高效液相色谱法测定胃得康散中延胡索乙素含量
作者：杨天展
单位：杨天展(广东省佛山市制药一厂 528000)
关键词：HPLC；胃得康散；延胡索；延胡索乙素
时珍国医国药000126 提 要：用HPLC法测定胃得康散中的延胡索乙素。用十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，以甲醇-水(69∶31)，以磷酸氢二钠溶液调 pH 8.5为流动相，于280 nm处紫外检测；并进行了线性范围，回收试验和稳定性试验。测定了3个批号的样品。该法可用于含延胡索药材的中成药中延胡索乙素的含量测定。
中图分类号：R284.2 文献标识码：A
文章编号：1008-0805(2000)01-0031-01▲
胃得康散为我厂80年代研制的新药，由延胡索、鸡骨香、石菖蒲、白及等6味中药组成，有止痛、止血、帮助溃疡面愈合的作用，用于胃痛、胃及十二指肠溃疡[1]。广东省药品标准已收载该药，但没有含量测定项。本文用高效液相色谱法测定胃得康散中延胡索的含量。该法准确，可靠，重现性好。
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1 仪器与试剂
美国Varian高效液相色谱仪；9010泵；9050紫外可见光检测器。延胡索乙素(由中国药品生物制品检定所提供)，延胡索药材、胃得康散(由佛山市制药一厂提供)；水为二次重蒸馏水，其它试剂均为分析纯。
2 色谱条件
Varian C18色谱柱(300×40 mm)。流动相：甲醇-水(69∶31)；用磷酸氢二钠调 pH为8.5；检测波长：280 nm；柱温：25℃；流速：1.5 ml/min。
3 线性范围和回收试验
3.1 对照品贮备液的制备：精密称取延胡索乙素25 mg，置100 ml容量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀。
3.2 线性试验：分别取对照品贮备液1，2，4，6，8 ml，置10 ml容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，浓度分别为25，50，100，150，200 μg/ml，摇匀。在选定的色谱条件下分别进样10 μl，记录各色谱峰面积，以延胡索乙素的浓度为 x，峰面积为 y，求得回归方程为： y=422 007 x-8 362； γ=0.999 4。
, 百拇医药
3.3 回收试验：精密量取“含量测定”项下的供试品溶液0.5 ml，置7个1 ml的容量瓶中，依次加入延胡素乙素对照贮备液0.00，0.10，0.15，0.25，0.30，0.40，0.50 ml，用甲醇稀释至刻度，摇匀，按样品测定项下方法进行加样回收试验，测得平均回收率为100.05%。RSD为2.3%( n=6)。结果见表1。
4 精密度和稳定性试验
取制备好的样品溶液重复进样5次，峰面积不变， RSD=1.5%( n=5)。取同一份样品溶液分别在0，4，8 h进样测定，峰面积基本不变，RSD为1.6%。
5 样品测定
取供试品约2 g，精密称定，装入小滤纸筒中，置回流瓶中，加入80%乙醇提取3次，每次加40 ml，回流30 min，合并回流液，挥去乙醇至近干，残渣加入水30 ml使溶解，移入分漏斗中，用稀HCl调 pH 1～2，用石油醚(60～90℃)提取2次，20 ml/次，弃去石油醚，水溶液用浓氨水调 pH 约10，用石油醚(60～90℃)提取4次，30 ml/次，合并提取液，水洗2次，15 ml/次，弃去水洗液，分取石油醚提取液，置水浴上挥干，残渣用甲醇溶解并定溶于2 ml量瓶中，摇匀，取10 μl注入HPLC，结果见表2。
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表1 加样回收试验结果 样品量
m/μg
加入对照品量
m/μg
样品量+对照品量
m/μg
回收率
(%)
平均回收率
(%)
RSD
(%)
25.0
, 百拇医药
67.00
99.80
37.5
80.27
101.90
42.05
62.5
102.92
97.39
100.05
2.3
75.0
115.41
, 百拇医药
97.81
100.0
142.00
99.95
125.0
171.45
103.50
表2 样品测定结果 批 号
