盐酸四环素在根管治疗术中用药的组织实验研究
作者：刘牧菲 栗原英见
单位：刘牧菲(中山医科大学口腔医学院，广东 广州 710032)；栗原英见(广岛大学齿学部第二保存科，日本 广岛)
关键词：盐酸四环素；根管治疗术；荧光染色
牙体牙髓牙周病学杂志000408 [摘 要]目的：用组织化学和动物实验方法观察盐酸四环素根管给药后局部组织的反应，探讨其作为根管治疗术用药的前景。方法：荧光显微镜观察。结果：经盐酸四环素处理的根管，近髓端1/3～1/2处的牙本质小管可见四环素特有的荧光染色像。动物实验各期置入体及其周围组织中均可见四环素荧光染色像。结论：盐酸四环素可作为感染根管、牙髓、根尖周等疾病的局部治疗用药。
[中图号]R781.05 [文献标识码]A
[文章编号]1005-2593(2 000)04-0212-03
, http://www.100md.com
A histologic and experimental study on tetracycline as a treatment in root canal therapy
LIU Mu-Fei,Kurihara H
(Stomatology Faculty of Sun Tat Sen University,Guangzhou 510060,China)
[Abstract]AIM:To observe the reaction of the topical tissue by using tetracycline-HCI as a root canal treatment and discuss the future of tetracycline in that treatment.Methods:Fluorescence microscope observations.Results:The fluorescent stain of tetracycline was found in the dentinal tubule near pulp 1/3～1/2 from the root canal and in all the implants.Conclusion:It is suggested that tetracycline-HCI is a local remedy for diseased root canal,dental pulp and apical periodontitis etc.
, 百拇医药
[Key words]tetracycline-hydrochloride；root canal therapy；fluorescent stain
本世纪40年代四环素族开始用于临床。目前在我国已近淘汰，但该药在牙周病治疗领域的研究仍在不断深入进行，也被视为治疗牙周病的首选用药。四环素除了具有抗菌、改变牙周袋中菌群结构等作用外，它还有抑制胶原酶活性、预防组织破坏等作用[1]。另外，它还是螯合剂，牙周袋内给药后，部分药螯合在局部硬组织上，然后 缓慢地向周围组织释放，在局部形成长期高浓度状态，发挥长效抗菌作用[2]。临床上使用的是带盐酸基团的四环素，因此，有人将它们作为根面脱钙剂来研究使用[3]。它不仅能除去根面的涂层，还能除去牙本质前置小管的矿化物，使有机物(如Ⅰ型胶原)暴露并降解[4]。笔者等在做盐酸四环素局部根面处理的实验中也观察到：四环素能进入牙本质小管，并在其中停留较长时间[5，6]。为了从组织形态上进一步了解该药经根管给药后的渗透状态、持续时间以及缓释作用，本研究采用硬组织研究法[7]，通过荧光显微镜观察药物渗透部位、深度及药物在生物体内停留时间、缓释作用。为探讨四环素类药物在根管治疗术中的作用机制提供实验依据。
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1 材料和方法
1.1 实验1
取成人离体牙(尖牙、前磨牙各1)，按常规根管预备后，用棉捻浸蘸配制的盐酸四环素放 入根管中，留置5min后取出，用生理盐水冲洗，乙醇固定，树脂包埋，置入60℃恒温箱中，待固化后分别做50μm的冠状及矢状研磨片，用落射荧光显微镜观察并做同步同条件荧光显 微摄影。
1.2 实验2
实验动物用wistar雄性大鼠25只，8周龄(约250g)(广岛大学动物实验中心提供)。将成人离体牙根部切割成1mm×1mm×3mm的块。用青霉素G液(100mg/L)浸泡5min，约12h取出，将此材料分为2组，一组用盐酸四环素浸泡，二组用生理盐水浸泡5min，两组材 料均用PBS充分洗净、备用。将处理后的材料分别置入大鼠上颌左右第一磨牙近中根 处。左侧置入用生理盐水处理的材料作对照组，缝合创口。于术后3、7、14、28、56d分别 处死，每组5只，手术局部取材，固定于100ml/L福尔马林液中，经树脂包埋后，做研磨标本 ，行荧光显微镜观察。
, 百拇医药
2 结果
从矢状切面观察经盐酸四环素处理的根管可见到四环素特有的荧光染色像，距根管 壁较远 端的牙本质小管中也可见到四环素的荧光染色像，它与另一侧未用四环素处理的根管形成鲜 明对比(图1)。经盐酸四环素处理的牙片，术后3d可见，四环素吸附在牙本质小管上，牙片 周围置入床组织中也可观察到散在的荧光染色像(图2)，对照组则无此像。术后7、14、28 、56d各组，与3d的结果相同。
图1 经盐酸四环素处理的根管可观察到四环素特有的荧光染色像，在距根 管壁较远端的牙本质小管中也可观察到四环素的荧光染色像，未处理侧根管无此像 ×4
