膀胱癌组织蛋白酶D的表达与临床及病理的关系
作者：韩韬 段国兰 史庭恺 陈一戎 秦大山
单位：兰州医学院附属第二医院泌尿外科，兰州，730030
关键词：组织蛋白酶D；膀胱癌；病理分级；临床分期
临床泌尿外科杂志000413 摘要 目的：探讨膀胱癌组织蛋白酶D(Cath-D)的表达与临床及病理的关系。方法：应用免疫组织化学SP法检测85例膀胱癌中Cath-D。结果：总阳性表达率为76.4%，Cath-D表达率与膀胱癌病理分级呈正相关(P<0.01)，与临床分期无关。Cath-D主要表达于膀胱癌细胞浆中，正常膀胱变移上皮无表达。结论：Cath-D参与了膀胱癌细胞的分化，对病理学分级有意义。
Relationship of the expression of cathepsin D and the clinical pathology of bladder tumor
, http://www.100md.com
HAN Tao DUAN Guo-lan SHI Ting-kai CHEN Yi-rong QIN Da-shan
(Department of Urology, the Second Affiliated Hospital, Lanzhou Medical College, Lanzhou,730030)
Abstract Purpose: To study the relationship of the expression of Cathepsin D and the clinical pathology of bladder tumor. Methods: The expression of Cathepsin D was detected immunohistochemically in tissues of 85 specimens of bladder tumor. Results: The total positive rate of Cathepsin D expression was 76.4%, the expression of Cathepsin D had a direct bearing on the tumor grade(p<0.01), but had no bearing on the tumor phase. Cathepsin D expressed mainly in cytoplasma of bladder tumor cells, but no expression was observed in normal bladder urothelum. Conclusions:Cathepsin D may be related to the defferenciation of bladder urothelial carcinoma.
, 百拇医药
Key words Cathepsin D Bladder carcinoma Pathological grading Clinical stages
对肿瘤浸润转移的研究是当前人们关注的重点，大量研究发现金属蛋白酶、组织蛋白酶参与肿瘤的浸润转移。组织蛋白酶D(Cath-D)被认为是一种雄激素调节蛋白水解酶，可能参与促进肿瘤细胞有丝分裂和肿瘤转移〔1〕。人们已对乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、喉癌等疾病进行了相关研究，发现Cath-D与这些肿瘤的增殖、分化、分期及预后有关。Cath-D在膀胱癌中表达的研究目前甚少。为此，我们通过对Cath-D在膀胱癌组织内表达的观察，以探讨Cath-D在膀胱癌浸润生长中的作用。
1 材料与方法
1.1 实验标本
收集1986～1997年兰州医学院附属第二医院泌尿外科经手术切除及病理检查证实的膀胱癌标本85例。按WHO标准分为Ⅰ级20例，Ⅱ级25例，Ⅲ级40例。按UICC标准分为T0～1期41例，T2期26例，T3～4期18例。标本均经甲醛溶液固定，石蜡包埋，常规切片，行H-E及免疫组织化学染色。
, http://www.100md.com
1.2 实验方法
采用免疫组织化学SP法。链霉菌抗生物素蛋白-过氧化酶试剂盒由福州迈新生物技术公司提供。兔抗人Cath-D抗体为1∶50。用PBS代替一抗作阴性对照，用乳腺癌阳性片(对Cath-D表达阳性)作阳性对照。用0.5%胰酶消化7～10 min。PBS冲洗后加1滴过氧化酶阻断液。滴入1滴非免疫性动物血清。滴加一抗后置4℃冰箱中过夜。依次加入二抗及链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶溶液。DAB显色，苏木素复染，中性树胶封固。
1.3 结果判定
肿瘤细胞没有出现棕黄色颗粒染色或表达率<10%的细胞为阴性(-)，表达率为10%～25%的细胞为低表达(+)，表达率>25%～50%的细胞为中度表达(++)，表达率>50%的细胞为高表达(+++)。