延胡索乙素含量 C/μg.g-1
RSD
(%)
, http://www.100md.com
930103
56.0
2.5
940208
58.6
2.0
940216
59.5
1.6
6 讨论
6.1 流动相 pH 的选择及固定相：为使延胡索乙素达到较好的分离效果，考虑到不同 pH 值如：8.0，8.5，8.7，9.0等进行比较，认为 pH 值8.5其峰形、分离度、出峰时间等较为理想，选择了十八烷基硅烷键合硅胶为固定相。样品分离情况见图1。
, 百拇医药
图1 胃得康散色谱图
A.延胡索乙素 B.样品
6.2 流动相甲醇与水的比例选择：为寻找更好的甲醇-水的比例，我们选择了60∶40，65∶35，67∶33，68∶32，69∶31，70∶30等多种比例，实验证明甲醇-水(69∶31)比例较佳。
6.3 检测波长的选择：用甲醇溶解适量的延胡索乙素对照品作为供试液，用紫外分光光度法进行200～400 nm范围扫描，在281 nm处有最大吸收峰。与文献记载其最大吸收峰在280 nm处相近[2]，为使检测波长在使用时达到统一，而又不影响测定结果，且又便于记忆，故将测定波长定于280 nm处。
6.4 关于延胡索药材中延胡索乙素的含量测定，以往多采用薄层扫描法测定，本品曾尝试用薄层扫描法、紫外分光光度法等方法测定，但由于有些性质相近的成分干扰，经选择多种提取分离方法(如：中性氧化铝、硅胶等柱层析，液-液萃取等方法)，但均未取得满意的效果。本品采用高效液相色谱法测定延胡索乙素，测定结果稳定、可靠、重现性好，测定的结果也基本反映药品的内在质量，可以作为含延胡索药材的中成药中延胡索乙素的含量测定。■
作者简介：杨天展(1964-)，男(汉族)，广东普宁人，中国药科大学药剂专业毕业，现任广东佛山市制药一厂工程师，执业药师，学士学位.
参考文献：
[1]广东省卫生厅.广东省药品标准[S].1987年版∶353
[2]沙世炎，徐礼 ，严敏如，等.中草药有效成分分析法，上册[M].56
收稿日期：1999-06-28；
修订日期：1999-10-13；, http://www.100md.com
单位：杨天展(广东省佛山市制药一厂 528000)
关键词：HPLC；胃得康散；延胡索；延胡索乙素
时珍国医国药000126 提 要：用HPLC法测定胃得康散中的延胡索乙素。用十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，以甲醇-水(69∶31)，以磷酸氢二钠溶液调 pH 8.5为流动相，于280 nm处紫外检测；并进行了线性范围，回收试验和稳定性试验。测定了3个批号的样品。该法可用于含延胡索药材的中成药中延胡索乙素的含量测定。
中图分类号：R284.2 文献标识码：A
文章编号：1008-0805(2000)01-0031-01▲
胃得康散为我厂80年代研制的新药，由延胡索、鸡骨香、石菖蒲、白及等6味中药组成，有止痛、止血、帮助溃疡面愈合的作用，用于胃痛、胃及十二指肠溃疡[1]。广东省药品标准已收载该药，但没有含量测定项。本文用高效液相色谱法测定胃得康散中延胡索的含量。该法准确，可靠，重现性好。
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1 仪器与试剂
美国Varian高效液相色谱仪；9010泵；9050紫外可见光检测器。延胡索乙素(由中国药品生物制品检定所提供)，延胡索药材、胃得康散(由佛山市制药一厂提供)；水为二次重蒸馏水，其它试剂均为分析纯。
2 色谱条件
Varian C18色谱柱(300×40 mm)。流动相：甲醇-水(69∶31)；用磷酸氢二钠调 pH为8.5；检测波长：280 nm；柱温：25℃；流速：1.5 ml/min。
3 线性范围和回收试验
3.1 对照品贮备液的制备：精密称取延胡索乙素25 mg，置100 ml容量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀。
3.2 线性试验：分别取对照品贮备液1，2，4，6，8 ml，置10 ml容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，浓度分别为25，50，100，150，200 μg/ml，摇匀。在选定的色谱条件下分别进样10 μl，记录各色谱峰面积，以延胡索乙素的浓度为 x，峰面积为 y，求得回归方程为： y=422 007 x-8 362； γ=0.999 4。