图2 术后3d可见四环素吸附在牙本质小管上，牙片周围组织床中也可观察到散在的荧光染色像(B：牙槽骨，D：牙片) ×10
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3 讨论
根管治疗术是当前国内外治疗感染根管、牙髓、根尖周等疾病的主要方法。它是以外科手段 来治疗局部感染，包括彻底去除主根管中的感染物和去除感染的牙本质，根管预备、药物消 毒、严密充填等[8]。然而根管系统很复杂，如副根管、侧支根管、根管变异 以及增龄变化引起的根管狭窄等。因此，根管处理很难达到根管系统的所有部位，遗留在根 管系统中的细菌和残余牙髓组织等可能成为根管治疗术失败的主要原因。另外，在完成根管 治疗术的各步骤中，不但要求术者具备熟练准确的技术，而且在操作过程中手续繁多，费时 费力，复诊次数多，疗程长，也有个别特殊患牙要作根管治疗术十分困难，甚至不可能做到[9]。
目前，国内外部分学者对治疗牙体、牙髓病是否一定要用根管治疗术这一问题提出质疑[10]。鉴于我国目前的状况，根管治疗术难以在中小城市普及。另外，频繁使用根管锯 、锉对仍有再生能力的组织也是一种医源性损害。加上操作者若不能熟练掌握技术，常常导 致感染物压出根尖孔、侧穿、超填、欠填、器械断入根管，甚至将器械掉入食管、气管等。基于以上种种原因，临床工作者常采用根管酚醛树脂液体充填根管和空管治疗等方法。
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盐酸四环素在临床上使用多年，它不带免疫源，没有免疫反应，渗透能力强，不仅能渗透到 较远端的牙本质小管，而且能与髓腔表面的硬组织螯合并保持相当长的一段时间，与此同时 ，它还能从螯合表面缓慢地向周围组织释放，如同一药物缓释体。四环素不仅能通过牙本质 小管到达牙本质深部，还能进入侧支根管，对根尖组织无刺激性。最近有人将四环素用于根 面龋的治疗研究，用它抑制胶原酶活性来预防根面龋的发生、发展[11]。因此，我 们考虑将该药用于根管内做消毒及缓释药，它将渗入牙本质小管，直接与局部组织中羟基磷 灰石的正磷酸盐发生化学螯合反应，形成一种新的物质结构——四环素正磷酸盐复合体(Tetracycline-orthophosphate complex)[9]，从而改变局部微环境即细菌的滋生环境。由于它的pH值低，具有脱矿性质，能将根管中感染硬组织软化，利于用根管锯除去。参考国外有用四环素类做根面龋治疗的研究报道，我们考虑此方法可用于成人后牙根管治疗术。
基金项目：国家教委留学回国人员启动基金；广东省科学基金
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参考文献：
[1]Seymour RA,Heasman PA.Tetracyclines in the management of periodontal diseases：A review[J].J Clin Periodontol,1995,22(1):22
[2]Baker PJ,Evans RT,Coburn RA,et al.Tetracycline and its derivatives strongly bind to and are released from the tooth surface in active form[J].J Periodontol,1983,54(10):580
[3]刘牧菲，栗原英见.不同酸处理根面的组织学比较[J].华西口腔医学杂志，1999，17(3)：230
, 百拇医药 [4]Lafferty TA,Gher ME,Gray JL.Comparative SEM study on the effect of a cid etching with tetracycline HCI or citric acid on instrumented periodontally-involved human root surfaces[J].J Periodontol,1993,64(8):689
[5]刘牧菲.盐酸テトラサイクリン处理レた象牙质移植片周围の骨组织形成に关する组织学的研究[J].广岛大学齿学杂志，1997，29：70
[6]李卫东，王光华，肖明振.猴牙尖周病空管药物疗法的实验研究[J].实用口腔医学杂志，1986，2：18
[7]永井教之.骨齿牙组织の病理检查法と研究の实际[M].学际企画(株),199 1.159
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[8]福地芳则，长田保，砂田今男，编集.齿内治疗学[C].日本东京：医齿药出版株式会社，1988.193
[9]北京医学院口腔医学系口腔内科教研组.牙髓塑化治疗的临床研究[J].中华口腔科杂志,1979,14(1):30
[10]下野正基.象牙质、牙髓复合体を考えゐ[J].东京都齿科医师会杂志，198 3，43(9)：5
[11]Ramamurthy NS,Schroeder KL,McNamara TF,et al.Root-Surface caries in rats and humans:inhibition by a non-antimicrobial property of tetrac yclines[J].Adv Dent Res,1998,12(2):43
收稿日期：1999-07-05, http://www.100md.com
