甲硝唑葡萄糖注射液细菌内毒素检查法的研究
作者：杨 旭 周家杰
单位：杨 旭 合肥 安徽医科大学第一附属医院药剂科；周家杰 本院医学工程部
关键词：甲硝唑葡萄糖注射液；细菌内毒素；抑制或增强试验
中国现代应用药学990226摘要 目的：以细菌内毒素检查法对甲硝唑葡萄糖注射液进行试验研究。方法：采用抑制或增强试验，并将细菌内毒素检查法与家兔法检测结果作对比。结果：该注射液经一定稀释后对测定无干扰。结论：细菌内毒素检查法适用于检测该注射液。
Study on bacterial endotoxin determination of metronidazole and glucose injection
Yang Xu(Yang X),Zhou Jiajie(Zhou JJ)(First Affiliated Hospital of Anhui Medical University,HeFei 230022)
, http://www.100md.com
ABSTRACT OBJECTIVE：To study the method for determination of bacterial endotoxins of metronidazde and glucose injection.METHODS:The experiment was made by the inhibition or enhamcement test.The detecting results of the rabit test was compared with that of the bacterial endotoxin test.RESULTS:The method was valid by diluting this injection to the certain concentration,and the detection was not interfered.CONCLUSION:The result showed that the method is suitable for the detection of this injection.
, 百拇医药
KEY WORDS bacterial endotoxin,metronidzole and glucose injection,inhibition or enhancement
甲硝唑葡萄糖注射液《中国药典》95版二部收载的为家兔法检测热原。由于细菌内毒素检查法简便、经济、快捷，我们参照USAⅩ Ⅹ Ⅲ中细菌内毒素检查法有关规定[1]，对甲硝唑葡萄糖注射液进行了细菌内毒素检查法的可行性试验，以验证细菌内毒素检查法是否适用于本品的检测。
1 实验材料
鲎试剂(灵敏度0.25Eu/ml，湛江海洋生物制品厂，批号960403、970317；灵敏度0.06Eu/ml，湛江海洋生物制品厂，批号960413、 970413)，每批鲎试剂使用前均进行了灵敏度复核；细菌内毒素工作标准品(20Eu，中国生物制品检定所，批号9605;12Eu，中国生物制品检定所,批号9701)；甲硝唑葡萄糖注射液(250ml/瓶，本院制剂室生产)8批；细菌内毒素检查用水按规定检测，质量符合规定。
, 百拇医药
2 方法与结果
2.1 内毒素理论限值及最大有效稀释倍数(MVD)的计算:我国静脉用药细菌内毒素致热阈K为5Eu/Kg[2]。甲硝唑葡萄糖注射液家兔法热原检查剂量M为10ml/Kg，故其内毒素理论限值为L=K/M=0.5Eu/ml。最大有效稀释倍数(MVD)，对于灵敏度λ=0.25Eu/ml的鲎试剂，MVD=L/λ=0.5/0.25=2；对于灵敏度λ=0.06Eu/ml的鲎试剂，MVD=L/λ=0.5/0.06=8.3。
2.2 抑制或增强试验:用细菌内毒素检查用水将细菌内毒素工作标准品按等比系列稀释成一系列浓度的内毒素溶液，进行灵敏度复核，灵敏度均在0.5～2.0λ范围内；将样品按MVD稀释后，用此稀释液将细菌内毒素工作标准品按等比系列稀释成一系列浓度的内毒素溶液，与鲎试剂进行凝胶化反应，结果见表1。
此外我们用供试品溶解鲎试剂，分别添加内毒素使成0.5，0.25和0Eu/ml浓度，使其凝胶化反应，结果见表2。
, 百拇医药
