较轻，术后24 h呈轻度水肿、充血。7 d后近似正常外观。
光镜所见 术后8 h，AP组胰腺细胞高度肿胀，间质大量炎细胞浸润和红细胞渗出，术手24 h见胰腺实质内点、灶状坏死区。治疗组腺细胞轻度肿胀，间质部分炎细胞浸润，未见坏死及其他。
二、不同时期3组实验动物血浆各指标含量比较(见表1、表2、表3)
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表1 3组实验动物血浆NO-2/NO-3含量
Tab 1 Changes of NO-2/NO-3 content in plasma of three groups (±s. n=18) Group
NO-2/NO-3(μmol/L)
8 h
16 h
24 h
, 百拇医药
48 h
Control
2.30±0.60
2.35±0.49
2.30±0.24
2.10±0.50
AP
1.60±0.41*
1.60±0.35*
1.59±0.50*
1.67±0.16*
, 百拇医药
AP+SNP
3.80±0.60* *
3.30±0.35* *
3.60±0.40* *
3.35±0.50* *
*P<0.05 vs control group；* * P<0.05 vs AP group. AP：actute pancreatitis; SNP:sodium nitroprusside. 表2 3组实验动物血浆SOD活性
Tab 2 Changes of SOD activity in plasma of three groups(±s. n=18) Group
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SOD(μU/L)
8 h
16 h
24 h
48 h
Control
188.96±6.81
188.41±3.52
188.25±8.79
189.82±5.53
AP
138.91±3.71*
, 百拇医药
126.56±9.91*
131.44±9.29*
133.86±7.25*
AP+SNP
152.91±7.29* *
150.49±6.47* *
158.19±9.91* *
158.77±9.84* *
*P<0.05 vs control group；* *P<0.05 vs AP group.表3 3组实验动物血浆淀粉酶含量
, 百拇医药
Tab 3 Changes of amylase in plasma of three groups (±s. n=18) Group
Amylase (U/L)
8 h
16 h
24 h
48 h
Control
545.74±24.41
549.27±22.69
556.05±20.22
, 百拇医药
569.06±12.42
AP
746.14±15.93*
774.42±7.24*
811.92±8.94*
881.88±6.94*
AP+SNP
709.79±19.40* *
712.11±14.71* *
740.02±16.53* *
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767.39±12.71* *
*P<0.05 vs control group； ** P<0.05 vs AP group.讨 论
实验研究已揭示急性胰腺炎时，胰腺血循环障碍显著紊乱并作为一种持续性损伤机制贯穿于AP发展的过程，是水肿性胰腺炎向出血坏死性转化的重要因素[2]，NO作为已确认的血管内皮舒张因子[3]具有广泛的生理功能，参与感染、免疫、脑血管病、肝硬化等的发病机制[4]，对重症胰腺炎的作用也引起了学者们的重视[5]，有调节胰腺微血管通透性和血流的作用[1、2]。
本实验结果表明 AP组血浆SOD活性、NO含量明显低于假手术对照组(P<0.05)，淀粉酶含量明显升高(P<0.05)，经硝普钠治疗后血浆NO、SOD明显升高(P<0.05)，淀粉酶含量下降(P<0.05)。胰腺组织学改变明显减轻，说明NO的生成减少和SOD的活性下降参与了急性胰腺炎的病理过程。
, 百拇医药
本实验结果提示 ①NO的生成减少导致胰腺组织早期的微循环障碍；②胰腺组织缺血、缺氧，可能导致SOD活性下降及胰腺组织的病理损害；③硝普钠通过提供外源性NO可以改善胰腺血液循环，从而减轻胰腺缺血、缺氧环境使SOD活性升高，胰腺病损减轻。④因胰腺组织的修复需要有一个时间过程，检测时治疗组血浆淀粉酶含量虽显著下降，但仍可高于对照组。因此，急性胰腺时，早期应用硝普钠可以控制AP的发展，减轻病损，改善预后。本实验为临床急性胰腺炎的早期治疗提供了一新的启示及理论依据。
[参 考 文 献]
[1] Moncada S, Palmer RMJ, Higgs EA. Nitric oxide physiology, Pathophysiology, and pharmacology[J]. Pharmacol REW, 1991, 43(1):109-142.
[2] 周总光.胰腺微循环障碍与急性坏死性胰腺炎[J].国外医学外科学分册，1997，4：201-203.
[3] 杨克敌.新的信使分子—一氧化氮在神经毒理学研究中应用[J].国外医学卫生分册，1995，5，257-260.
[4] 张延玲.一氧化氮与外科[J].国外医学外科学分册，1996，23(3)：150-152.