单位：刘牧菲(中山医科大学口腔医学院，广东 广州 710032)；栗原英见(广岛大学齿学部第二保存科，日本 广岛)
关键词：盐酸四环素；根管治疗术；荧光染色
牙体牙髓牙周病学杂志000408 [摘 要]目的：用组织化学和动物实验方法观察盐酸四环素根管给药后局部组织的反应，探讨其作为根管治疗术用药的前景。方法：荧光显微镜观察。结果：经盐酸四环素处理的根管，近髓端1/3～1/2处的牙本质小管可见四环素特有的荧光染色像。动物实验各期置入体及其周围组织中均可见四环素荧光染色像。结论：盐酸四环素可作为感染根管、牙髓、根尖周等疾病的局部治疗用药。
[中图号]R781.05 [文献标识码]A
[文章编号]1005-2593(2 000)04-0212-03
, http://www.100md.com
A histologic and experimental study on tetracycline as a treatment in root canal therapy
LIU Mu-Fei,Kurihara H
(Stomatology Faculty of Sun Tat Sen University,Guangzhou 510060,China)
[Abstract]AIM:To observe the reaction of the topical tissue by using tetracycline-HCI as a root canal treatment and discuss the future of tetracycline in that treatment.Methods:Fluorescence microscope observations.Results:The fluorescent stain of tetracycline was found in the dentinal tubule near pulp 1/3～1/2 from the root canal and in all the implants.Conclusion:It is suggested that tetracycline-HCI is a local remedy for diseased root canal,dental pulp and apical periodontitis etc.
, 百拇医药
[Key words]tetracycline-hydrochloride；root canal therapy；fluorescent stain
本世纪40年代四环素族开始用于临床。目前在我国已近淘汰，但该药在牙周病治疗领域的研究仍在不断深入进行，也被视为治疗牙周病的首选用药。四环素除了具有抗菌、改变牙周袋中菌群结构等作用外，它还有抑制胶原酶活性、预防组织破坏等作用[1]。另外，它还是螯合剂，牙周袋内给药后，部分药螯合在局部硬组织上，然后 缓慢地向周围组织释放，在局部形成长期高浓度状态，发挥长效抗菌作用[2]。临床上使用的是带盐酸基团的四环素，因此，有人将它们作为根面脱钙剂来研究使用[3]。它不仅能除去根面的涂层，还能除去牙本质前置小管的矿化物，使有机物(如Ⅰ型胶原)暴露并降解[4]。笔者等在做盐酸四环素局部根面处理的实验中也观察到：四环素能进入牙本质小管，并在其中停留较长时间[5，6]。为了从组织形态上进一步了解该药经根管给药后的渗透状态、持续时间以及缓释作用，本研究采用硬组织研究法[7]，通过荧光显微镜观察药物渗透部位、深度及药物在生物体内停留时间、缓释作用。为探讨四环素类药物在根管治疗术中的作用机制提供实验依据。
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1 材料和方法
1.1 实验1
取成人离体牙(尖牙、前磨牙各1)，按常规根管预备后，用棉捻浸蘸配制的盐酸四环素放 入根管中，留置5min后取出，用生理盐水冲洗，乙醇固定，树脂包埋，置入60℃恒温箱中，待固化后分别做50μm的冠状及矢状研磨片，用落射荧光显微镜观察并做同步同条件荧光显 微摄影。
1.2 实验2
实验动物用wistar雄性大鼠25只，8周龄(约250g)(广岛大学动物实验中心提供)。将成人离体牙根部切割成1mm×1mm×3mm的块。用青霉素G液(100mg/L)浸泡5min，约12h取出，将此材料分为2组，一组用盐酸四环素浸泡，二组用生理盐水浸泡5min，两组材 料均用PBS充分洗净、备用。将处理后的材料分别置入大鼠上颌左右第一磨牙近中根 处。左侧置入用生理盐水处理的材料作对照组，缝合创口。于术后3、7、14、28、56d分别 处死，每组5只，手术局部取材，固定于100ml/L福尔马林液中，经树脂包埋后，做研磨标本 ，行荧光显微镜观察。
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2 结果
从矢状切面观察经盐酸四环素处理的根管可见到四环素特有的荧光染色像，距根管 壁较远 端的牙本质小管中也可见到四环素的荧光染色像，它与另一侧未用四环素处理的根管形成鲜 明对比(图1)。经盐酸四环素处理的牙片，术后3d可见，四环素吸附在牙本质小管上，牙片 周围置入床组织中也可观察到散在的荧光染色像(图2)，对照组则无此像。术后7、14、28 、56d各组，与3d的结果相同。
图1 经盐酸四环素处理的根管可观察到四环素特有的荧光染色像，在距根 管壁较远端的牙本质小管中也可观察到四环素的荧光染色像，未处理侧根管无此像 ×4
