胡椒碱衍生物 7903 对实验性脑缺血的作用
作者：董 强 董为伟 傅雅各
单位：630042 重庆医科大学神经病学研究所
关键词：
中华医学杂志931234 已知胡椒碱衍生物 7903 的抗癫痫作用主要是通过增强脑内5-羟色胺的功能，使鼠纹状体及边缘脑区 5-羟色胺代谢 5-羟吲哚乙酸增高。我们利用7 903作为 5-羟色胺激动剂用于实验性鼠脑缺血，以探索其脑保护作用。
一、材料和方法
1.实验分组：沙土鼠48只，重65～94g，随机分脑缺血再灌流组和 7903 治疗组(含腐胺测定、脑皮质灌流量及脑电话动观察组)。
2.试剂：腐胺(putrescine)、亚精胺(spermidine)及精酰胺(spermine)盐酸标准品(瑞士 Fluka 公司)，内标物 1-6-已二胺(北京化工厂)。5-羟色胺激动剂7 903——3，4-二氯苯丙烯酰异丁胺(3，4-dichlorphenyl propenoyl isobutylamide)由北京医科大学药学系合成，以2%吐温-80配成0.1%混悬液，腹腔注射(100mg/kg)。
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3.脑缺血再灌流模型：沙土鼠经3.5%水合氯醛(350mg/kg)腹腔麻醉，颈正中切口，暴露颈动脉，分离迷走神经，动脉夹夹闭双侧颈动脉 30 分钟后，松开动脉夹进行再灌流。
4.脑皮质灌流量测定：沙土鼠麻醉，在右顶(前囟前0.8mmm，右2.8mm)处开一骨窗(3mm2)，用LDF-2型激光微循环血流计连续测定缺血前、缺血30分钟和再灌流90分钟期间鼠脑皮质灌流量。
5.脑皮质匀浆腐胺测定：沙土鼠断头取脑皮质100mg，加 5ng/μl内标物和5%高氯酸制成匀浆、离心(13 000g，4℃)提取二次，去除极性杂质，取40μl作高效液相色谱检测，波长 229nm、流动相为甲醇：水(60∶40)，以内标法测定腐胺含量(nmol/g)。
6.脑电活动观察：采用单极导联，连续记录鼠左、右额顶缺血前、缺血30分钟和再灌流90分钟期间的脑电活动。
, 百拇医药
7.7903治疗：在缺血30分钟时即刻予7 903以(100mg/kg)，观察时再灌流期鼠脑皮质灌流量、腐胺及脑电活动的影响。
8.统计学处理：数据进行方差分析及t检验(或t检验)。
二、结果
1.脑皮质灌流量的动态变化：鼠脑缺血时皮质灌流量急剧下降，30分钟时约为缺血前5%。再灌流期皮质灌流量回升，但仍低于缺血前，约为30%。7 903 治疗后再灌流期皮质灌流量明显改善(约为缺血前的70%～80%)，与脑缺血再灌流组相比有显著差异(P<0.01)。提示 7 903 对脑缺血后再灌流期脑循环有明显改善效果(表1)。
表1 沙土鼠脑缺血再灌流时脑皮质灌流量(x±s,n=6)与7 903的影响 组别
缺血前
, 百拇医药
缺血30min
再灌流
30min
90min
缺血再灌流组
42.75±4.03
2.25±0.5
17.25±3.1
13.00±4.55
7903治疗组
39.50±4.73△
3.00±2.16
, 百拇医药
33.5±3.11*
28.75±2.36*
注：与缺血再灌流组比较，△P>0.05；与缺血再灌流组相应时间比较，*P<0.01
2.脑皮质腐胺含量的变化：缺血30分钟腐胺含量下降，再灌流30分钟腐胺含量显著增高(P<0.01)，而再灌流90分钟与正常对照无差异。7903治疗后再灌流30分钟腐胺显著下降(P<0.01)，与正常对照无差异。表明 7903 在明显改善再灌流期脑循环同时，对再灌流30分钟腐胺增高有明显抑制(表2)。
表2 沙土鼠缺血再灌流时脑腐胺含量(x±s,n=6)与7903的影响 组别
缺血前
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缺血30min
再灌流
30min
90min
缺血再灌流组
0.75±0.17
0.37±0.08
1.25±0.21*
0.61±0.14
7903治疗组
0.75±0.17
0.37±0.08
, http://www.100md.com
0.50±0.21**
0.85±0.17△
*与缺血前及缺血 30min 比较，P<0.05；**与缺血再灌流 30min 比较，P<0.01；
△与缺血再灌流 90min 比较，P>0.05
3.脑电活动的变化：随着鼠脑缺血，脑电波幅下降，缺血30分钟时近于零；在再灌流90分钟期间，脑电波幅仍无恢复。7903 治疗后，相应再灌流期脑电改善，30分钟开始恢复，至90分钟波幅几乎已恢复到缺血前状态。
三、讨论
应用5-羟色胺前体或抑制5-羟色胺对鼠脑缺血有明显影响[1，2]，Bielenberg等(1990)首先报道用5-羟色胺激动剂可减轻大鼠脑梗塞形成[3]。我们应用胡椒碱衍生物 7903 在以下方面获得明显效果：(1)改善鼠脑皮质灌流量与脑电活动：7903 明显改善缺血后再灌流时脑循环，且脑电活动改善也与脑血流量增加有密切关系。Wagener 等[4]亦证实5-羟色胺1A受体激动剂治疗鼠脑缺血时，体感诱发电位晚成分波幅增加与脑血流改善有关。(2)抑制脑缺血后腐胺含量增高；缺血后腐胺增高，与缺血性损害程度相关，其机制与缺血时 NMDA 受体兴奋及Ca2+内流有关[5]。7903 可能改变膜极化及对离子通透性，影响 Ca2+通过 NMDA 受体通道内流，减轻神经元损害。本研究表明 7903 有肯定的脑保护作用，是值得深入研究的新的脑缺血治疗途径。
