PDGF-B链基因上游序列中与HMGI结合A-T丰富区的初步分离和鉴定
作者：王小明 邱劲 李健 沈传陆 李素敏 斯勤 郭恒怡 吴其夏
单位：中国医学科学院基础医学研究所 中国协和医科大学基础医学院病理生理室， 北京 100005
关键词：
中国病理生理杂志001050
一些动脉粥样硬化相关致病因素可诱导内皮细胞和单核细胞中血小板源生长因子-B链(PDGF-B)基因表达，这一过程涉及众多反式作用因子和基因上游调控序列之间的相互作用。染色体结合蛋白——高迁移率蛋白Ⅰ(HMGI)可通过与DNA上的A-T丰富区结合，影响多种基因的转录。目的：分离和鉴定PDGF-B链基因上游序列中与HMGI结合的A-T丰富区，并初步分析其功能。方法：DNA重组技术和凝胶迁移率改变法(EMSA)。结果：重组人HMGI蛋白(rHMGI)可与PDGF-B链基因上游序列结合。在-1758/+43 bp片段内至少存在两个与HMGI结合的A-T丰富区，其中一个位于-190/+43 bp片段内，可能是涉及TATA盒在内的TTTATAAA，另一个位于-1304/-990 bp内，该区有两个TTTATAAA序列。被蛋白激酶C和CDC2激酶磷酸化的rHMGI与-1304/990 bp片段内A-T丰富区的结合活性明显减低，但未观察到PKC磷酸化明显减弱rHMGI与-190/+43 bp片段的结合。在肿瘤坏死因子α(TNFα)，弱氧化低密度脂蛋白(mmLDL)和血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)处理的ECV304核抽提物中，加入低剂量的rHMGI显著增强核转录因子NF-κB与PDGF-B链基因上游切应力反应元件(SSRE)的结合，并呈一定的剂量依赖性。结论：高迁移率蛋白Ⅰ可与PDGF-B链基因上游一个或数个A-T丰富区结合，促进转录因子NF-κB与SSRE的相互作用，并可能受蛋白激酶C和CDC2激酶的磷酸化调节。这对深入阐明致动脉粥样硬化相关因素诱导PDGF-B链基因转录的机制具有重要意义, 百拇医药
单位：中国医学科学院基础医学研究所 中国协和医科大学基础医学院病理生理室， 北京 100005
关键词：
中国病理生理杂志001050
一些动脉粥样硬化相关致病因素可诱导内皮细胞和单核细胞中血小板源生长因子-B链(PDGF-B)基因表达，这一过程涉及众多反式作用因子和基因上游调控序列之间的相互作用。染色体结合蛋白——高迁移率蛋白Ⅰ(HMGI)可通过与DNA上的A-T丰富区结合，影响多种基因的转录。目的：分离和鉴定PDGF-B链基因上游序列中与HMGI结合的A-T丰富区，并初步分析其功能。方法：DNA重组技术和凝胶迁移率改变法(EMSA)。结果：重组人HMGI蛋白(rHMGI)可与PDGF-B链基因上游序列结合。在-1758/+43 bp片段内至少存在两个与HMGI结合的A-T丰富区，其中一个位于-190/+43 bp片段内，可能是涉及TATA盒在内的TTTATAAA，另一个位于-1304/-990 bp内，该区有两个TTTATAAA序列。被蛋白激酶C和CDC2激酶磷酸化的rHMGI与-1304/990 bp片段内A-T丰富区的结合活性明显减低，但未观察到PKC磷酸化明显减弱rHMGI与-190/+43 bp片段的结合。在肿瘤坏死因子α(TNFα)，弱氧化低密度脂蛋白(mmLDL)和血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)处理的ECV304核抽提物中，加入低剂量的rHMGI显著增强核转录因子NF-κB与PDGF-B链基因上游切应力反应元件(SSRE)的结合，并呈一定的剂量依赖性。结论：高迁移率蛋白Ⅰ可与PDGF-B链基因上游一个或数个A-T丰富区结合，促进转录因子NF-κB与SSRE的相互作用，并可能受蛋白激酶C和CDC2激酶的磷酸化调节。这对深入阐明致动脉粥样硬化相关因素诱导PDGF-B链基因转录的机制具有重要意义, 百拇医药