2 结果
, 百拇医药
2.1 Cath-D染色结果
Cath-D染色主要位于肿瘤细胞浆内，呈棕黄色颗粒状，总表达率为76.4%，其中低表达为45.9%，中度表达为22.3%，高表达为8.2%，且发现位于血管旁近基底膜处肿瘤细胞表达率较其他部位细胞表达率高。正常膀胱变移上皮细胞内无表达，部分浸润性淋巴细胞和间质细胞有表达。
2.2 Cath-D表达与临床及病理指标的关系
Cath-D在膀胱变移上皮细胞癌中的表达随病理分级增高而增多，即细胞恶性度越高，Cath-D表达率越高，其中Ⅰ级与Ⅱ级比较有显著性差异(P<0.05)，Ⅰ级、Ⅱ级与Ⅲ级比较也有显著性差异(P<0.05)。Cath-D表达与临床分期之间无统计学意义(P>0.05)(表1，2)。
表1 Cath-D表达与病理分级的关系 例 分级
, 百拇医药
例数
Cath-D表达
表达率/%
阴性
阳性
Ⅰ级
20
13
7
35.0
Ⅱ级
25
4
, 百拇医药 21
84.0
Ⅲ级
40
3
37
92.5
合计
85
20
65
76.5
表2 Cath-D表达与临床分期的关系 例 分期
, 百拇医药
例数
Cath-D表达
表达率/%
阴性
阳性
T0～1期
41
10
31
75.6
T2期
26
8
, 百拇医药
18
69.2
T3～4期
18
2
16
88.9
合计
85
20
65
76.5
3 讨论
, 百拇医药
Cath-D是一种雄激素介导的酸性溶酶体蛋白水解酶，分子量为5 200。国外许多学者研究发现它能刺激癌细胞生长，参与肿瘤转移，与肿瘤分级、分期及预后相关。
Myers等〔2〕研究发现Cath-D与前列腺癌的大小、是否有转移呈正相关，可作为预测预后的指标。Jeffreys等〔3〕采用胞浆分析法研究发现Cath-D可作为前列腺癌浸润与转移的标记，得出了与Myers等相似的结论。许良中等〔4〕对277例乳腺癌资料进行研究，发现Cath-D高表达与肿瘤淋巴转移相关。Budihna等〔5〕测定头颈部原发癌和间质中胞浆Cathepsin B、H、L、D的含量，发现其在肿瘤细胞胞质中含量高于间质细胞。Resta等〔6〕研究喉癌时发现Cath-D强性表达多出现在巨噬细胞周围和肿瘤细胞内，其对喉鳞状上皮细胞生长和致癌性起了一定作用。Stonlake等认为浸润能力强的肿瘤可能伴有巨噬细胞和肿瘤细胞对Cath-D的高表达。大量研究表明，Cath-D能够刺激肿瘤细胞生长和溶解细胞外基质。我们通过对85例膀胱癌的研究也发现Cath-D多表达于血管旁近基底膜处的肿瘤细胞；而正常膀胱移行细胞无表达，这亦说明其可能参与细胞外基质的降解。我们通过对Cath-D与膀胱癌分级、分期关系的研究，发现其表达与分期无关而与分级呈正相关，即Cath-D表达越高，肿瘤细胞分级越高，分化程度越差，恶性度越高。本组结果提示Cath-D参与膀胱癌细胞的分化，可作为细胞恶性程度的指标。
, 百拇医药
参考文献
[1]Hawkins R A,Tesdale A L.Prospective evaluation of prognostic factors in operable breast cancer.Br J Cancer,1996,Nov,74:1469～1473
[2]Myers R B,Grizzle W E.Biomarker expression in prost atic intraepithelial neoplasia.Eur Urol,1996,30:153～158
[3]Jeffreys S,Tipu N.Quantitative immunohistochemical determination of cathepsin D levels inprostic carcinoma biopsies.Corralation with tumor grade,stage,DSA level and DNA ploidy stutus.Am J Clin Pathlol,1995,104:36～39
, 百拇医药
[4]许良中，沈镇宙.组织蛋白酶D、C-erbB-2和表皮生长因子受体在乳腺癌组织中的表达及其与淋巴结转移的关系.中华肿瘤杂志，1995，17：60～62
[5]Budihna M,Strojan P.Prognostic value of cathepsin B,H,L,D and their endogenous inhibitors stefin A and B in head and neck carcinoma.Biol Chem Hoppe Seyler,1996,377:385～389
[6]Resta L,Fiorella R.Cathepsin D in laryngeal carci-noma,prelimiminary report.Bell Soc Ital Biol Sper,1995,71:257～260
收稿 1999-03-09, 百拇医药