, 百拇医药
参考文献
1 Carney JM.Acute tryptophan pretreatment protects against behavioural changes caused by cerebral ischemia.Neurosci Lett,1988,66:127.
2 Wieloch T,et al.Inhibitory neurotransmitters and neuromodulators as protective agents against ischemic brain damage. In:Krieglestein J (ed):Phamacology of cerebral ischemia.Amsterdam:Elsevier,1986,191-197.
3 Bielenberg GW, Burkhardt M. 5-hydroxytryptamine agonists. A new therapeutic principle for stroke treatment. Stroke 1990,21[12 Suppl]: Ⅳ 161.
, http://www.100md.com
4 Wagener G,Hielscher H,Rossberg C,et al.Effects of ipsapirone on spatial and temproral changes in somatosensory evoked potentials after middle cerebral artery occlusion in the rat. Stroke 1990,21[12 Suppl]:Ⅳ 167.
5 Koenig H,Goldstone AD, Lu CY,et al.Brain polyamines are controlled by N-methy1-D-aspartate receptors during ischemia and recirculation. Stroke 1990,21[11Suppl]:Ⅲ 98.
(收稿：1992-12-24 修回：1993-09-22), 百拇医药
单位：630042 重庆医科大学神经病学研究所
关键词：
中华医学杂志931234 已知胡椒碱衍生物 7903 的抗癫痫作用主要是通过增强脑内5-羟色胺的功能，使鼠纹状体及边缘脑区 5-羟色胺代谢 5-羟吲哚乙酸增高。我们利用7 903作为 5-羟色胺激动剂用于实验性鼠脑缺血，以探索其脑保护作用。
一、材料和方法
1.实验分组：沙土鼠48只，重65～94g，随机分脑缺血再灌流组和 7903 治疗组(含腐胺测定、脑皮质灌流量及脑电话动观察组)。
2.试剂：腐胺(putrescine)、亚精胺(spermidine)及精酰胺(spermine)盐酸标准品(瑞士 Fluka 公司)，内标物 1-6-已二胺(北京化工厂)。5-羟色胺激动剂7 903——3，4-二氯苯丙烯酰异丁胺(3，4-dichlorphenyl propenoyl isobutylamide)由北京医科大学药学系合成，以2%吐温-80配成0.1%混悬液，腹腔注射(100mg/kg)。
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3.脑缺血再灌流模型：沙土鼠经3.5%水合氯醛(350mg/kg)腹腔麻醉，颈正中切口，暴露颈动脉，分离迷走神经，动脉夹夹闭双侧颈动脉 30 分钟后，松开动脉夹进行再灌流。
4.脑皮质灌流量测定：沙土鼠麻醉，在右顶(前囟前0.8mmm，右2.8mm)处开一骨窗(3mm2)，用LDF-2型激光微循环血流计连续测定缺血前、缺血30分钟和再灌流90分钟期间鼠脑皮质灌流量。
5.脑皮质匀浆腐胺测定：沙土鼠断头取脑皮质100mg，加 5ng/μl内标物和5%高氯酸制成匀浆、离心(13 000g，4℃)提取二次，去除极性杂质，取40μl作高效液相色谱检测，波长 229nm、流动相为甲醇：水(60∶40)，以内标法测定腐胺含量(nmol/g)。
6.脑电活动观察：采用单极导联，连续记录鼠左、右额顶缺血前、缺血30分钟和再灌流90分钟期间的脑电活动。
, 百拇医药
7.7903治疗：在缺血30分钟时即刻予7 903以(100mg/kg)，观察时再灌流期鼠脑皮质灌流量、腐胺及脑电活动的影响。
8.统计学处理：数据进行方差分析及t检验(或t检验)。
二、结果
1.脑皮质灌流量的动态变化：鼠脑缺血时皮质灌流量急剧下降，30分钟时约为缺血前5%。再灌流期皮质灌流量回升，但仍低于缺血前，约为30%。7 903 治疗后再灌流期皮质灌流量明显改善(约为缺血前的70%～80%)，与脑缺血再灌流组相比有显著差异(P<0.01)。提示 7 903 对脑缺血后再灌流期脑循环有明显改善效果(表1)。
