抑制白血病细胞增殖的骨髓基质细胞分泌因子的研究
作者：蔡辉国 姜学英 徐晶 于珍 马双 宋增璇
单位：中国医学科学院 中国协和医科大学血液学研究所 实验血液学国家重点实验室，天津 300020
关键词：
中国病理生理杂志0010193
骨髓基质细胞在分泌造血所需刺激因子的同时也分泌负性调节因子。我们从人骨髓成纤维细胞克隆亚系(HFCL-1)条件培养液中发现新的能抑制HL-60细胞增殖的活性组分。
1. 采用中空纤维柱超滤浓缩、DEAE cellulose-52、 Phenyl Sepharose、 Polybuffer exchanger chromatofocusing、 Sephacryl S-100、 Prep-PAGE和HPLC等程序，从HFCL-1细胞条件培养液中纯化出9个具有明显抑制HL-60细胞增殖的活性组分。其pI值在4～6之间，分子量在35～50 kD之间，在还原型8%～14% SDS-PAGE分析中呈2～3条主要区带。2.采用MTT实验监测活性组分对HL-60细胞增殖的抑制能力。采用NBT还原实验和酸性磷酸酶测定观察活性组分对HL-60细胞诱导分化的能力。结果发现这些活性组分可为NBT阳性和阴性组两组。NBT阳性组：在一定剂量(抑制率在60%～80%)下产生诱导分化作用。低于此剂量，作用不明显；高于此剂量，可完全抑制HL-60细胞的增殖。NBT阴性组：适当剂量对HL-60细胞的增殖有明显抑制作用，无诱导分化作用。高剂量能完全抑制HL-60细胞的增殖。3.活性组分对正常骨髓细胞体外培养有一定的抑制作用。4.活性组分对U937和K562白血病细胞有明显的抑制作用。已知的造血负调节因子有TGF-α、TGF-β、MIP-1α、LIF和小肽(AsSDKP和pEEDCK)等。从活性组分的pI值和分子量来看，我们分离的活性组分不可能是TGF-β(pI值8.5～10，MW 12.5 kD)、MIP-1α(MW 18 kD)和LIF(pI值8.5～9.0， MW 20 kD)。LIF对造血调控有正、负双重调节作用，TNF-α对HL-60细胞有正、负双向调节作用。正是由于TNF-α和LIF的这种双向作用，使它们虽有基因工程产品问世，却难以应用于临床。可见从生物性质来看，这些活性组分也有别于TNF-α和LIF，很可能是一种新型的造血负调节因子。, 百拇医药
单位：中国医学科学院 中国协和医科大学血液学研究所 实验血液学国家重点实验室，天津 300020
关键词：
中国病理生理杂志0010193
骨髓基质细胞在分泌造血所需刺激因子的同时也分泌负性调节因子。我们从人骨髓成纤维细胞克隆亚系(HFCL-1)条件培养液中发现新的能抑制HL-60细胞增殖的活性组分。
1. 采用中空纤维柱超滤浓缩、DEAE cellulose-52、 Phenyl Sepharose、 Polybuffer exchanger chromatofocusing、 Sephacryl S-100、 Prep-PAGE和HPLC等程序，从HFCL-1细胞条件培养液中纯化出9个具有明显抑制HL-60细胞增殖的活性组分。其pI值在4～6之间，分子量在35～50 kD之间，在还原型8%～14% SDS-PAGE分析中呈2～3条主要区带。2.采用MTT实验监测活性组分对HL-60细胞增殖的抑制能力。采用NBT还原实验和酸性磷酸酶测定观察活性组分对HL-60细胞诱导分化的能力。结果发现这些活性组分可为NBT阳性和阴性组两组。NBT阳性组：在一定剂量(抑制率在60%～80%)下产生诱导分化作用。低于此剂量，作用不明显；高于此剂量，可完全抑制HL-60细胞的增殖。NBT阴性组：适当剂量对HL-60细胞的增殖有明显抑制作用，无诱导分化作用。高剂量能完全抑制HL-60细胞的增殖。3.活性组分对正常骨髓细胞体外培养有一定的抑制作用。4.活性组分对U937和K562白血病细胞有明显的抑制作用。已知的造血负调节因子有TGF-α、TGF-β、MIP-1α、LIF和小肽(AsSDKP和pEEDCK)等。从活性组分的pI值和分子量来看，我们分离的活性组分不可能是TGF-β(pI值8.5～10，MW 12.5 kD)、MIP-1α(MW 18 kD)和LIF(pI值8.5～9.0， MW 20 kD)。LIF对造血调控有正、负双重调节作用，TNF-α对HL-60细胞有正、负双向调节作用。正是由于TNF-α和LIF的这种双向作用，使它们虽有基因工程产品问世，却难以应用于临床。可见从生物性质来看，这些活性组分也有别于TNF-α和LIF，很可能是一种新型的造血负调节因子。, 百拇医药