单位：兰州医学院附属第二医院泌尿外科，兰州，730030
关键词：组织蛋白酶D；膀胱癌；病理分级；临床分期
临床泌尿外科杂志000413 摘要 目的：探讨膀胱癌组织蛋白酶D(Cath-D)的表达与临床及病理的关系。方法：应用免疫组织化学SP法检测85例膀胱癌中Cath-D。结果：总阳性表达率为76.4%，Cath-D表达率与膀胱癌病理分级呈正相关(P<0.01)，与临床分期无关。Cath-D主要表达于膀胱癌细胞浆中，正常膀胱变移上皮无表达。结论：Cath-D参与了膀胱癌细胞的分化，对病理学分级有意义。
Relationship of the expression of cathepsin D and the clinical pathology of bladder tumor
, http://www.100md.com
HAN Tao DUAN Guo-lan SHI Ting-kai CHEN Yi-rong QIN Da-shan
(Department of Urology, the Second Affiliated Hospital, Lanzhou Medical College, Lanzhou,730030)
Abstract Purpose: To study the relationship of the expression of Cathepsin D and the clinical pathology of bladder tumor. Methods: The expression of Cathepsin D was detected immunohistochemically in tissues of 85 specimens of bladder tumor. Results: The total positive rate of Cathepsin D expression was 76.4%, the expression of Cathepsin D had a direct bearing on the tumor grade(p<0.01), but had no bearing on the tumor phase. Cathepsin D expressed mainly in cytoplasma of bladder tumor cells, but no expression was observed in normal bladder urothelum. Conclusions:Cathepsin D may be related to the defferenciation of bladder urothelial carcinoma.
, 百拇医药
Key words Cathepsin D Bladder carcinoma Pathological grading Clinical stages
对肿瘤浸润转移的研究是当前人们关注的重点，大量研究发现金属蛋白酶、组织蛋白酶参与肿瘤的浸润转移。组织蛋白酶D(Cath-D)被认为是一种雄激素调节蛋白水解酶，可能参与促进肿瘤细胞有丝分裂和肿瘤转移〔1〕。人们已对乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、喉癌等疾病进行了相关研究，发现Cath-D与这些肿瘤的增殖、分化、分期及预后有关。Cath-D在膀胱癌中表达的研究目前甚少。为此，我们通过对Cath-D在膀胱癌组织内表达的观察，以探讨Cath-D在膀胱癌浸润生长中的作用。
1 材料与方法
1.1 实验标本
收集1986～1997年兰州医学院附属第二医院泌尿外科经手术切除及病理检查证实的膀胱癌标本85例。按WHO标准分为Ⅰ级20例，Ⅱ级25例，Ⅲ级40例。按UICC标准分为T0～1期41例，T2期26例，T3～4期18例。标本均经甲醛溶液固定，石蜡包埋，常规切片，行H-E及免疫组织化学染色。
, http://www.100md.com
1.2 实验方法
采用免疫组织化学SP法。链霉菌抗生物素蛋白-过氧化酶试剂盒由福州迈新生物技术公司提供。兔抗人Cath-D抗体为1∶50。用PBS代替一抗作阴性对照，用乳腺癌阳性片(对Cath-D表达阳性)作阳性对照。用0.5%胰酶消化7～10 min。PBS冲洗后加1滴过氧化酶阻断液。滴入1滴非免疫性动物血清。滴加一抗后置4℃冰箱中过夜。依次加入二抗及链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶溶液。DAB显色，苏木素复染，中性树胶封固。
1.3 结果判定
肿瘤细胞没有出现棕黄色颗粒染色或表达率<10%的细胞为阴性(-)，表达率为10%～25%的细胞为低表达(+)，表达率>25%～50%的细胞为中度表达(++)，表达率>50%的细胞为高表达(+++)。
2 结果
, 百拇医药
2.1 Cath-D染色结果