[5] 张群华，蔡 端，吴树强，等，一氧化氮等炎性介质与急性坏死性胰腺炎的关系[J].中华实验外科杂志，1997，14(4)：197-198.
[收稿日期]1999-07-19 [修回日期]2000-02-28, http://www.100md.com
单位：(牡丹江医学院预防医学教研室，黑龙江 牡丹江 157011)
关键词：胰腺炎；一氧化氮；超氧化物岐化酶；硝普钠
中国病理生理杂志000923
[摘 要] 目的与方法：为探索硝普钠对急性胰腺炎(AP)的治疗作用，采用胰管内注射牛磺胆酸钠溶液的方法建立大鼠AP模型，并用外源性一氧化氮(NO)供体硝普钠(SNP)实验性治疗，动态观察AP模型复制后(8、16、24、48 h)血浆NO、超氧化物歧化酶(SOD)和淀粉酶含量的变化及胰腺组织学改变。结果：AP组血浆NO、SOD明显下降(P<0.05)，并持续24 h以上，血浆淀粉酶含量明显升高(P<0.05)，而治疗组血浆NO、SOD明显高于非治疗组(P<0.05)，淀粉酶含量明显下降(P<0.05)。治疗组胰腺组织病理损害明显轻于模型组。结论：大鼠实验性急性胰腺炎时，血浆NO含量、SOD活性明显下降，早期腹腔注射硝普钠能显著升高血浆NO、 SOD含量，降低血浆淀粉酶含量，减轻胰腺病损。本实验为临床急性胰腺炎的早期治疗提供一新途径。
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[中图分类号] R576 [文献标识码] A
[文章编号] 1000-4718(2000)09-0852-02
[MeSH] Pancreatitis; Nitric oxide; Superoxide dismutase; Nitroprusside
急性胰腺炎(acute pancreatitis, AP)是一种发病机理复杂，治疗棘手的危重急症，其确切发病机理尚未清楚，一氧化氮(nitric oxide NO)作为一种新的神经递质，在急性重症胰腺炎的作用已受学者们瞩目[1]。硝普钠可在体内代谢产生NO，我们利用其作为外源性NO的供体对AP大鼠进行实验性治疗，进一步探讨AP的发病机制及硝普钠的治疗作用，为临床治疗提供新的启示及理论依据。
材 料 和 方 法
, 百拇医药
一、实验动物及其分组
Wistar大鼠54只，雌雄各半，体重(250±50) g(白求恩医科大学实验动物中心提供)，随机分为3组，AP组18只；AP+硝普钠组(治疗组)18只；假手术对照组18只，实验前12 h禁食、禁水。
二、方法
大鼠急性胰腺炎模型的复制 将实验大鼠用2%戊巴比妥钠(4 mL/kg体重)腹腔注射麻醉，取上腹正中切口入腹，在胆总管及胰管入十二指肠处作暂时性阻断，经胰管逆行穿刺加压注射5%的牛磺胆酸钠溶液0.1 mL/100 g，穿刺毕后压迫穿刺点5 min，解除阻断，关腹。
治疗组于AP模型复制后10 min由腹壁逆行入腹腔注射硝普钠0.05 mg/100 g，3 h后重复给药1次，共2次。
假手术对照组开腹后按上述方法在胰管穿刺点加压逆行注射生理盐水0.5 mL。
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各组分别于模型复制后8 h、16 h、24 h、48 h采血(2 mL)，并于各时点每组分别处死3只，观察胰腺组织学改变，其余鼠7 d后处死。
血浆NO含量测定采用一氧化氮测试盒提供的“硝酸还原酶法”。NO化学性质活泼，在体内代谢很快转为NO-2，而NO-2又进一步转化为NO-3，本法利用硝酸还原酶特异性将NO-3还原为NO-2，通过显色深浅测定其浓度的高低，NO-2/NO-3的含量可反映血浆中NO水平。
三、试剂
牛磺胆酸钠为simga公司产品：超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)、NO试剂盒为南京建成生物工程研究所产品；血浆淀粉酶试剂盒为上海科欣生物技术研究所产品；硝普钠为武汉第二制药厂产品。
, http://www.100md.com
四、统计处理
用方差分析和U检验，数据用
±s表示。结 果
一、胰腺组织学改变
大体标本所见 AP组胰腺组织随病程日趋加重，术后8 h胰腺高度充血水肿，有少量散在点状出血，术后24 h大片出血，灶片状坏死。治疗组各时点胰腺改变均明显较轻，术后24 h呈轻度水肿、充血。7 d后近似正常外观。
光镜所见 术后8 h，AP组胰腺细胞高度肿胀，间质大量炎细胞浸润和红细胞渗出，术手24 h见胰腺实质内点、灶状坏死区。治疗组腺细胞轻度肿胀，间质部分炎细胞浸润，未见坏死及其他。
二、不同时期3组实验动物血浆各指标含量比较(见表1、表2、表3)
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表1 3组实验动物血浆NO-2/NO-3含量
Tab 1 Changes of NO-2/NO-3 content in plasma of three groups (
±s. n=18) GroupNO-2/NO-3(μmol/L)
8 h
16 h
24 h
, 百拇医药