图2 术后3d可见四环素吸附在牙本质小管上，牙片周围组织床中也可观察到散在的荧光染色像(B：牙槽骨，D：牙片) ×10
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3 讨论
根管治疗术是当前国内外治疗感染根管、牙髓、根尖周等疾病的主要方法。它是以外科手段 来治疗局部感染，包括彻底去除主根管中的感染物和去除感染的牙本质，根管预备、药物消 毒、严密充填等[8]。然而根管系统很复杂，如副根管、侧支根管、根管变异 以及增龄变化引起的根管狭窄等。因此，根管处理很难达到根管系统的所有部位，遗留在根 管系统中的细菌和残余牙髓组织等可能成为根管治疗术失败的主要原因。另外，在完成根管 治疗术的各步骤中，不但要求术者具备熟练准确的技术，而且在操作过程中手续繁多，费时 费力，复诊次数多，疗程长，也有个别特殊患牙要作根管治疗术十分困难，甚至不可能做到[9]。
目前，国内外部分学者对治疗牙体、牙髓病是否一定要用根管治疗术这一问题提出质疑[10]。鉴于我国目前的状况，根管治疗术难以在中小城市普及。另外，频繁使用根管锯 、锉对仍有再生能力的组织也是一种医源性损害。加上操作者若不能熟练掌握技术，常常导 致感染物压出根尖孔、侧穿、超填、欠填、器械断入根管，甚至将器械掉入食管、气管等。基于以上种种原因，临床工作者常采用根管酚醛树脂液体充填根管和空管治疗等方法。
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盐酸四环素在临床上使用多年，它不带免疫源，没有免疫反应，渗透能力强，不仅能渗透到 较远端的牙本质小管，而且能与髓腔表面的硬组织螯合并保持相当长的一段时间，与此同时 ，它还能从螯合表面缓慢地向周围组织释放，如同一药物缓释体。四环素不仅能通过牙本质 小管到达牙本质深部，还能进入侧支根管，对根尖组织无刺激性。最近有人将四环素用于根 面龋的治疗研究，用它抑制胶原酶活性来预防根面龋的发生、发展[11]。因此，我 们考虑将该药用于根管内做消毒及缓释药，它将渗入牙本质小管，直接与局部组织中羟基磷 灰石的正磷酸盐发生化学螯合反应，形成一种新的物质结构——四环素正磷酸盐复合体(Tetracycline-orthophosphate complex)[9]，从而改变局部微环境即细菌的滋生环境。由于它的pH值低，具有脱矿性质，能将根管中感染硬组织软化，利于用根管锯除去。参考国外有用四环素类做根面龋治疗的研究报道，我们考虑此方法可用于成人后牙根管治疗术。
基金项目：国家教委留学回国人员启动基金；广东省科学基金
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参考文献：
[1]Seymour RA,Heasman PA.Tetracyclines in the management of periodontal diseases：A review[J].J Clin Periodontol,1995,22(1):22
[2]Baker PJ,Evans RT,Coburn RA,et al.Tetracycline and its derivatives strongly bind to and are released from the tooth surface in active form[J].J Periodontol,1983,54(10):580
[3]刘牧菲，栗原英见.不同酸处理根面的组织学比较[J].华西口腔医学杂志，1999，17(3)：230
, 百拇医药 [4]Lafferty TA,Gher ME,Gray JL.Comparative SEM study on the effect of a cid etching with tetracycline HCI or citric acid on instrumented periodontally-involved human root surfaces[J].J Periodontol,1993,64(8):689
[5]刘牧菲.盐酸テトラサイクリン处理レた象牙质移植片周围の骨组织形成に关する组织学的研究[J].广岛大学齿学杂志，1997，29：70
[6]李卫东，王光华，肖明振.猴牙尖周病空管药物疗法的实验研究[J].实用口腔医学杂志，1986，2：18
[7]永井教之.骨齿牙组织の病理检查法と研究の实际[M].学际企画(株),199 1.159
, http://www.100md.com
[8]福地芳则，长田保，砂田今男，编集.齿内治疗学[C].日本东京：医齿药出版株式会社，1988.193
[9]北京医学院口腔医学系口腔内科教研组.牙髓塑化治疗的临床研究[J].中华口腔科杂志,1979,14(1):30
[10]下野正基.象牙质、牙髓复合体を考えゐ[J].东京都齿科医师会杂志，198 3，43(9)：5
[11]Ramamurthy NS,Schroeder KL,McNamara TF,et al.Root-Surface caries in rats and humans:inhibition by a non-antimicrobial property of tetrac yclines[J].Adv Dent Res,1998,12(2):43
收稿日期：1999-07-05, http://www.100md.com