从上面结果可以看出，对于灵敏度λ=0.25Eu/ml、λ=0.06Eu/ml的鲎试剂,样品分别经2倍和8倍稀释后的供试品，其反应终点值λc均落在0.5～2.0λ的范围内。说明供试品在本实验中的浓度对细菌内毒素试验无抑制或增强作用，由此可见供试品对细菌内毒素试验无干扰[3]。
2.3 细菌内毒素检查法检测结果与家兔法检测结果对比：我们检测了8批供试品，两种检测法结果见表3。从表3可见，两种检测法结果完全一致，从而验证细菌
表1 甲硝唑葡萄糖注射液的抑制增强试验 样品批号
管号
鲎试剂灵敏度
(Eu/ml)
细菌内毒素浓度(Eu/ml)
, http://www.100md.com
阴性对照
0.5
0.25
0.125
0.0625
0.0313
961016-22(1∶2稀释)
1
0.25
+
+
-
-
, http://www.100md.com
-
2
+
+
-
-
-
λc1=0.25
3
+
+
-
-
, 百拇医药
-
λc1/λb1=1
4
+
+
-
-
-
961210-12(1∶2稀释)
1
0.25
+
, 百拇医药
+
-
-
-
2
+
+
-
-
-
λc2=0.30
3
+
, 百拇医药
+
-
-
-
λc2/λb1=1.2
4
+
-
-
-
-
970609-41(1∶2稀释)
, 百拇医药
1
0.25
+
+
-
-
-
2
+
+
-
-
-
λc3=0.25
, http://www.100md.com
3
+
+
-
-
-
λc3/λb1=1
4
+
+
-
-
-
, 百拇医药
961016-22(1∶8稀释)
1
0.06
+
+
+
-
-
2
+
+
+
-
-
, 百拇医药
λc4=0.0625
3
+
+
+
-
-
λc4/λb2= 1
4
+
+
+
, 百拇医药
-
-
961210-12(1∶8稀释)
1
0.06
+
+
+
+
-
2
+
+
+
, http://www.100md.com
-
-
λc5=0.0525
3
+
+
+
-
-
λc5/λb2=0.88
4
+
, http://www.100md.com
+
+
-
-
970609-41(1∶8稀释)
1
0.06
+
+
+
+
-
2
+
, 百拇医药
+
+
+
-
λc6=0.042
3
+
+
+
-
-
λc6/λb2=0.7
, 百拇医药
4
+
+
+
-
-
注：表1中λc1、λc2、λc3、λc4、λc5、λc6分别为各批号两种稀释浓度供试品的反应终点值，λb1、λb2分别为0.25Eu/ml、0.06Eu/ml鲎试剂灵敏度表2 甲硝唑葡萄糖注射液添加内毒素的试验结果 样品添加内毒素
, http://www.100md.com
浓度(Eu/ml)
管号
鲎试剂细菌内试验(限量0.5Eu/ml)(Eu/ml)
0.25
0.06
0.5
1
+
+
2
+
+
0.25
, 百拇医药
1
+
+
2
+
+
0
1
-
-
2
-
-
表3 细菌内毒素检查法和家兔法检测甲硝唑葡萄糖注射液结果 样品批号
, 百拇医药
鲎试剂细菌内毒素试验(Eu/ml)
家免法
热原检查
0.25
0.06
960717-42
-
-
合格
960801-22
-
-
合格
, 百拇医药
961016-22
-
-
合格
961210-12
-
-
合格
970409-22
-
-
合格
970609-41
, 百拇医药
-
-
合格
970719-22
-
-
合格
970827-11
-
-
合格
内毒素检查法可用于甲硝唑葡萄糖注射液中内毒素的检测。
3 讨 论
, 百拇医药
从本实验可以看出，甲硝唑葡萄糖注射液只要稀释到一定浓度，对细菌内毒素试验无抑制或增强作用，即不存在干扰。灵敏度λ=0.25Eu/ml和λ=0.06Eu/ml的鲎试剂均能检测该注射液，同时按中国药典规定进行热原检查，其检测结果一致，且临床应用无热原反应。表明细菌内毒素检查法适于该注射液的检测，作为医院制剂的甲硝唑葡萄糖注射液可用细菌内毒素检查代替热原检查。
参考文献
[1] USP.Ⅹ Ⅹ Ⅲ-NF.ⅩⅤⅢ∶1696.
[2] 夏振民.药品细菌内毒素检查的限值.药物分析,1995,15(3)∶54.
[3] 冯聚锦.细菌内毒素检查的抑制或增强试验.中国生化药物杂志,1994,15(2)∶141.