Cath-D染色主要位于肿瘤细胞浆内，呈棕黄色颗粒状，总表达率为76.4%，其中低表达为45.9%，中度表达为22.3%，高表达为8.2%，且发现位于血管旁近基底膜处肿瘤细胞表达率较其他部位细胞表达率高。正常膀胱变移上皮细胞内无表达，部分浸润性淋巴细胞和间质细胞有表达。
2.2 Cath-D表达与临床及病理指标的关系
Cath-D在膀胱变移上皮细胞癌中的表达随病理分级增高而增多，即细胞恶性度越高，Cath-D表达率越高，其中Ⅰ级与Ⅱ级比较有显著性差异(P<0.05)，Ⅰ级、Ⅱ级与Ⅲ级比较也有显著性差异(P<0.05)。Cath-D表达与临床分期之间无统计学意义(P>0.05)(表1，2)。
表1 Cath-D表达与病理分级的关系 例 分级
, 百拇医药
例数
Cath-D表达
表达率/%
阴性
阳性
Ⅰ级
20
13
7
35.0
Ⅱ级
25
4
, 百拇医药 21
84.0
Ⅲ级
40
3
37
92.5
合计
85
20
65
76.5
表2 Cath-D表达与临床分期的关系 例 分期
, 百拇医药
例数
Cath-D表达
表达率/%
阴性
阳性
T0～1期
41
10
31
75.6
T2期
26
8
, 百拇医药
18
69.2
T3～4期
18
2
16
88.9
合计
85
20
65
76.5
3 讨论
, 百拇医药
Cath-D是一种雄激素介导的酸性溶酶体蛋白水解酶，分子量为5 200。国外许多学者研究发现它能刺激癌细胞生长，参与肿瘤转移，与肿瘤分级、分期及预后相关。
Myers等〔2〕研究发现Cath-D与前列腺癌的大小、是否有转移呈正相关，可作为预测预后的指标。Jeffreys等〔3〕采用胞浆分析法研究发现Cath-D可作为前列腺癌浸润与转移的标记，得出了与Myers等相似的结论。许良中等〔4〕对277例乳腺癌资料进行研究，发现Cath-D高表达与肿瘤淋巴转移相关。Budihna等〔5〕测定头颈部原发癌和间质中胞浆Cathepsin B、H、L、D的含量，发现其在肿瘤细胞胞质中含量高于间质细胞。Resta等〔6〕研究喉癌时发现Cath-D强性表达多出现在巨噬细胞周围和肿瘤细胞内，其对喉鳞状上皮细胞生长和致癌性起了一定作用。Stonlake等认为浸润能力强的肿瘤可能伴有巨噬细胞和肿瘤细胞对Cath-D的高表达。大量研究表明，Cath-D能够刺激肿瘤细胞生长和溶解细胞外基质。我们通过对85例膀胱癌的研究也发现Cath-D多表达于血管旁近基底膜处的肿瘤细胞；而正常膀胱移行细胞无表达，这亦说明其可能参与细胞外基质的降解。我们通过对Cath-D与膀胱癌分级、分期关系的研究，发现其表达与分期无关而与分级呈正相关，即Cath-D表达越高，肿瘤细胞分级越高，分化程度越差，恶性度越高。本组结果提示Cath-D参与膀胱癌细胞的分化，可作为细胞恶性程度的指标。
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参考文献
[1]Hawkins R A,Tesdale A L.Prospective evaluation of prognostic factors in operable breast cancer.Br J Cancer,1996,Nov,74:1469～1473
[2]Myers R B,Grizzle W E.Biomarker expression in prost atic intraepithelial neoplasia.Eur Urol,1996,30:153～158
[3]Jeffreys S,Tipu N.Quantitative immunohistochemical determination of cathepsin D levels inprostic carcinoma biopsies.Corralation with tumor grade,stage,DSA level and DNA ploidy stutus.Am J Clin Pathlol,1995,104:36～39
, 百拇医药
[4]许良中，沈镇宙.组织蛋白酶D、C-erbB-2和表皮生长因子受体在乳腺癌组织中的表达及其与淋巴结转移的关系.中华肿瘤杂志，1995，17：60～62
[5]Budihna M,Strojan P.Prognostic value of cathepsin B,H,L,D and their endogenous inhibitors stefin A and B in head and neck carcinoma.Biol Chem Hoppe Seyler,1996,377:385～389
[6]Resta L,Fiorella R.Cathepsin D in laryngeal carci-noma,prelimiminary report.Bell Soc Ital Biol Sper,1995,71:257～260
收稿 1999-03-09, 百拇医药