48 h
Control
2.30±0.60
2.35±0.49
2.30±0.24
2.10±0.50
AP
1.60±0.41*
1.60±0.35*
1.59±0.50*
1.67±0.16*
, 百拇医药
AP+SNP
3.80±0.60* *
3.30±0.35* *
3.60±0.40* *
3.35±0.50* *
*P<0.05 vs control group；* * P<0.05 vs AP group. AP：actute pancreatitis; SNP:sodium nitroprusside. 表2 3组实验动物血浆SOD活性
Tab 2 Changes of SOD activity in plasma of three groups(
±s. n=18) Group, http://www.100md.com
SOD(μU/L)
8 h
16 h
24 h
48 h
Control
188.96±6.81
188.41±3.52
188.25±8.79
189.82±5.53
AP
138.91±3.71*
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126.56±9.91*
131.44±9.29*
133.86±7.25*
AP+SNP
152.91±7.29* *
150.49±6.47* *
158.19±9.91* *
158.77±9.84* *
*P<0.05 vs control group；* *P<0.05 vs AP group.表3 3组实验动物血浆淀粉酶含量
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Tab 3 Changes of amylase in plasma of three groups (
±s. n=18) GroupAmylase (U/L)
8 h
16 h
24 h
48 h
Control
545.74±24.41
549.27±22.69
556.05±20.22
, 百拇医药
569.06±12.42
AP
746.14±15.93*
774.42±7.24*
811.92±8.94*
881.88±6.94*
AP+SNP
709.79±19.40* *
712.11±14.71* *
740.02±16.53* *
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767.39±12.71* *
*P<0.05 vs control group； ** P<0.05 vs AP group.讨 论
实验研究已揭示急性胰腺炎时，胰腺血循环障碍显著紊乱并作为一种持续性损伤机制贯穿于AP发展的过程，是水肿性胰腺炎向出血坏死性转化的重要因素[2]，NO作为已确认的血管内皮舒张因子[3]具有广泛的生理功能，参与感染、免疫、脑血管病、肝硬化等的发病机制[4]，对重症胰腺炎的作用也引起了学者们的重视[5]，有调节胰腺微血管通透性和血流的作用[1、2]。
本实验结果表明 AP组血浆SOD活性、NO含量明显低于假手术对照组(P<0.05)，淀粉酶含量明显升高(P<0.05)，经硝普钠治疗后血浆NO、SOD明显升高(P<0.05)，淀粉酶含量下降(P<0.05)。胰腺组织学改变明显减轻，说明NO的生成减少和SOD的活性下降参与了急性胰腺炎的病理过程。
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本实验结果提示 ①NO的生成减少导致胰腺组织早期的微循环障碍；②胰腺组织缺血、缺氧，可能导致SOD活性下降及胰腺组织的病理损害；③硝普钠通过提供外源性NO可以改善胰腺血液循环，从而减轻胰腺缺血、缺氧环境使SOD活性升高，胰腺病损减轻。④因胰腺组织的修复需要有一个时间过程，检测时治疗组血浆淀粉酶含量虽显著下降，但仍可高于对照组。因此，急性胰腺时，早期应用硝普钠可以控制AP的发展，减轻病损，改善预后。本实验为临床急性胰腺炎的早期治疗提供了一新的启示及理论依据。
[参 考 文 献]
[1] Moncada S, Palmer RMJ, Higgs EA. Nitric oxide physiology, Pathophysiology, and pharmacology[J]. Pharmacol REW, 1991, 43(1):109-142.
[2] 周总光.胰腺微循环障碍与急性坏死性胰腺炎[J].国外医学外科学分册，1997，4：201-203.
[3] 杨克敌.新的信使分子—一氧化氮在神经毒理学研究中应用[J].国外医学卫生分册，1995，5，257-260.
[4] 张延玲.一氧化氮与外科[J].国外医学外科学分册，1996，23(3)：150-152.
[5] 张群华，蔡 端，吴树强，等，一氧化氮等炎性介质与急性坏死性胰腺炎的关系[J].中华实验外科杂志，1997，14(4)：197-198.
[收稿日期]1999-07-19 [修回日期]2000-02-28, http://www.100md.com