收稿日期：1997-11-19, 百拇医药
单位：杨 旭 合肥 安徽医科大学第一附属医院药剂科；周家杰 本院医学工程部
关键词：甲硝唑葡萄糖注射液；细菌内毒素；抑制或增强试验
中国现代应用药学990226摘要 目的：以细菌内毒素检查法对甲硝唑葡萄糖注射液进行试验研究。方法：采用抑制或增强试验，并将细菌内毒素检查法与家兔法检测结果作对比。结果：该注射液经一定稀释后对测定无干扰。结论：细菌内毒素检查法适用于检测该注射液。
Study on bacterial endotoxin determination of metronidazole and glucose injection
Yang Xu(Yang X),Zhou Jiajie(Zhou JJ)(First Affiliated Hospital of Anhui Medical University,HeFei 230022)
, http://www.100md.com
ABSTRACT OBJECTIVE：To study the method for determination of bacterial endotoxins of metronidazde and glucose injection.METHODS:The experiment was made by the inhibition or enhamcement test.The detecting results of the rabit test was compared with that of the bacterial endotoxin test.RESULTS:The method was valid by diluting this injection to the certain concentration,and the detection was not interfered.CONCLUSION:The result showed that the method is suitable for the detection of this injection.
, 百拇医药
KEY WORDS bacterial endotoxin,metronidzole and glucose injection,inhibition or enhancement
甲硝唑葡萄糖注射液《中国药典》95版二部收载的为家兔法检测热原。由于细菌内毒素检查法简便、经济、快捷，我们参照USAⅩ Ⅹ Ⅲ中细菌内毒素检查法有关规定[1]，对甲硝唑葡萄糖注射液进行了细菌内毒素检查法的可行性试验，以验证细菌内毒素检查法是否适用于本品的检测。
1 实验材料
鲎试剂(灵敏度0.25Eu/ml，湛江海洋生物制品厂，批号960403、970317；灵敏度0.06Eu/ml，湛江海洋生物制品厂，批号960413、 970413)，每批鲎试剂使用前均进行了灵敏度复核；细菌内毒素工作标准品(20Eu，中国生物制品检定所，批号9605;12Eu，中国生物制品检定所,批号9701)；甲硝唑葡萄糖注射液(250ml/瓶，本院制剂室生产)8批；细菌内毒素检查用水按规定检测，质量符合规定。
, 百拇医药
2 方法与结果
2.1 内毒素理论限值及最大有效稀释倍数(MVD)的计算:我国静脉用药细菌内毒素致热阈K为5Eu/Kg[2]。甲硝唑葡萄糖注射液家兔法热原检查剂量M为10ml/Kg，故其内毒素理论限值为L=K/M=0.5Eu/ml。最大有效稀释倍数(MVD)，对于灵敏度λ=0.25Eu/ml的鲎试剂，MVD=L/λ=0.5/0.25=2；对于灵敏度λ=0.06Eu/ml的鲎试剂，MVD=L/λ=0.5/0.06=8.3。
2.2 抑制或增强试验:用细菌内毒素检查用水将细菌内毒素工作标准品按等比系列稀释成一系列浓度的内毒素溶液，进行灵敏度复核，灵敏度均在0.5～2.0λ范围内；将样品按MVD稀释后，用此稀释液将细菌内毒素工作标准品按等比系列稀释成一系列浓度的内毒素溶液，与鲎试剂进行凝胶化反应，结果见表1。
此外我们用供试品溶解鲎试剂，分别添加内毒素使成0.5，0.25和0Eu/ml浓度，使其凝胶化反应，结果见表2。
, 百拇医药
从上面结果可以看出，对于灵敏度λ=0.25Eu/ml、λ=0.06Eu/ml的鲎试剂,样品分别经2倍和8倍稀释后的供试品，其反应终点值λc均落在0.5～2.0λ的范围内。说明供试品在本实验中的浓度对细菌内毒素试验无抑制或增强作用，由此可见供试品对细菌内毒素试验无干扰[3]。
2.3 细菌内毒素检查法检测结果与家兔法检测结果对比：我们检测了8批供试品，两种检测法结果见表3。从表3可见，两种检测法结果完全一致，从而验证细菌
表1 甲硝唑葡萄糖注射液的抑制增强试验 样品批号