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3.3 回收试验：精密量取“含量测定”项下的供试品溶液0.5 ml，置7个1 ml的容量瓶中，依次加入延胡素乙素对照贮备液0.00，0.10，0.15，0.25，0.30，0.40，0.50 ml，用甲醇稀释至刻度，摇匀，按样品测定项下方法进行加样回收试验，测得平均回收率为100.05%。RSD为2.3%( n=6)。结果见表1。
4 精密度和稳定性试验
取制备好的样品溶液重复进样5次，峰面积不变， RSD=1.5%( n=5)。取同一份样品溶液分别在0，4，8 h进样测定，峰面积基本不变，RSD为1.6%。
5 样品测定
取供试品约2 g，精密称定，装入小滤纸筒中，置回流瓶中，加入80%乙醇提取3次，每次加40 ml，回流30 min，合并回流液，挥去乙醇至近干，残渣加入水30 ml使溶解，移入分漏斗中，用稀HCl调 pH 1～2，用石油醚(60～90℃)提取2次，20 ml/次，弃去石油醚，水溶液用浓氨水调 pH 约10，用石油醚(60～90℃)提取4次，30 ml/次，合并提取液，水洗2次，15 ml/次，弃去水洗液，分取石油醚提取液，置水浴上挥干，残渣用甲醇溶解并定溶于2 ml量瓶中，摇匀，取10 μl注入HPLC，结果见表2。
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表1 加样回收试验结果 样品量
m/μg
加入对照品量
m/μg
样品量+对照品量
m/μg
回收率
(%)
平均回收率
(%)
RSD
(%)
25.0
, 百拇医药
67.00
99.80
37.5
80.27
101.90
42.05
62.5
102.92
97.39
100.05
2.3
75.0
115.41
, 百拇医药
97.81
100.0
142.00
99.95
125.0
171.45
103.50
表2 样品测定结果 批 号
延胡索乙素含量 C/μg.g-1
RSD
(%)
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930103
56.0
2.5
940208
58.6
2.0
940216
59.5
1.6
6 讨论
6.1 流动相 pH 的选择及固定相：为使延胡索乙素达到较好的分离效果，考虑到不同 pH 值如：8.0，8.5，8.7，9.0等进行比较，认为 pH 值8.5其峰形、分离度、出峰时间等较为理想，选择了十八烷基硅烷键合硅胶为固定相。样品分离情况见图1。
, 百拇医药
图1 胃得康散色谱图
A.延胡索乙素 B.样品
6.2 流动相甲醇与水的比例选择：为寻找更好的甲醇-水的比例，我们选择了60∶40，65∶35，67∶33，68∶32，69∶31，70∶30等多种比例，实验证明甲醇-水(69∶31)比例较佳。
6.3 检测波长的选择：用甲醇溶解适量的延胡索乙素对照品作为供试液，用紫外分光光度法进行200～400 nm范围扫描，在281 nm处有最大吸收峰。与文献记载其最大吸收峰在280 nm处相近[2]，为使检测波长在使用时达到统一，而又不影响测定结果，且又便于记忆，故将测定波长定于280 nm处。
6.4 关于延胡索药材中延胡索乙素的含量测定，以往多采用薄层扫描法测定，本品曾尝试用薄层扫描法、紫外分光光度法等方法测定，但由于有些性质相近的成分干扰，经选择多种提取分离方法(如：中性氧化铝、硅胶等柱层析，液-液萃取等方法)，但均未取得满意的效果。本品采用高效液相色谱法测定延胡索乙素，测定结果稳定、可靠、重现性好，测定的结果也基本反映药品的内在质量，可以作为含延胡索药材的中成药中延胡索乙素的含量测定。■
作者简介：杨天展(1964-)，男(汉族)，广东普宁人，中国药科大学药剂专业毕业，现任广东佛山市制药一厂工程师，执业药师，学士学位.
参考文献：
[1]广东省卫生厅.广东省药品标准[S].1987年版∶353
[2]沙世炎，徐礼 ，严敏如，等.中草药有效成分分析法，上册[M].56
收稿日期：1999-06-28；
修订日期：1999-10-13；, http://www.100md.com