山莨菪碱对H2O2所致内皮细胞凋亡的保护及其分子机制——对NF-κΒ/I-κΒ信号转导通路的影响
作者：葛磊 肖献忠 尢家騄
单位：湖南医科大学病理生理学教研室，湖南 长沙 410078
关键词：
中国病理生理杂志001065
创伤、感染等多种病因可导致全身炎症反应综合症(SIRS)。内皮细胞(EC)即是炎症反应的靶器官，也积极参与炎症反应的启动和进展。过氧化氢等活性氧(ROS)被认为是诱导凋亡的重要因素，很多损伤因子可能通过ROS介导及影响细胞氧化-抗氧化平衡诱导凋亡。NF-κB/I-κB途径被认为是炎症及凋亡信号传导的关键，很多受其调控的基因在炎症反应及凋亡中起重要作用。山莨菪碱(Ani)在抗休克治疗中能有效保护细胞，对其机制的认识虽不断加深，但其分子机制仍需进一步阐明。目的和方法：以过氧化氢(H2O2)损伤体外培养牛肺动脉内皮细胞(BPAEC)，对过氧化氢介导内皮细胞凋亡的机制及NF-κB/I-κB在凋亡中的作用进行探讨，观察Ani是否抑制H2O2诱导BPAEC凋亡，并探讨Ani保护凋亡的分子机制。体外培养的BPAEC随机分组如下：对照组；H2O2损伤组：0.5 mMH2O2损伤12 h；Ani组：不同浓度Ani(0.05, 0.1, 0.2 mg/mL)处理45 min后加0.5 mmH2O2损伤12 h。结果：①低浓度H2O2(0.5 mM)可以损伤BPAEC并诱导凋亡。H2O2损伤组细胞台盼蓝着染率及LDH释放率均高于对照组(P<0.01)；细胞总抗氧化能力(T-AOC)比对照组下降(P<0.01)，MDA较对照组升高(P<0.01)；琼脂糖凝胶电泳发现凋亡细胞的梯状电泳条带；细胞荧光染色及末端标记(TUNEL)见凋亡形态特征。Western blot分析发现过氧化氢处理使I-κB的量减少，免疫组化观察到NF-κB向核内转位，且上述变化早于凋亡的发生。② Ani对H2O2诱导的内皮细胞损伤具保护作用。Ani组与H2O2损伤组比较，台盼蓝着染率及LDH释放率下降；T-AOC上升、MDA下降(P<0.01)；在Ani 0.2 mg/mL组DNA琼脂糖凝胶电泳未见凋亡细胞特征性的梯状电脉条带；荧光染色及TUNEL未见凋亡细胞特征；并且山莨菪碱处理使I-κB量的下降明显减轻，NF-κB的活化转位被抑制。结论：1.低浓度过氧化氢过氧化氢可能通过NF-κB/I-κB途径的激活介导BPAEC的凋亡。2.山莨菪碱可能通过抑制I-κB的降解而防止NF-κB活化，从而保护BPAEC凋亡。, 百拇医药
单位：湖南医科大学病理生理学教研室，湖南 长沙 410078
关键词：
中国病理生理杂志001065
创伤、感染等多种病因可导致全身炎症反应综合症(SIRS)。内皮细胞(EC)即是炎症反应的靶器官，也积极参与炎症反应的启动和进展。过氧化氢等活性氧(ROS)被认为是诱导凋亡的重要因素，很多损伤因子可能通过ROS介导及影响细胞氧化-抗氧化平衡诱导凋亡。NF-κB/I-κB途径被认为是炎症及凋亡信号传导的关键，很多受其调控的基因在炎症反应及凋亡中起重要作用。山莨菪碱(Ani)在抗休克治疗中能有效保护细胞，对其机制的认识虽不断加深，但其分子机制仍需进一步阐明。目的和方法：以过氧化氢(H2O2)损伤体外培养牛肺动脉内皮细胞(BPAEC)，对过氧化氢介导内皮细胞凋亡的机制及NF-κB/I-κB在凋亡中的作用进行探讨，观察Ani是否抑制H2O2诱导BPAEC凋亡，并探讨Ani保护凋亡的分子机制。体外培养的BPAEC随机分组如下：对照组；H2O2损伤组：0.5 mMH2O2损伤12 h；Ani组：不同浓度Ani(0.05, 0.1, 0.2 mg/mL)处理45 min后加0.5 mmH2O2损伤12 h。结果：①低浓度H2O2(0.5 mM)可以损伤BPAEC并诱导凋亡。H2O2损伤组细胞台盼蓝着染率及LDH释放率均高于对照组(P<0.01)；细胞总抗氧化能力(T-AOC)比对照组下降(P<0.01)，MDA较对照组升高(P<0.01)；琼脂糖凝胶电泳发现凋亡细胞的梯状电泳条带；细胞荧光染色及末端标记(TUNEL)见凋亡形态特征。Western blot分析发现过氧化氢处理使I-κB的量减少，免疫组化观察到NF-κB向核内转位，且上述变化早于凋亡的发生。② Ani对H2O2诱导的内皮细胞损伤具保护作用。Ani组与H2O2损伤组比较，台盼蓝着染率及LDH释放率下降；T-AOC上升、MDA下降(P<0.01)；在Ani 0.2 mg/mL组DNA琼脂糖凝胶电泳未见凋亡细胞特征性的梯状电脉条带；荧光染色及TUNEL未见凋亡细胞特征；并且山莨菪碱处理使I-κB量的下降明显减轻，NF-κB的活化转位被抑制。结论：1.低浓度过氧化氢过氧化氢可能通过NF-κB/I-κB途径的激活介导BPAEC的凋亡。2.山莨菪碱可能通过抑制I-κB的降解而防止NF-κB活化，从而保护BPAEC凋亡。, 百拇医药