用B7＋瘤细胞诱导抗肿瘤CTL及其杀伤活性的测定
作者：胡锦跃 孙去病
单位：湖南医科大学肿瘤研究所免疫生物学研究室，湖南 长沙 410078
关键词：
中国病理生理杂志0010226
目的和方法：研究利用脂质体转染的方法，将小鼠B7基因导入C57BL小鼠大肠癌细胞株CMT93细胞(弱免疫原性)。用800 μg/mL的G418筛选得到阳性克隆，免疫组织化学检测发现B7分子得到充分表达，主要以细胞膜染色为主，也有部分细胞浆着色。将5×106 B7+ CMT93细胞接种于C57BL小鼠背部皮下，以相同细胞数的野生型瘤细胞接种为阴性对照。结果：实验组小鼠(n=4)第2周开始肿瘤的体积逐渐缩小，至第4周末肿瘤全部消失，而对照组肿瘤呈进行性生长(n=3)，至第4周末肿瘤大小为(1.7654±0.4963) cm2(长径×短径)。实验组与对照组相比，差异显著(P<0.01)。用B7+ CMT93瘤细胞致敏小鼠后再接种野生型的CMT93瘤细胞，小鼠全部不成瘤(n=4)，未致敏小鼠除1只未成瘤外，余3只全部成瘤且肿瘤呈进行性生长(P<0.05)。用B7+ CMT93瘤细胞和野生型瘤细胞5×106分别经腹腔免疫小鼠，7 d后取腹腔浸润细胞进行分析。结果发现来源于实验组小鼠的腹腔细胞中，镜下观察已无肿瘤细胞生长，而对照组中可见有大量肿瘤细胞生长(Ig=6.40±0.33 (x±s),与实验组相比P<0.001)。利用贴壁法去除肿瘤细胞后，发现B7+ CMT93所诱导的CT数量显著多于野生型的CMT93(P<0.05)，lg 分别为6.30±0.26和5.45±0.75，说明B7+的瘤细胞能更有效地活化CTL。MTT法检测B7+ CMT93和野生型CMT93所诱导的CTL对CMT93的杀伤活性，发现B7+ CMT93所诱导的CTL其杀伤率显著高于CMT93诱导的CTL(P<0.05, n均为4)。在效靶比为5∶1， 10∶1， 20∶1， 40∶1时，前者的杀伤率分别为50.64±9.38， 64.45±8.99， 76.75±5.32， 85.89±7.88，后者的杀伤率分别为40.58±14.04， 59.40±17.47， 74.78±19.12， 76.29±16.20。用MTT法检测B7+ CMT93所诱导的CTL对B7+ CMT93及野生型CMT93的杀伤活性。结果发现所诱导的CTL对B7+ CMT93的杀伤率显著高于对野生型CMT93的杀伤率(P<0.01，n均为4)。在效靶比为5∶1， 10∶1， 20∶1， 40∶1时，杀伤率分别为68.50±7.54， 76.90±4.50， 82.97±7.32， 93.19±3.20和50.64±9.38， 64.45±8.99， 76.75±5.32， 85.89±7.88。结论：对于有免疫原性的肿瘤细胞而言，通过表达B7分子能诱导更强的抗肿瘤免疫。而且，在CTL的效应阶段，B7分子能促进CTL的杀伤效应。, 百拇医药
单位：湖南医科大学肿瘤研究所免疫生物学研究室，湖南 长沙 410078
关键词：
中国病理生理杂志0010226
目的和方法：研究利用脂质体转染的方法，将小鼠B7基因导入C57BL小鼠大肠癌细胞株CMT93细胞(弱免疫原性)。用800 μg/mL的G418筛选得到阳性克隆，免疫组织化学检测发现B7分子得到充分表达，主要以细胞膜染色为主，也有部分细胞浆着色。将5×106 B7+ CMT93细胞接种于C57BL小鼠背部皮下，以相同细胞数的野生型瘤细胞接种为阴性对照。结果：实验组小鼠(n=4)第2周开始肿瘤的体积逐渐缩小，至第4周末肿瘤全部消失，而对照组肿瘤呈进行性生长(n=3)，至第4周末肿瘤大小为(1.7654±0.4963) cm2(长径×短径)。实验组与对照组相比，差异显著(P<0.01)。用B7+ CMT93瘤细胞致敏小鼠后再接种野生型的CMT93瘤细胞，小鼠全部不成瘤(n=4)，未致敏小鼠除1只未成瘤外，余3只全部成瘤且肿瘤呈进行性生长(P<0.05)。用B7+ CMT93瘤细胞和野生型瘤细胞5×106分别经腹腔免疫小鼠，7 d后取腹腔浸润细胞进行分析。结果发现来源于实验组小鼠的腹腔细胞中，镜下观察已无肿瘤细胞生长，而对照组中可见有大量肿瘤细胞生长(Ig=6.40±0.33 (x±s),与实验组相比P<0.001)。利用贴壁法去除肿瘤细胞后，发现B7+ CMT93所诱导的CT数量显著多于野生型的CMT93(P<0.05)，lg 分别为6.30±0.26和5.45±0.75，说明B7+的瘤细胞能更有效地活化CTL。MTT法检测B7+ CMT93和野生型CMT93所诱导的CTL对CMT93的杀伤活性，发现B7+ CMT93所诱导的CTL其杀伤率显著高于CMT93诱导的CTL(P<0.05, n均为4)。在效靶比为5∶1， 10∶1， 20∶1， 40∶1时，前者的杀伤率分别为50.64±9.38， 64.45±8.99， 76.75±5.32， 85.89±7.88，后者的杀伤率分别为40.58±14.04， 59.40±17.47， 74.78±19.12， 76.29±16.20。用MTT法检测B7+ CMT93所诱导的CTL对B7+ CMT93及野生型CMT93的杀伤活性。结果发现所诱导的CTL对B7+ CMT93的杀伤率显著高于对野生型CMT93的杀伤率(P<0.01，n均为4)。在效靶比为5∶1， 10∶1， 20∶1， 40∶1时，杀伤率分别为68.50±7.54， 76.90±4.50， 82.97±7.32， 93.19±3.20和50.64±9.38， 64.45±8.99， 76.75±5.32， 85.89±7.88。结论：对于有免疫原性的肿瘤细胞而言，通过表达B7分子能诱导更强的抗肿瘤免疫。而且，在CTL的效应阶段，B7分子能促进CTL的杀伤效应。, 百拇医药