表1 沙土鼠脑缺血再灌流时脑皮质灌流量(x±s,n=6)与7 903的影响 组别
缺血前
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缺血30min
再灌流
30min
90min
缺血再灌流组
42.75±4.03
2.25±0.5
17.25±3.1
13.00±4.55
7903治疗组
39.50±4.73△
3.00±2.16
, 百拇医药
33.5±3.11*
28.75±2.36*
注：与缺血再灌流组比较，△P>0.05；与缺血再灌流组相应时间比较，*P<0.01
2.脑皮质腐胺含量的变化：缺血30分钟腐胺含量下降，再灌流30分钟腐胺含量显著增高(P<0.01)，而再灌流90分钟与正常对照无差异。7903治疗后再灌流30分钟腐胺显著下降(P<0.01)，与正常对照无差异。表明 7903 在明显改善再灌流期脑循环同时，对再灌流30分钟腐胺增高有明显抑制(表2)。
表2 沙土鼠缺血再灌流时脑腐胺含量(x±s,n=6)与7903的影响 组别
缺血前
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缺血30min
再灌流
30min
90min
缺血再灌流组
0.75±0.17
0.37±0.08
1.25±0.21*
0.61±0.14
7903治疗组
0.75±0.17
0.37±0.08
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0.50±0.21**
0.85±0.17△
*与缺血前及缺血 30min 比较，P<0.05；**与缺血再灌流 30min 比较，P<0.01；
△与缺血再灌流 90min 比较，P>0.05
3.脑电活动的变化：随着鼠脑缺血，脑电波幅下降，缺血30分钟时近于零；在再灌流90分钟期间，脑电波幅仍无恢复。7903 治疗后，相应再灌流期脑电改善，30分钟开始恢复，至90分钟波幅几乎已恢复到缺血前状态。
三、讨论
应用5-羟色胺前体或抑制5-羟色胺对鼠脑缺血有明显影响[1，2]，Bielenberg等(1990)首先报道用5-羟色胺激动剂可减轻大鼠脑梗塞形成[3]。我们应用胡椒碱衍生物 7903 在以下方面获得明显效果：(1)改善鼠脑皮质灌流量与脑电活动：7903 明显改善缺血后再灌流时脑循环，且脑电活动改善也与脑血流量增加有密切关系。Wagener 等[4]亦证实5-羟色胺1A受体激动剂治疗鼠脑缺血时，体感诱发电位晚成分波幅增加与脑血流改善有关。(2)抑制脑缺血后腐胺含量增高；缺血后腐胺增高，与缺血性损害程度相关，其机制与缺血时 NMDA 受体兴奋及Ca2+内流有关[5]。7903 可能改变膜极化及对离子通透性，影响 Ca2+通过 NMDA 受体通道内流，减轻神经元损害。本研究表明 7903 有肯定的脑保护作用，是值得深入研究的新的脑缺血治疗途径。
, 百拇医药
参考文献
1 Carney JM.Acute tryptophan pretreatment protects against behavioural changes caused by cerebral ischemia.Neurosci Lett,1988,66:127.
2 Wieloch T,et al.Inhibitory neurotransmitters and neuromodulators as protective agents against ischemic brain damage. In:Krieglestein J (ed):Phamacology of cerebral ischemia.Amsterdam:Elsevier,1986,191-197.
3 Bielenberg GW, Burkhardt M. 5-hydroxytryptamine agonists. A new therapeutic principle for stroke treatment. Stroke 1990,21[12 Suppl]: Ⅳ 161.
, http://www.100md.com
4 Wagener G,Hielscher H,Rossberg C,et al.Effects of ipsapirone on spatial and temproral changes in somatosensory evoked potentials after middle cerebral artery occlusion in the rat. Stroke 1990,21[12 Suppl]:Ⅳ 167.
5 Koenig H,Goldstone AD, Lu CY,et al.Brain polyamines are controlled by N-methy1-D-aspartate receptors during ischemia and recirculation. Stroke 1990,21[11Suppl]:Ⅲ 98.
(收稿：1992-12-24 修回：1993-09-22), 百拇医药