管号
鲎试剂灵敏度
(Eu/ml)
细菌内毒素浓度(Eu/ml)
, http://www.100md.com
阴性对照
0.5
0.25
0.125
0.0625
0.0313
961016-22(1∶2稀释)
1
0.25
+
+
-
-
, http://www.100md.com
-
2
+
+
-
-
-
λc1=0.25
3
+
+
-
-
, 百拇医药
-
λc1/λb1=1
4
+
+
-
-
-
961210-12(1∶2稀释)
1
0.25
+
, 百拇医药
+
-
-
-
2
+
+
-
-
-
λc2=0.30
3
+
, 百拇医药
+
-
-
-
λc2/λb1=1.2
4
+
-
-
-
-
970609-41(1∶2稀释)
, 百拇医药
1
0.25
+
+
-
-
-
2
+
+
-
-
-
λc3=0.25
, http://www.100md.com
3
+
+
-
-
-
λc3/λb1=1
4
+
+
-
-
-
, 百拇医药
961016-22(1∶8稀释)
1
0.06
+
+
+
-
-
2
+
+
+
-
-
, 百拇医药
λc4=0.0625
3
+
+
+
-
-
λc4/λb2= 1
4
+
+
+
, 百拇医药
-
-
961210-12(1∶8稀释)
1
0.06
+
+
+
+
-
2
+
+
+
, http://www.100md.com
-
-
λc5=0.0525
3
+
+
+
-
-
λc5/λb2=0.88
4
+
, http://www.100md.com
+
+
-
-
970609-41(1∶8稀释)
1
0.06
+
+
+
+
-
2
+
, 百拇医药
+
+
+
-
λc6=0.042
3
+
+
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-
-
λc6/λb2=0.7
, 百拇医药
4
+
+
+
-
-
注：表1中λc1、λc2、λc3、λc4、λc5、λc6分别为各批号两种稀释浓度供试品的反应终点值，λb1、λb2分别为0.25Eu/ml、0.06Eu/ml鲎试剂灵敏度表2 甲硝唑葡萄糖注射液添加内毒素的试验结果 样品添加内毒素
, http://www.100md.com
浓度(Eu/ml)
管号
鲎试剂细菌内试验(限量0.5Eu/ml)(Eu/ml)
0.25
0.06
0.5
1
+
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2
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+
0.25
, 百拇医药
1
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2
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0
1
-
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2
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表3 细菌内毒素检查法和家兔法检测甲硝唑葡萄糖注射液结果 样品批号
, 百拇医药
鲎试剂细菌内毒素试验(Eu/ml)
家免法
热原检查
0.25
0.06
960717-42
-
-
合格
960801-22
-
-
合格
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961016-22
-
-
合格
961210-12
-
-
合格
970409-22
-
-
合格
970609-41
, 百拇医药
-
-
合格
970719-22
-
-
合格
970827-11
-
-
合格
内毒素检查法可用于甲硝唑葡萄糖注射液中内毒素的检测。
3 讨 论
, 百拇医药
从本实验可以看出，甲硝唑葡萄糖注射液只要稀释到一定浓度，对细菌内毒素试验无抑制或增强作用，即不存在干扰。灵敏度λ=0.25Eu/ml和λ=0.06Eu/ml的鲎试剂均能检测该注射液，同时按中国药典规定进行热原检查，其检测结果一致，且临床应用无热原反应。表明细菌内毒素检查法适于该注射液的检测，作为医院制剂的甲硝唑葡萄糖注射液可用细菌内毒素检查代替热原检查。
参考文献
[1] USP.Ⅹ Ⅹ Ⅲ-NF.ⅩⅤⅢ∶1696.
[2] 夏振民.药品细菌内毒素检查的限值.药物分析,1995,15(3)∶54.
[3] 冯聚锦.细菌内毒素检查的抑制或增强试验.中国生化药物杂志,1994,15(2)∶141.
收稿日期：1997-11-19, 百拇医药